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促血小板生成素对骨髓c-Kit+ Lin-细胞体外扩增的影响
目的 探讨在无血清条件下,血小板生成素(TPO)对c-Kit+ Lin-细胞增殖的影响.方法 经免疫磁珠分离小鼠骨髓c-Kit+ Lin-细胞,研究在干细胞因子(SCF)、FLt-3配基(FL)和白血病抑制因子(LIF)组合中添加不同浓度的TPO,7 d后检测细胞总数,c-Kit+ Lin-细胞扩增倍数,并采用Annexin-V检测各组细胞凋亡率.结果 各组均能显著扩增c-Kit+ Lin-细胞,扩增倍数为4～7倍不等.当SCF+FL+LIF中加入50μg/L TPO时,c-Kit+ Lin-细胞及细胞总数扩增为7.07倍和40.19倍,比未加时明显增多,而凋亡率无明显差异.但随剂量加大,c-Kit+ Lin-细胞扩增下降,细胞凋亡率上升,200μg/L TPO组凋亡率为33.49%,c-Kit+ Lin-细胞扩增倍数仅为4.11倍.结论 TPO可协同SCF+FL+LIF使c-Kit+ Lin-细胞增殖,但过高剂量会诱导其分化和凋亡,以50μg/L浓度扩增效果佳.
关键词： 血小板生成素 骨髓c-Kit+Lin-细胞 肝干细胞 扩增 -
白细胞介素3与c-kit+Lin-细胞的增殖
背景:c-kit+Lin-即为骨髓衍生肝干细胞,与其他造血干细胞类似,c-kit+Lin-细胞的数量有限,难以满足科研的需要.目的:观察在无血清无基质的条件下,白细胞介素3和因子组合对扩增c-kit+Lin-细胞的影响.方法:采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit+Lin-细胞,在干细胞因子、肝细胞生长因子、FLt-3配基、促血小板生成素和白血病抑制因子组合中添加不同剂量的白细胞介素3培养7 d,检测细胞总数、c-kit+Lin-细胞扩增倍数及细胞凋亡率.结果与结论:各因子组均可显著扩增c-kit+Lin-细胞,扩增倍数7~19倍不等.随白细胞介素3剂量加大,虽然细胞总数上升,但是超过一定浓度后c-kit+Lin-细胞扩增反而不明显.40 μg/L白细胞介素3组细胞总数扩增245.41倍,但c-kit+Lin-细胞扩增仅为15.80倍,与20 μg/L白细胞介素3组差异有显著性意义(P < 0.05).但40 μg/L白细胞介素3组细胞凋亡率低,仅为4.66%.提示白细胞介素3能协同干细胞因子+肝细胞生长因子+ FLt-3配基+促血小板生成素+白血病抑制因子有效地扩增c-kit+Lin-细胞,其表型并不受影响,但过高剂量反而促使干细胞分化.20 μg/L剂量的白细胞介素3扩增效果佳.
关键词： 骨髓c-Kit+Lin-细胞 白细胞介素3 干细胞生长因子 肝干细胞 扩增 -
白细胞介素3对c-kit+Lin-细胞的增殖作用
目的 探讨在无血清无基质的条件下,白细胞介素3(IL-3)和因子组合的不同浓度对扩增c-kit+Lir-细胞的影响.方法 采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit+Lin-细胞,在干细胞因子(SCF)、肝细胞生长因子(HGF)、FLt-3配基(FL)、促血小板生成素(TPO)和白血病抑制因子(LIF)组合中添加不同浓度的IL-3培养7 d,检测细胞总数、c-kit+Lin-细胞扩增倍数及细胞凋亡率.结果 未加IL-3(A组),10 ng/ml IL-3(B组),20 ng/ml IL-3(C组)和40 rig/ml IL-3组(D组)均可显著扩增c-kit+Lin-细胞,扩增倍数7～19倍不等.随剂量加大,虽然细胞总数上升,但是超过一定浓度后c-kit+Lin-细胞扩增反而不明显.D组细胞总数扩增245.41倍,但c-kit+Lin-细胞扩增仅为15.80倍,明显低于C组(扩增c-kit+Lin-细胞为18.75倍)(P<0.05).但D组细胞凋亡率低,仅为4.66%.结论 IL-3能协同SCF+HGF+FL+TPO+LIF有效的扩增c-kit+Lin-细胞,其表型并不受影响;但过高剂量反而促使干细胞分化.
关键词： 肝细胞生长因子 骨髓c-Kit+Lin-细胞 干细胞因子 -
不同细胞因子组合对c-kit+Lin-细胞的体外扩增研究
目的 探讨在无血清无基质条件下,不同细胞因子组合对c-kit+Lin-细胞增殖效应以及佳扩增时间.方法 采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit+Lin-细胞,将干细胞因子(stem cell factor,SCF),FLt-3配基(FLt-3 ligand,FL),血小板生成素(thrombopoietin,TPO),白细胞介素-3(intedeukin,IL-3),肝细胞生长因子(hepatocyte graoth factor,HGF)等细胞因子进行不同组合,体外扩增干细胞14d,于不同时间检测细胞总数和c-kit+Lin-细胞数及比例,并在第10天通过细胞凋亡早期膜变化标记FIFT-Annexin-V,检测细胞凋亡率.结果 各组细胞因子均能显著扩增c-kit+Lin-细胞.扩增倍数3～19倍不等.在SCF+FL+TPO中加入IL-3或HGF,其效果更明显,c-kit+Lin-细胞在第6天分别扩增4.71和5.15倍,当同时加入时,两者有协同作用.其中SCF+FL+TPO+lL-3+HGF在第10天扩增程度为显著,并且凋亡率低为6.59%. 结论在体外短期培养过程中上SCF+FL+TPO+IL-3+HGF组合能产生大量的c-kit+Lin-细胞,并且佳培养时期为第10天,为肝干细胞提供种子细胞.
关键词： 无血清培养 骨髓c-Kit+Lin-细胞 肝干细胞 扩增 -
c-Kit+Lin-细胞移植改善急性肝损伤的实验研究
目的 探讨骨髓c-Kit+Lin-(CD117)细胞移植治疗小鼠急性肝损伤的效果以及机制,为骨髓源性肝干细胞的临床应用提供实验依据. 方法 18只成年BALB/c小鼠随机分为正常组、实验组和干细胞移植组,正常组不予任何处理,模型组小鼠腹腔注射CCl4后仅输入生理盐水,移植组小鼠在腹腔注射CC14后尾静脉输注骨髓CD117细胞(1×106),48 h后观察各组小鼠肝功能水平变化,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色分析肝脏病理学改变,免疫组化检测肝脏细胞增殖情况. 结果 模型组腹腔注射CCl4后肝功能严重受损,血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(glutamic oxalacetic transaminase,AST)、胆红素(bilirubin)等升高,肝脏的HE染色可见片状坏死,炎症细胞浸润;移植组小鼠移植干细胞48h后小鼠肝功能有所恢复,病理提示肝脏坏死区域有所减小,Ki67免疫组化提示干细胞可促进肝脏再生. 结论 经尾静脉注入的骨髓来源的CD117干细胞能改善急性肝损伤肝功能以及修复受损肝脏,是治疗急性肝损伤的一种安全有效的方法.
关键词： 骨髓c-Kit+Lin-细胞 肝干细胞 急性肝损伤 -
肝细胞生长因子对c-kit+Lin-细胞的增殖作用
目的 探讨在无血清无基质的条件下,肝细胞生长因子(HGF)和因子组合对扩增c-kit+Lin-细胞的影响.方法 采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit+Lin-细胞,研究在干细胞因子(SCF),FLt-3配基(FL),促血小板生成素(TPO)和白血病抑制因子(LIF)组合中添加不同浓度的HGF培养7 d,检测细胞总数,c-kit+Lin-细胞扩增倍数及细胞凋亡率.结果 各因子组均可显著扩增c-kit+Lin-细胞,扩增倍数2～8倍不等.其中,10ng/ml HGF组扩增c-kit+Lin-细胞效果为显著.为8.00倍,细胞总数扩增45.43倍,细胞凋亡率为17.42%.但随剂量加大,虽然细胞总数上升,c-kit+Lin-细胞扩增反而下降.40 ng/ml组细胞总数扩增80.50倍,c-kit+Lin-细胞扩增效果不明显,仅为2.87倍,细胞凋亡率低.为5.91%.结论 10 ng/ml的HGF能协同SCF+FL+TPO+LIF扩增c-kit+Lin-细胞,使细胞凋亡率降低,其表型并不受影响,但过高剂量会诱导其分化.
关键词： 肝细胞生长因子 骨髓c-Kit+Lin-细胞 肝干细胞 细胞扩增
