首页 > 文献资料
-
丙型肝炎病毒西安株2a型包膜蛋白E区部分cDNA的分析
丙型肝炎病毒（HCV）包膜蛋白区（E区）基因是HCV基因组中变异大的部位，不同分离株的核苷酸差异可达40%左右［1］。作者对陕西省HCV地方株的全部E1，部分E2/ NSI区进行了序列测定，并与已发表的多个株做同源性比较。 1.材料和方法：HCV血清取自西京医院丙型肝炎患者，血清经5′非编码区通用引物RT-PCR确认HCV RNA阳性，引物参照HC-J6设计［2］。序列分别为：R1（+）GTGGGTAA-GGTCATCGAT(695～712)，R2（+）GCCGACCTCATGGGGTAC-(731～748)，R3（-）ACCTAGTGCCAACTGCCATTGGT(1 586～1 603)，R4（-）GTTGATGTGCCAACTGCC(1 592～1 609)。 用异硫氢酸胍-冷酚法一步提取HCV RNA，反转录成cDNA，用R1/R4，R2/R3进行套式PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳鉴定，产物纯化、回收，与PGEM-T载体连接，克隆并测序。 2．结果：将所分离毒株的核苷酸序列和推导的氨基酸序列分别与已报道的HC-J6，HC-J1，BEBE1，HC-J8，HCV-H，HCV-HB，HCV-T的相应序列进行比较。从表1可见，在核苷酸水平上分离株E区与HC-J6相应序列的同源性为78.2%，与其他几株的同源性相对要低一些，与中国河北株HCV-HB的同源性低；在氨基酸水平上分离株E区与HC-J6相应序列的同源性为75.7%，与其他株的同源性低，与中国河北株HCV-HB的同源性低。 3.讨论：HCV 核酸存在广泛的异质性，其中E区不断发生变异，可能是使病毒在体内持续存在的原因，其变异亦可能与疾病程度、对干扰与治疗的抵抗、引起慢性化及肝细胞癌等有一定相关，赵小宁等［3］已经用RT-PCR法从1例陕西地区丙型肝炎患者血清中扩增并克隆和测定了5′NCR，C区的基因序列，分析同源性为2a型，本次研究用同一份血清，测定了全部E1区，部分E2/NSI区共878 bp的核苷酸序列，将所得序列与已报道的几株HCV序列比较后发现，我们的分离株同HC-J6的同源性大，同属于2a亚型。我国已有完整克隆的河北株、北京株和台湾株，但都属于HCV-1b型，本次对2a型的实验克隆对全面了解HCV基因组的结构及其变异，对HCV的基础及临床研究都具有重要意义。
-
肝癌中基质金属蛋白酶-9表达的临床意义
已有资料表明，肿瘤细胞能分泌大量基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP），且具有高转移倾向的肿瘤细胞分泌的金属蛋白酶的含量亦高，对肿瘤的侵袭和转移起着极为重要的作用〔1〕。基质金属蛋白酶-9（MMP-9，E.C.）是金属蛋白酶类的主要成员之一。我们应用逆转录聚合酶链反应和明胶酶谱法检测肝细胞癌（HCC）组织、癌栓组织和癌旁组织中MMP-9 mRNA的表达水平和酶活性表达，以探讨其在HCC侵袭和转移过程中的意义。 1.资料与方法：7例正常肝组织，47例手术切除并病理证实的癌及癌旁组织，其中8例有门静脉主干癌栓。有包膜者25例，无包膜者22例。大肝癌24例（>5 cm），小肝癌23例（≤5 cm）。所有病例均无肝外转移征象。方法：(1)RT-PCR：使用Trizol溶液一步提取mRNA，条件为94℃ 1 min，65℃ 1 min，循环30次。扩增条带特异性经酶切分析证实。PCR产物经2%琼脂糖电泳，VDS扫描。以MMP-9和内标β-actin扫描值的比值作为MMP-9 mRNA的表达相对值，半定量分析MMP-9 mRNA表达水平。(2)明胶酶谱法：制备蛋白抽提液，行SDS-PAGE电泳后，将凝胶分别置于洗脱液、漂洗液、孵育液、染色液、脱色液中处理，后拍照。(3)统计学处理：MMP-9 mRNA表达相对值以±S，两组间均数采用t检验，两组间率采用χ2检验。
-
细胞破碎方法简述
随着重组DNA技术得到广泛应用以来，生物技术发生了质的飞跃。很多基因工程产物都是胞内物质，必须将细胞破壁，使产物得以释放，才能进一步提取，因此细胞破碎是提取胞内产物的关键步骤，破碎方法的得当与否，直接影响到所提取产品的产量、质量和生产成本。现将近年来常用的几种细胞破碎方法介绍一下。 1 高压匀浆法……
-
迷迭香精油及抗氧化剂的提取与成分分析
目的 进行迷迭香精油及抗氧化剂的提取与成分分析.方法 采用超临界CO2萃取技术一步提取迷迭香精油及抗氧化剂,利用气质联用仪和液质联用仪分别对所得精油和抗氧化剂进行检测.结果 超临界CO2一步提取精油及抗氧化剂的佳工艺条件为:萃取压力32.6 MPa,分离釜I温度56.5℃,夹带剂用量0.6 ml/g,萃取时间1h；萃取的迷迭香精油共鉴定出22种化学成分,主要成分为1,8-桉叶油素、樟脑、龙脑、柠檬烯；萃取的抗氧化剂成分有鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚,含量分别为15.6％、8.4％、3.5％.结论 超临界CO2萃取技术可以一步获得迷迭香精油和抗氧化剂,方法简便、快捷、效率高,所得精油品质纯正,抗氧化活性成分含量高.
