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LC-MS/MS法测定比格犬血浆中米非司酮的方法学建立
目的 建立LC-MS/MS法测定比格犬血浆中米非司酮的浓度.方法 血浆样品以特非那定为内标,采用高效液相色谱分离系统,色谱柱为Kinetex-C18 110 A柱(3 mm×30 mm,2.6 μm),流动相为甲醇-水(0.1％甲酸),流速为0.8 ml/min;采用质谱检测系统,电喷雾电离,正离子检测,定量采集方式为多反应监测模式(MRM),米非司酮m/z 430.2--→372.3,内标特非那定m/z 472.2→436.2;离子喷雾电压5 500 V.对改良方法的专属性、标准曲线低定量下限(LLOQ)、精密度与准确度、稳定性、基质效应和提取回收率等进行性能验证.结果 米非司酮在1～1 000 ng/ml浓度范围内线性关系良好,LLOQ为1 ng/ml,信噪比(S/N)＞10;日内精密度≤11.6％,日间精密度≤9.9％,日内准确度≤11.1％,日间准确度≤7.8％;回收率为91.5％～104.0％.结论 该检测方法简单、快速、灵敏、准确,适用于米非司酮在比格犬中血药浓度检测及其药物代谢动力性研究.
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中毒患者血液中可乐定液相色谱-质谱检测方法的研究
目的 建立人血液可乐定LC-MS/MS定性定量检测的方法,用于可乐定中毒患者的诊断.方法 取患者静脉全血,分离血清500μl加1 000μl乙腈混匀,离心沉淀,上清液用针头滤器过滤,取10μl进样.在串联四级杆质谱ESI正离子电离模式下,监测m/z 230.1/212.8和230.1/160.1两对MRM离子对进行可乐定检测.分析保留时间(RT),确定线性范围,计算检出限、精密度和稳定性.结果 可乐定保留时间为4.4 min,在l～ 800 ng/ml的范围内线性关系良好(r =0.9991),低定量限(LOQ)为0.2 ng/ml,日内精密度RSD为3.9％,日间精密度RSD为5.5％,平均回收率为47.6％,可乐定在室温环境中较为稳定.结论 本研究建立LC-MS/MS检测可乐定的方法灵敏、快速,特异性好,适用于临床可乐定中毒患者的诊断与指导治疗.
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河豚毒素及其衍生物在织纹螺体内的解剖分布初探
目的 初步探讨织纹螺体内河豚毒素(TTX)及其衍生物在不同组织中的分布特征.方法 以2004年导致福建仙游地区中毒事件的肇事种红带织纹螺(Nassarius succinctus)为研究对象,将其软组织分为食道、肌肉和内脏三部分,运用液相色谱一质谱联用仪进行毒素分析.结果 织纹螺的食道、肌肉和内脏组织中均舍有TTX、脱水河豚毒素、三脱氧河豚毒素、单脱氧河豚毒素和加氧河豚毒素等成分,以色谱峰面积为准,trideoxy TTX)(在各组织中所占比例高,85%以上TTX次之.三种组织相比,TTX在内脏中所占的比例高,而三脱氧毒素在肌肉中所占的比例高.结论 织纹螺不同组织中的河豚毒素及其衍生物的含量与组成情况存在一定差异,这可能是织纹螺对河豚毒素的分配与代谢转化过程的反映.
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冠心病心绞痛代谢组学的证候客观化研究
目的:利用代谢组学技术检测冠心病心绞痛中医证候中的潜在生物标志物,探讨冠心病心绞痛不同证型的客观化规律.方法:选取健康组、冠心病心绞痛患者气虚血瘀证和气虚血瘀痰浊证,应用液相色谱-质谱联用(LC-MS)的方法,检测健康组和不同中医证型的血清、尿液的内源性代谢物,通过主成分分析(PCA)和正交信号校正偏小二乘判别分析 (OPLS-DA)的方法分析其代谢谱.结果:在PCA分析中,健康组和气虚血瘀组、气虚血瘀痰浊组之间可以明显的区分开来;气虚血瘀证型的潜在生物标志物有天冬氨酰蛋氨酸、半胱氨酸亚磺酸;气虚血瘀痰浊证型的潜在生物标志物有马尿酸、氨基葡萄糖、果糖胺、甘油三酯;气虚证型客观化的表现为缺少生物素、赖氨酰酪氨酸、磷脂酰甘油、甘氨胆酸.结论:通过代谢组学这项新技术,探讨出冠心病心绞痛气虚血瘀证型、气虚血瘀痰浊证型的不同内源性代谢产物,为临床不同中医证型的预防、诊治提供思路.
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基于LC-MS的小儿哮喘发作期痰热阻肺与非痰热阻肺证代谢标记物研究
目的:分析小儿支气管哮喘发作期痰热阻肺证与非痰热阻肺证尿液代谢谱,探索中医不同证候生物学标记物差异.方法:收集24例痰热阻肺证、20例非痰热阻肺证患儿尿液进行液相色谱-质谱检测,运用XCMS Online和MetaboAnalyst分析平台确定差异性代谢物及代谢通路.结果:痰热阻肺证与非痰热阻肺证间能够良好区分,一系列有机酸、氨基酸、脂、酮类等差异性代谢物及代谢通路被确定.与痰热阻肺证相比,非痰热阻肺证组患儿尿中蛋氨酸、琥珀酸、赖氨酸、肌酸、犬尿氨酸、环腺苷酸等多种有机酸、氨基酸,以及多种脂类、酮类化合物含量升高,仅有羟基吲哚乙醛含量降低,主要涉及生物素代谢、色氨酸代谢等5条代谢通路异常.结论:小儿支气管哮喘不同证型间存在代谢标记物与代谢通路基础,可能是中医不同证候区别的本质.
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乌头碱皮肤微透析体内回收率研究
目的:建立乌头碱的液相色谱-质谱联用(LC-MS-MS)含量测定方法,测定乌头碱微透析体内回收率并考察其稳定性.方法:采用反透析法测定回收率,考察流速、浓度、时间对回收率的影响.结果:反透析法测定的回收率与浓度、时间无关,稳定性良好,随流速增加回收率降低.结论:微透析取样技术可用于乌头碱的药动学研究,体内研究的反透析法可作为微透析研究中乌头碱回收率的测定方法.
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电针对类风湿关节炎大鼠口服雷公藤甲素药动学及肝损指标的影响
目的:为电针联合雷公藤甲素(triptolide,TPL)治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA),同时减轻TPL所致的肝损提供增效减毒的实验依据.方法:RA模型采用弗氏完全佐剂(freund's complete adjuvant,CFA)建立,运用液相色谱-质谱联用技术(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)检测大鼠血浆TPL浓度,试剂盒测定肝匀浆中谷氨酸-丙酮酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)活性.结果:针药组大鼠足趾肿胀改善情况好,药物组次之,再者为电针组;在同一时刻电针刺“足三里”后的血药浓度高于单独口服TPL的浓度,TPL的药动学参数:达峰时间(Tmax)提前,峰浓度(Cmax)及药时曲线下面积(area under the curve,AUC)提高;针药组ALT、AST含量及MDA活性均较药物组降低,SOD活性则升高.结论:电针“足三里”可以减轻RA大鼠足趾肿胀,提高TPL的血药浓度,进而提高其生物利用度,同时还可减轻TPL对RA大鼠肝组织的损伤,提高其抗氧化应激能力.
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颊针对类风湿关节炎家兔血浆代谢物表达的影响
目的 观察颊针和体针对类风湿关节炎模型家兔血浆代谢组学的影响,探寻与颊针和体针作用机制有关的代谢物.方法 选取大耳白兔16只,采用完全弗氏佐剂诱导类风湿关节炎模型,造模后颊针组取颊针"膝"穴,用13 mm×0.32 mm毫针直刺0.2~0.5 mm,捻转为主,穴位刺激15 s,每日1次.体针组选取"膝眼""足三里",用13 mm×0.32 mm毫针直刺2~3 mm,每隔5 min行针1次,采用捻转针法,100次/min,行针15 s,每日1次.连续治疗5 d后应用UPLC-QTOF/MS检测各组血浆代谢物,采用相似度分析、系统聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)及正交偏小二乘判别分析(OPLS-DA)进行研究,通过载荷分析确定有意义的代谢物.结果 相似度分析、HCA及PCA均表明体针组、颊针组、模型组及正常组血浆样品中内源性代谢物存在显著差异;OPLS-DA能将4组不同处理家兔血浆样品代谢物在三维象限中完全分开,且各自样品均聚集在一起;载荷分析表明,颊针组与模型组、体针组与模型组间19种内源性代谢物差异有统计学意义;颊针组苯丙氨酸和酪氨酸代谢中N-乙酰-L-苯丙氨酸及2-苯基丙酸均显著下调,而体针组则显著上调.结论 颊针和体针治疗类风湿关节炎的机理有一定相似性,但也存在差异,N-乙酰-L-苯丙氨酸及2-苯基丙酸是其差异的主要潜在生物标志物.
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液相色谱-质谱法测定茜草中芦西丁含量
目的：运用液相色谱-质谱法测定茜草药材中芦西丁的含量。方法采用Agilent 1290HPLC-G6460三重四级杆质谱仪，在ESI-离子模式下选择离子监测，色谱分离采用Agilent Eclipse Plus C18 RRHD色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.8μm），以0.1%甲酸-乙腈（70∶30）为流动相，柱温30℃，流速0.4 mL/min，进样量2μL。结果芦西丁在0.0052～2.64 ng范围内呈良好线性关系（r＝0.9999），80%、100%、120%浓度水平的加样回收率为94.80%～100.94%（平均97.17%，RSD＝6.16%），方法重复性及精密度均良好。结论本研究建立的方法灵敏、准确，重复性好，适用于茜草中芦西丁的含量测定，可用于茜草药材中该成分的限度检查。
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LC-MS测定黄连黄柏中木兰花碱含量
目的:建立同时测定黄连黄柏中木兰花碱含量的液相色谱-质谱联用法.方法:样品经甲醇提取后,采用Agilent Eclipse XDB-C18 ODS色谱柱(4.6 mm ×150 mm,5 μm)分离,流动相甲醇-水(60:40);流速0.8 mL·min-1.质谱采用电喷雾离子化(ESI)方式,正离子采集,以多离子反应监测(MRM)模式对木兰花碱进行含量测定.结果:木兰花碱在4.352~2720pg·L-1线性关系良好.黄连、黄柏平均加样回收率均在98%以上.结论:该方法简便、灵敏、准确,可用于黄连黄柏中木兰花碱的含量测定,为该药材的质量控制提供依据.
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在线液相色谱法和液相色谱-电喷雾质谱联用法检测桑枝中抗氧化活性成分
目的:研究桑枝中的主要抗氧化活性物质.方法:采用自由基在线液相色谱法和液相色谱-电喷雾质谱联用法,鉴定桑枝中主要抗氧化活性成分,然后采用高效液相色谱-DAD(检测波长320 nm)对其含量进行定量分析.结果:桑枝乙醇提取液中的主要抗氧化活性物质确定为氧化芪三酚.高效液相色谱-DAD定量测定桑枝氧化芪三酚,在14～1 260 mg·L-1具有良好的线性关系(r=1.000),平均加样回收率为98.2％,RSD 1.2％.方法准确灵敏、快速简便.桑枝中富含氧化芪三酚,其含量在品种间存在显著差异.结论:自由基在线液相色谱法结合液相色谱-质谱联用法可定性定量分析桑枝中的抗氧化活性物质.
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腔镜手术患者舒芬太尼靶控输注的药动学研究
目的：探讨腔镜手术临床常用浓度舒芬太尼靶控输注（ target-controlled infusion ， TCI ）的药动学特点。方法2011年6～9月，择期全麻下腔镜手术30例（24～65岁，ASAⅠ级或Ⅱ级），应用内嵌Gepts药动学参数的TCI系统输注舒芬太尼，效应室靶浓度随机采用0．2、0．3和0．4μg／L各10例，复合吸入七氟烷维持麻醉。于不同时点经桡动脉取血至停止TCI后24小时，以液相色谱－质谱联用法测定舒芬太尼的血药浓度。运用非线性混合效应模型分析舒芬太尼群体药动学数据。结果舒芬太尼TCI的药动学模型为三室模型，其药动学参数为：中央室容积（V1）＝15．7 L，快速分布容积（V2）＝50．4 L，慢速分布容积（V3）＝213．0 L，稳态分布容积（Vdss）＝279．2 L；药物总清除率（Cl1）＝0．80 L／min，快速分布相清除率（Cl2）＝1．09 L／min，慢速分布相清除率（Cl3）＝0．27 L／min；快速分布半衰期（t1／2α）＝4．6 min，慢速分布半衰期（t1／2β）＝68．7 min，清除半衰期（t1／2γ）＝739．5 min。年龄、性别和体重对药动学参数无显著影响（P＞0．05）。结论腔镜手术患者临床常用浓度舒芬太尼TCI的药动学可用三室模型描述。年龄、性别和体重对药动学参数无显著影响。
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莫诺苷的大鼠组织分布
目的 研究莫诺苷在大鼠组织的分布特征.方法 24只雄性SD大鼠随机分为4组,单剂量(30 mg/kg)莫诺苷灌胃给药,分别于给药后5,45,120和360 min股动脉放血处死动物,解剖取组织.采用高效液相色谱-串联质谱联用法测定莫诺苷浓度.结果 大鼠给药5 min即在小肠、胃、脾脏、肝脏和心脏达高值,120m in在脂肪组织中达高值,其余组织均在45 min达到高值,360 min后各组织的药物浓度均降至较低水平.结论 莫诺苷在大鼠体内的吸收和分布较快,药物入血后在体内各组织分布较为广泛,在组织中的消除亦较快,结果提示药物没有组织蓄积趋势.
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T-2毒素的分析检测方法及代谢研究进展
T-2毒素是单端孢霉烯族毒素的重要代表,在单端孢霉烯族毒素中毒性强,是主要的食品污染源之一,对人类的健康造成严重威胁.本文从T-2毒素的毒理学意义出发,重点评述了近年来T-2毒素在分析方法、体内外代谢等方面的研究进展.
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基于粉末直接压片工艺的硝苯地平缓释片:制备、体外释放度及比格犬体内药动学评价
目的选用粉末直接压片工艺,以羟丙基甲基纤维素为骨架材料制备日服1次的硝苯地平缓释片.方法建立24 h的释放度测定方法并进行硝苯地平缓释片的体外评价;应用液相色谱-质谱联用技术研究缓释片在比格犬体内药代动力学,与市售参比制剂对比并计算相对生物利用度.结果受试制剂和参比制剂有相似的药代动力学参数,相对生物利用度为(100.9±12.4)%;药物体外累积释放百分数与体内吸收百分数有较好的相关性,r=0.962 5.结论本工艺制得的硝苯地平缓释片可以达到缓释24 h的要求.
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快速测定人血浆中洛匹那韦/利托那韦浓度的LC-MS/MS方法建立
目的：建立LC-MS/MS方法快速测定人血浆中洛匹那韦（lopinavir，LPV）/利托那韦（ritonavir，RTV）（克力芝）的含量。方法血浆样品采用蛋白沉淀法处理后，以甲醇-水（0.1%甲酸）为流动相进行梯度洗脱，流速为0.2 ml/min，色谱柱采用Thermo Hypersil GOLD柱（2.1 mm×100 mm，5 mm），柱温为25℃，采用ESI源以选择反应监测（SRM）方式进行正离子检测，用于定量分析的离子对为LPV（m/z 629.3→155.0）、RTV（m/z 721.3→268.0），内标MS275（m/z 377.1→359.2）。结果两药在人血浆中浓度在20～1000 ng/ml时，线性关系良好（r＞0.994）。日内、日间精密度，低浓度＜20%，中高浓度＜15%，回收率为86.5%~96.3%。结论该检测方法简单、快速、灵敏、准确，适用于两药的临床血药浓度监测及其药物代谢动力学研究。
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甘草酸单体及补中益气丸复方在大鼠体内药代动力学比较
目的：建立简单、灵敏、准确的HPLC-MS/MS方法测定大鼠血浆中甘草次酸浓度，并用于比较研究甘草酸单体和补中益气丸（BY）复方给药后，甘草酸在大鼠体内药代动力学差异，从而探讨BY中非甘草酸组分对甘草酸药代动力学行为的影响。方法大鼠分别灌胃给药甘草酸单体（61.5 mg/kg）和BY复方（3 g/kg，含等摩尔量甘草酸）。血浆样品经乙酸乙酯液萃取处理后用反相C8色谱柱分离；定量分析采用TSQ Quantum质谱仪的选择反应监测、负离子模式检测。采用Das 2.0软件计算药代动力学参数，Prism 5.0软件进行统计学分析。结果甘草次酸在5～1000 ng/ml范围内线性良好（r＞0.99），方法的特异性、灵敏度、回收率、准确度、精密度和稳定性均符合方法学要求。与大鼠灌胃甘草酸单体组相比，BY复方给药组体循环中甘草次酸的达峰浓度（Cmax）和时间-浓度曲线下面积（AUC）分别降低了56%和76%，而达峰时间（Tmax）、平均驻留时间（MRT）和消除半衰期（T1/2）未见显著性差异。结论本研究建立了HPLC-MS/MS测定大鼠血浆中甘草次酸方法，该法特异、准确、灵敏，适用于甘草酸在大鼠体内的药动学研究。进一步的药代动力学比较研究表明，甘草酸单体在大鼠体内生物利用度显著高于BY复方，提示BY复方中的其他成分可能抑制甘草酸的口服吸收过程。
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液相色谱-质谱联用技术在体外药物代谢物筛查中的应用
高效液相色谱与质谱联用技术已是现代药物发现中药物代谢产物筛查和鉴定强大的分析手段,可以从品种繁多的样品中得到丰富的信息.本文关注这些技术在体外代谢研究中的应用,尤其是在筛查和鉴定生物转化形成的化学稳定代谢产物或反应性代谢产物方面的应用.为满足指定检测任务需审慎考虑选择合适的检测仪器,在代谢产物筛查中飞行时间质谱和静电场轨道阱质谱检测效率明显高于其他类型质谱.
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中药化学成分分析、分离技术及策略
中药的化学成分是其防病、治病的物质基础，中药化学成分的研究是中药现代研究的重要组成部分。由于中药所含化学成分的复杂性，其研究的难度大。近年来随着新型分离材料及方法的应用，以液质联用为代表的分析技术的发展及其配套数据库、软件的开发，中药化学成分的组成表征、定性定量分析、分离纯化等方面都取得很大的进步。本文结合作者的研究实例，对中药化学成分的分析和分离的技术方法、策略及其解决的问题做一简要介绍。
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HPLC-DAD-MS法检测中药制剂中非法添加成分褪黑素
目的 建立一种检测镇静安眠类中药制剂中非法添加褪黑素成分的方法.方法 采用高效液相色谱仪(DAD检测器)和液相色谱-质谱联用仪,比较样品与对照品的保留时间、紫外吸收光谱图和质谱图是否一致来确定样品是否添加褪黑素成分.结果 褪黑素在2.02-101.0 mg/ml范围内线性良好;加样回收率平均为101.27%;精密度RSD为0.1%;检测限为4ng/ml;同时也考察了方法的耐用性和专属性.采用本文的方法实测了3种市售镇静安眠类中药制剂,均检测到了褪黑素成分,其中一批样本未在说明书中标明,属于非法添加.结论 该方法准确,快速,易操作,适用于镇静安眠类中药制剂中非法添加褪黑素成分的检测.
