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植物雌激素与器官纤维化的研究
长期应用激素替代治疗(ERT)所带来的危险性相对增加,天然的植物雌激素作为一种甾体激素以外的性激素替代物引起了人们的广泛关注.研究表明,植物雌激素在改善围绝经期症状、降低血脂水平、防止骨质疏松、预防尿失禁等方面有着有益作用,并且对于动脉粥样硬化、肾脏纤维化、肝纤维化有预防作用.由于其临床应用不良反应小,相信其在疾病的防治方面有着更广阔的临床应用前景.现就植物雌激素与器官纤维化的研究进展综述如下.
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中医药对肾纤维化的保护作用研究
肾纤维化是肾脏在各种致病因子如炎症、损伤等作用下的病理修复反应，以细胞外基质成分在肾脏过度增生与沉积为特征，是各种慢性肾脏疾病（chronic kidney disease，CKD）的共同病理进程，也是决定CKD发展和预后的重要因素。近年来，中医学在肾纤维化的治疗中获得了一定成效。本人收集相关文献对中医药抗肾脏纤维化的有效性及可能机制做一概述。
1中医对CKD肾纤维化病因病机的认识
肾纤维化按其临床症状表现及病情发生发展过程，在“腰痛”“尿血”“关格”“癃闭”“肾劳”“肾风”“溺毒”等病证中均有体现，其病因病机概况为以下观点。 -
加味黄芪赤风汤对小鼠系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响
目的：观察加味黄芪赤风汤对脂多糖（LPS）刺激的肾小球系膜细胞（GMC）增殖及细胞外基质分泌的影响，探讨其在防治肾脏纤维化中的机制。方法采用血清药理学方法，以 LPS 作为刺激因子，以 CCK -8法、MTT 法检测含药血清对 GMC 的毒性作用，并动态观察在各种处理因素的作用下，GMC 的增殖情况；酶联免疫法吸附试验（ELISA）测定细胞外基质（ECM）即：层粘连蛋白（LN）、IV 型胶原（Col - IV）、纤维连接蛋白（FN）的分泌。结果与正常组比较，各含药血清对 GMC 无毒性作用（P ﹥0.05），LPS 能刺激体外培养的 GMC 增殖，0.625~80μg/ ml LPS 组与正常组比较，细胞增殖差异有统计学意义（P ﹤0.05，P ﹤0.01）；加味黄芪赤风汤组在24 h、48 h、72 h 对 LPS 刺激的 GMC 增殖都有抑制作用，且24 h 各组抑制率高；在某个固定的时间点中药各组抑制率比较，中剂量组与高剂量组比较，差异无统计学意义（ P ﹥0.05），中剂量组与低剂量组比较，差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。在对 ECM 的影响中，72 h 较模型组比较，加味黄芪赤风汤高剂量组中 Col -Ⅳ、FN 的含量明显减少（P ﹤0.01），而 LN 含量变化不明显；中剂量组中 Col -Ⅳ、FN、LN 的含量均明显减少（ P ﹤0.01）；低剂量组仅有 FN 含量减少（P ﹤0.01），而 Col -Ⅳ、LN 含量变化不明显。结论加味黄芪赤风汤能显著抑制 LPS 刺激下 GMC 的增殖，减少 ECM 的分泌，说明 GMC 是加味黄芪赤风汤防治肾脏纤维化作用的重要靶细胞。
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益气祛风通络饮对阿霉素大鼠肾脏纤维化的拮抗作用和对肾组织细胞自噬的调节作用
目的 观察益气祛风通络饮对肾脏纤维化相关指标纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)和自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠40只,其中以30只为造模组,采用单次尾静脉注射阿霉素造模,造模成功后随机分为模型组、替米沙坦组及益气祛风通络饮组,每组各10只,分别予生理盐水、替米沙坦混悬液及益气祛风通络饮水煎剂灌胃治疗;以10只为空白组,予生理盐水灌胃.实验结束后于光镜下行肾组织病理学观察,采用免疫组化法检测FN、LN、LC3和Beclin-1的表达及分布.结果 (1)与模型组比较,益气祛风通络饮组大鼠在第4~8周24 h尿蛋白定量均明显下降(P<0.05);与替米沙坦组比较,两组差异无统计学意义(P>0.05).(2)肾组织病理:与模型组比较,益气祛风通络饮组及替米沙坦组肾脏组织损伤均有不同程度的减轻.(3)肾组织中FN、LN的表达:与空白组比较,模型组肾组织中FN、LN表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,益气祛风通络饮组肾组织中FN、LN表达水平显著降低(P<0.05);益气祛风通络饮组与替米沙坦组比较,肾组织中FN、LN表达水平差异无统计学意义(P>0.05).(4)肾组织中LC3、Beclin-1的表达:与空白组比较,模型组肾组织中LC3、Beclin-1表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,益气祛风通络饮组肾组织中LC3、Beclin-1表达水平显著降低(P<0.05);益气祛风通络饮与替米沙坦组比较,肾组织中LC3、Beclin-1表达水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 益气祛风通络饮能够降低阿霉素大鼠蛋白尿,其对肾脏病理具有改善作用,可能是通过下调肾组织中FN、LN的表达水平和拮抗自噬相关蛋白Beclin-1、LC3的过度表达而实现.
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健脾固肾化瘀组方联合雷公藤多苷片对临床期糖尿病肾病临床疗效及肾脏纤维化指标的影响
目的:观察健脾固肾化瘀组方治疗临床期糖尿病肾病患者的临床疗效以及其对肾脏纤维化相关指标的影响.方法:选取2015年12月至2016年12月沧州中西医结合医院门诊及病房的临床期糖尿病肾病患者100例,随机平均分为2组,对照组50例患者在常规治疗的基础上加用雷公藤多苷片(20 mg/次,口服,3次/d)治疗,观察组50例患者在对照组治疗的基础上加用健脾固肾化瘀组方,1次/d,2组患者均以4周为1疗程,治疗3个疗程后统计2组患者的尿蛋白定量、肌酐(Scr)、胱抑素C(CysC)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅳ型胶原(CⅣ)指标以及临床疗效与不良反应.结果:观察组患者治疗后的尿蛋白、Scr、CysC、TIMP-1、TGF-β1、CⅣ明显低于治疗前与对照组治疗后(P<0.05).观察组患者治疗总有效率明显高于对照组(P<0.05).结论:健脾固肾组方联合雷公藤多苷片治疗临床期糖尿病肾病,能够有效降低尿蛋白,还可以有效改善血清肾功能指标与肾脏纤维化指标,具有良好的临床效果.
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糖肾方对db/db小鼠肾脏纤维化的保护作用
目的:观察糖肾方(Tang Shen Fang,TSF)对于自发性2型糖尿病肾病db/db小鼠肾脏纤维化的保护作用.方法:8周龄雄性db／db小鼠随机分为2组,分别为模型组(db／db)和观察组(db／db+TSF),每组9只;8周龄雄性db／m小鼠为正常对照组(db／m),顺应性喂养2周后,给予糖肾方干预12周,处死小鼠,分离小鼠肾脏用于后续检测.利用PAS和Mas－son染色观察肾脏病理;利用Western Blotting、Real－time PCR和免疫组化等技术检测肾脏组织纤维化TGF－β1／Smad3通路以及miRNA21和miRNA29b的表达.结果:糖肾方可以改善db／db小鼠尿微量白蛋白水平,减轻小鼠肾脏损伤;Western Blotting、Real－time PCR和免疫组化结果显示,糖肾方可下调db／db小鼠肾脏中纤维化标志分子TGF－β1、Smad3、CollagenⅠ和Fibronectin的表达;下调db／db小鼠肾脏miRNA 21的表达,上调miRNA 29b的表达.结论:糖肾方可作用于TGF－β1／Smad3信号通路抑制肾脏纤维化.
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芪归益肾方延缓单侧输尿管梗阻小鼠肾脏纤维化进展机制的探讨
目的:利用单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾病模型研究芪归益肾方通过调控细胞信号通路TGF-β/Smad/ILK的表达水平影响肾脏纤维化进展的程度.方法:昆明种小鼠32只,随机分为正常组、模型组、贝那普利组和芪归益肾方组,每组8只,除正常组外,其余各组制备UUO肾病模型后分别进行药物干预,第10天处死后取肾组织,分别采用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肾组织的病理变化,免疫组化观察小鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1),细胞信号转导分子2(Smad2),Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)和整合素连接激酶(ILK)蛋白的表达,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测小鼠肾组织TGF-β1,Col-Ⅰ和ILK mRNA及蛋白的表达情况.结果:与正常组比较,免疫组化结果显示模型组小鼠肾组织TGF-β1,Smad2,Col-Ⅰ,ILK蛋白表达量明显升高,RT-PCR和Western blot检测结果显示小鼠肾组织TGF-β1,Col-Ⅰ和ILK mRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.05),模型组小鼠肾脏纤维化程度较为明显;与模型组比较,贝那普利组和芪归益肾方组治疗后肾脏纤维化程度均有减轻,明显降低小鼠肾组织TGF-β1,Smad2,Col-Ⅰ,ILK蛋白表达,明显降低小鼠肾组织TGF-β1,Col-Ⅰ和ILK mRNA及蛋白的表达(P＜0.05),其中芪归益肾方治疗组比较贝那普利组效果更为明显(P＜0.05).结论:芪归益肾方对于UUO肾病模型的纤维化病变程度具有抑制作用,其作用主要与调控细胞信号通路TGF-β/Smad/ILK表达相关.
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肾衰方改善早中期慢性肾衰竭患者肾功能及纤维化的临床观察
目的:评价肾衰方改善早中期慢性肾衰竭患者肾功能及纤维化的临床疗效,并探讨其作用机制.方法:选取慢性肾脏病3,4期(脾肾气虚、瘀血阻滞型)患者60例,随机分为对照组和治疗组,前者在西医一体化治疗基础上给予氯沙坦钾,后者在前者的基础上加用肾衰方,治疗6个月后,观察两组患者中医证候积分、中医证候疗效、疾病疗效、血红蛋白、肾功能、24 h尿蛋白定量、结缔组织生长因子(CTGF)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)的变化.结果:治疗后,治疗组中医证候疗效、疾病疗效明显优于对照组(P＜0.01),治疗组在降低24 h尿蛋白定量,降低肌酐,提高肾小球滤过率方面优于对照组(P ＜0.05,P＜0.01).两组慢性肾衰竭患者血清CTGF水平均明显降低(P＜0.05),BMP-7水平明显升高(P＜0.05).结论:肾衰方治疗早中期慢性肾衰竭患者较对照组有明显的临床疗效,能减少蛋白尿、改善肾功能、防治肾脏纤维化,其作用机制可能与其下调血清CTGF以及上调BMP-7的表达有关.
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肾脏纤维化的细胞学基础及中医药防治研究进展
各种原发性和继发性肾脏疾病的终结果将导致肾脏纤维化.文章从肾脏纤维化的细胞学基础方面入手,就系膜细胞、肾小球毛细血管内皮细胞、足细胞、肾小管上皮细胞、成纤维细胞在肾间质纤维化中的病理学机制及中医药防治有关的研究进展及现状进行综述.
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核因子在慢性肾脏病中的作用及中医药调控
肾脏纤维化是慢性肾脏病的病理基础,而ECM的异常聚集是肾脏纤维化的主要原因.NF-κB具有影响机体内细胞分化、免疫反应、炎症反应、细胞凋亡等多种细胞功能.TGF-β1作为肾脏纤维化中重要的细胞因子之一,通过调控下游的Smad/ILK信号通路参与ECM聚集.研究证实,NF-κB可以与TGF-ii1发生作用,故就NF-κB通过TGF-β1/Smad信号通路延缓肾脏纤维化进行论述,并对中医药通过NF-κB调控TGF-β1/Smad信号通路达到减缓ECM、延缓肾脏纤维化进展的作用进行论述.
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基于SIRTs/NF-κB信号通路探讨中医药调控及其对慢性肾脏病的治疗机制
慢性肾脏病是不可逆、进行性病变,其发生机制是一非常复杂的病理过程.肾脏纤维化是其直接原因,肾脏纤维化病变的直接原因是细胞外基质异常增生和细胞变性而失去原有功能.在这个过程中细胞外基质的聚集是肾脏纤维化发生的病理学基础,大量的研究显示在肾脏纤维化发生发展过程中某些细胞信号通路具有重要作用.其中转化生长因子-β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)在肾脏纤维化病变进程中对病变的启动和发展过程中的作用极其重要,其功能调控作用可能与SIRTs/NF-κB密切相关.应用芪归益肾方对实验动物的研究中发现,中药方剂对于促纤维化因子TGF-β1有明显抑制调控和抑制细胞外基质作用,其对细胞外基质的作用可能是通过调节SIRTs/NF-κB信号传导通路发挥抑制肾脏纤维化的作用.
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原发性高血压肾脏纤维化的认识及天生饮的治疗
原发性高血压是我国常见的心血管疾病之一,全国各大城市高血压患病率为18%.我国约有1.6亿高血压患者,绝大多数原发性高血压患者都可发生不同程度的肾脏改变,随着年龄的增长,肾脏纤维化逐渐加重,出现慢性肾衰竭,发展为终末期肾病 [1].
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两色金鸡菊对糖尿病大鼠肾脏纤维化RhoA/ROCK/Nox4信号通路的影响
目的 观察两色金鸡菊对糖尿病大鼠肾功能损伤及肾脏纤维化的影响,探讨其作用机制.方法 SD大鼠以高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型.将60只大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和两色金鸡菊高、中、低剂量组,每组10只.各给药组给予相应剂量药物灌胃4周.Masson染色观察大鼠肾脏纤维物质沉积的变化;放射免疫法检测大鼠早期肾损伤各指标的水平;免疫组化检测大鼠肾组织RhoA、p-MYPT、Nox4、平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)的蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠肾脏纤维物质沉积、尿微量白蛋白、α1-微球蛋白(α1-MG)、β2-巨球蛋白(β2-MG)水平显著升高,RhoA、p-MYPT、Nox4、α-SMA蛋白表达显著升高(P＜0.01);与模型组比较,两色金鸡菊高、中、低剂量组均不同程度地改善大鼠肾脏纤维物质的沉积,抑制尿液微量白蛋白、α1-MG、β2-MG表达水平,肾组织RhoA、p-MYPT、Nox4、α-SMA蛋白表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可能通过RhoA/ROCK/Nox4信号通路抑制模型大鼠肾组织α-SMA的表达、肾脏纤维物质沉积,进而减轻模型大鼠早期肾脏损伤.
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溺毒清合剂对慢性肾衰竭患者血清纤维化指标的影响
目的 观察溺毒清合剂治疗慢性肾衰竭疗效及其对血清纤维化指标的影响.方法 采用具有益气温阳、化瘀泄毒功效的溺毒清合剂联合银杏达莫、至灵胶囊及降压、低蛋白饮食等方法 ,对34例慢性肾衰竭患者进行前瞻性研究,并与对照组(34例,以包醛氧淀粉代替溺毒清合剂)进行比较,观察治疗前后肾功能及血清纤维化指标的变化.结果 慢性肾衰竭患者血清透明质酸,Ⅲ型前胶原及层粘蛋白均明显增高(均P<0.05).治疗组治疗后上述指标均明显下降(P<0.05),肾功能亦明显改善(P<0.01).对照组肾功能虽有改善,但不如治疗组明显,纤维化指标变化亦不明显.结论 溺毒清合剂对慢性肾衰竭患者有抗纤维化的作用,并能改善肾功能,延缓慢性肾衰竭进展.
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基于TGF-β1/Smad信号通路的加味黄芪赤风汤抗肾脏纤维化机制研究
目的 观察加味黄芪赤风汤对TGF-β1/Smad信号通路的影响,探讨其抗肾脏纤维化的机制.方法 采用血清药理学方法,大鼠予加味黄芪赤风汤和替米沙坦灌胃,制备含药血清.体外培养小鼠系膜细胞,以脂多糖作为炎症刺激因子.实验分为6组:正常组、模型组、替米沙坦组、加味黄芪赤风汤(简称中药)高、中、低剂量组.含药血清干预72 h后,采用酶联免疫法吸附试验测定各组细胞上清液中层粘连蛋白(lam inin,LN)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的含量;采用Western blot法检测各组细胞中TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达.结果 (1)与正常组比较,模型组上清液中LN和FN含量增加(P＜0.01);与模型组比较,替米沙坦组与中药中剂量组LN及FN含量减少(P＜0.05,P＜0.01),中药低剂量组上清液中FN含量亦减少(P＜0.01).(2)与正常组比较,模型组TGF-β1、p-Smad2/3、CTGF蛋白表达显著增加,Smad7蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,替米沙坦组、中药高、中、低剂量组TGF-β1、CTGF蛋白表达均降低(P＜0.01,P＜0.05),替米沙坦组、中药高、中剂量组p-Smad2/3蛋白表达降低(P＜0.01),中药高、中剂量组Smad7蛋白表达明显增加(P＜0.05).结论 加味黄芪赤风汤能够抑制致炎因子诱导的肾小球系膜细胞分泌细胞外基质增加和肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad信号通路的过度激活,这可能是加味黄芪赤风汤抗肾脏纤维化的机制之一.
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黄芪当归合剂对大鼠慢性肾硬化中骨桥蛋白表达的影响
目的:探讨黄芪当归合剂对慢性肾硬化中骨桥蛋白表达的影响.方法:采用大鼠慢性嘌呤霉素肾硬化模型,随机分为模型组,黄芪当归合剂治疗组(简称中药治疗组),血管紧张素受体拮抗剂(Irbesartan)治疗组(简称AT1RA组).实验全程12周,血、尿标本进行生化检测、肾组织病理染色和免疫组化检测骨桥蛋白,单核巨噬细胞及细胞外基质层粘连蛋白(laminin)、核心蛋白聚糖(decorin)的表达.结果:黄芪当归合剂具有与Irbesartan相似的减少尿蛋白,改善肾功能的作用;同时肾组织病理损伤减轻,尤其是小管间质损伤指数明显降低;间质细胞外基质(decorin和laminin)聚集明显减少;小管骨桥蛋白的表达和间质单核巨噬细胞浸润均明显减少,且两者呈正相关性(r＝0.885,P＜0.01).结论:黄芪当归合剂具有与Irbesartan相似的肾脏保护作用,这一作用可能涉及骨桥蛋白表达上调的抑制.
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miR-207在大鼠纤维化肾组织及尿液中表达上调
目的 研究miR-207在大鼠肾脏纤维化(RF)模型中的差异表达,并对其功能进行研究.方法 实验组大鼠(UUO)分离并结扎右侧输尿管,假手术组只分离右侧输尿管,不结扎.Real-time PCR定量分析大鼠肾脏纤维化模型肾脏和尿液中miR-207的表达,以及瞬时转染miR-207 mimics和inhibitors的大鼠肾小管上皮(NRK-52E)细胞中纤维化相关基因的表达.结果 大鼠肾脏纤维化模型尿液和肾脏组织中miR-207表达上调(P＜0.05),miR-207能上调大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞中纤维化相关基因的表达.结论 miR-207可能在肾脏纤维化中发挥重要的作用,为肾脏纤维化诊断靶点提供新的可能.
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肾脏纤维化大鼠模型尿液中差异表达基因筛选及生物信息学分析
目的研究大鼠肾脏纤维化(RF)模型尿液中差异表达的基因,并对其进行生物信息学分析.方法将大鼠分为对照组和纤维化模型组,单侧输尿管结扎术建立大鼠肾脏纤维化模型,收集尿液.提取总RNA,构建测序文库并进行转录组测序.对差异表达的mRNA进行了GO分析和KEGG分析,并对miRNA的前体和lncRNA的家族进行预测和分类.结果肾脏纤维化模型组的尿液和对照组相比,得到813条表达上调转录本数据以及213条表达下调的转录本数据.结论利用转录组高通量测序结合相关生物信息学分析,可为肾脏纤维化诊断靶点提供新的可能.
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组织型转谷氨酰胺酶与肾脏纤维化
组织型转谷氨酰胺酶(tTG)是一个Ca2+依赖的具有转酰胺基作用的酶,它分布广泛,在许多生理和病理条件下发挥重要作用.近年来它参与组织纤维化的作用逐渐引起重视.tTG分泌到细胞外能够使很多细胞外基质蛋白成分之间发生交联,形成牢固结构,抵抗降解,从而促使细胞外基质沉积,促进组织纤维化发展.本文简要叙述tTG的分子特征和生理及病理学意义,并着重介绍tTG和肾脏纤维化的联系.
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RNA干扰靶向抑制结缔组织生长因子拮抗肾脏纤维化的发展
目的 研究RNA干扰靶向抑制结缔组织生长因子(CTGF)对高血压大鼠肾脏纤维化指标的影响.方法 本研究于2006-2008年在武汉协和医院心血管病研究所完成,实验以自发性高血压大鼠(SHR)为动物模型,随机(随机数字法)分为未干预的SHR组(n=10)和RNA干扰组(RNAi组,n=10),并设置WKY大鼠(n=8)为正常对照组.构建并筛选出靶向大鼠CTGF的RNAi质粒重组体,通过升主动脉钳夹冠脉灌注法联合尾静脉注射将质粒转染至大鼠体内,RNA干扰结束后,获取肾脏标本,RT-PCR和Western blotting检测肾脏组织CTGF及纤维连接蛋白(FN)的mRNA和蛋白表达,免疫组化技术分析CTGF及FN在肾脏的空间表达.0.1%天狼星红-饱和苦味酸胶原染色分析肾组织胶原类型及代谢水平(以胶原容积分数CVF表示),比色法测定肾脏组织羟脯氨酸含量.所有数据以(x-±s)表示,多个均数的组间比较采用单因素方差分析,以P<0.05为有统计学意义.结果 RNA干扰使高血压大鼠肾脏组织CTGF的mRNA和蛋白表达分别下调66%和62%(P<0.01),FN mRNA和蛋白的表达也相应降低达56%和51%(P<0.01);免疫组化显示了同样的抑制效应,而且观察到CTGF及FN不同的空间表达,CTGF在肾实质和间质中均可表达,而FN主要在肾脏间质表达.天狼星红染色显示RNA干扰组胶原沉积减少,偏光显微镜下进一步观察到RNA 干扰主要抑制了I型胶原的合成;肾脏组织羟脯氨酸含量在RNA干扰组显著减少[SHR组:(0.596±0.067)μg/mg,RNAi组:(0.368±0.084)μg/mg,P<0.01].结论 C-CTGF靶向性RNA干扰显著下调肾组织中CTGF的表达并相应抑制细胞外基质在肾间质的沉积,且这种效应独立于降压之外.提示CTGF在肾脏纤维化发生及进展中起着关键作用.
