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雷公藤甲素对体外培养大鼠胰腺组织的损伤作用
目的 通过体外实验研究雷公藤甲素对大鼠胰腺组织的损伤作用.方法 以空白组为对照,不同浓度的雷公藤甲素作用于体外培养的胰腺组织,12 h后,MTT法检测其吸光度(A490值),计算胰腺组织存活率；碘-淀粉比色法测定胰腺组织分泌的淀粉酶含量.结果 随着雷公藤甲素浓度的升高,胰腺组织的存活率逐渐降低,其IC50值为0.002 mg/ml,同时胰腺淀粉酶含量升高(与对照组比较,P＜0.05).结论 一定浓度的雷公藤甲素对胰腺组织有损伤作用.
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MC004对大鼠睾丸组织结构和酶活力的影响
目的 探讨新型雷公藤甲素衍生物MC004对大鼠睾丸组织结构及睾丸酶活力的影响.方法 雄性Wistar大鼠32只,随机分为4组.隔日尾静脉注射,溶剂对照组和低、中、高剂量组分别给予生理盐水和0.25、0.50、0.75 mg/kg的MC004,共28 d.末次给药24 h后剖杀,制备睾丸病理切片并测定睾丸中乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸脱氢酶x(LDH-x)、酸性磷酸酶(ACP)和山梨醇脱氢酶(SDH)的活力.结果 与对照组相比较,MC004 0.75 mg/kg组大鼠体重增长缓慢;各剂量组睾丸、附睾的绝对重量及相对重量均显著降低(P＜0.01);MC004可引起大鼠睾丸组织匀浆中LDH、LDH-x、SDH和ACP酶活力的显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 雄性大鼠隔日尾静脉注射给药28 d 0.25 mg/kg剂量的MC004时,即能引起大鼠睾丸组织病理学改变且对睾丸酶活力具有显著抑制作用,从而产生雄性生殖毒性.
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雷公藤甲素的毒理学研究进展
雷公藤甲素(雷公藤内酯醇,Triptolide,TR)是从卫矛科植物雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f)中分离出的活性高的环氧化二萜内酯化合物,是雷公藤的主要有效成分之一,其相关效价比雷公藤总苷高100～200倍.研究表明其具有显著的免疫调节、抗炎、抗生育及抗肿瘤等生物活性;在临床上广泛应用于治疗风湿类疾病、自身免疫性疾病、器官移植、肾病、哮喘、皮肤病和肿瘤等[1-2].
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雷公藤甲素对胶原诱导关节炎大鼠MIP-1α、Eotaxin和MCP-1表达的影响
目的:探讨雷公藤甲素(TP)对胶原诱导关节炎(CIA)大鼠血清和踝关节中MIP-1α、Eotaxin及MCP-1的影响.方法:建立CIA大鼠模型,用不同浓度的TP进行灌胃治疗,治疗期间,对大鼠的足趾厚度和宽度进行测量.治疗3周以后,将大鼠处死,收集血清标本,用ELISA法检测血清中MIP-1α、Eotaxin及MCP-1的表达水平;同时收集关节标本,采用RT-PCR法对大鼠踝关节滑囊组织的MIP-1α、Eotaxin及MCP-1的mRNA表达进行检测;采用western blot对踝关节滑膜组织的MIP-1α、Eotaxin及MCP-1蛋白表达进行检测.结果:与正常组相比,模型组大鼠的关节肿胀程度明显加重;与模型组相比,治疗组大鼠关节肿胀程度明显减轻.与正常组相比,模型组大鼠血清及踝关节中MIP-1α、Eotaxin及MCP-1的表达明显增加(P＜0.05);与模型组相比,各用药组大鼠血浆及踝关节滑膜组织的MIP-1α、Eotaxin和MCP-1表达水平较明显降低(P＜0.05).结论:TP能通过抑制CIA大鼠MIP-1α、Eotaxin和MCP-1的表达而发挥治疗关节炎的作用.
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雷公藤甲素对C6胶质瘤细胞增殖凋亡作用及对Bcl-2,Bax表达的影响
目的:探讨雷公藤甲素对大鼠C6胶质瘤细胞的增殖诱导作用及其相关机制.方法:将大鼠C6胶质瘤细胞培养于含10％ (FBS),100 mg·L-1青霉素链霉素的DMEM培养液中,置37℃5％ CO2培养箱中培养,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测雷公藤甲素对大鼠C6胶质瘤细胞的抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测C6胶质瘤细胞凋亡情况,用逆转录-聚合酶链反应(Real Time-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR),免疫印迹法(Western blotting,WB)检测细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关x蛋白(Bax) mRNA及蛋白的表达变化情况.结果:1.2 mg·L-1浓度的雷公藤甲素溶液对C6胶质瘤细胞增殖有抑制作用,且呈明显的剂量依赖性；雷公藤甲素作用C6胶质瘤细胞24 h后,1.2 mg·L-1浓度对其凋亡诱导作用为明显；雷公藤甲素可明显下调细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白质表达,且该作用呈剂量-时间依赖性,而Bax mRNA及蛋白质表达呈上调趋势.结论:雷公藤甲素对C6胶质瘤细胞具有较好的生长抑制和凋亡诱导作用,两其作用机制可能与Bcl-2,Bax mRNA及蛋白质表达有关.
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忍冬苷的合成及其对雷公藤甲素诱导肝损伤的保护作用
目的:研究忍冬苷的合成方法及其对雷公藤甲素诱导的肝损伤的保护作用.方法:以来源丰富的新橙皮苷为原料,经I2脱氢,AlCl3脱甲基,制得忍冬苷;采用雷公藤甲素诱导的人系L02肝细胞损伤模型评价忍冬苷的保肝作用.结果:合成了忍冬苷并发现其对雷公藤甲素诱导的肝损伤具有很好的保护作用.结论:合成方法简便可行、收率高、成本低,适合工业化生产;忍冬苷对雷公藤甲素诱导的肝损伤具有很好的保护作用.
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雷公藤减毒研究进展
雷公藤为治疗类风湿性关节炎常用中药,具有清热解毒,祛风除湿,消肿止痛,杀虫止痒的功用,现代药理研究表明其具有抗炎、镇痛、抗肿瘤及免疫调节等作用,临床主要用于治疗免疫性疾病、肾脏性疾病、皮肤性疾病等,对类风湿性关节炎的疗效尤为显著.但严重的毒副作用,尤其是肝肾毒性,限制了其临床应用,成为迫切需要解决的难题,故雷公藤的减毒研究成为近年来的研究热点.本课题组主要研究雷公藤的经皮给药对其减毒增效的作用,但目前雷公藤的应用困境仍然没有得到改善,故对2006年至2016年近10年来雷公藤减毒研究的相关文献进行检索,包括传统的炮制减毒、配伍减毒和现代的制剂减毒、结构修饰减毒、生物技术减毒以及其相互的联合应用等,分析雷公藤的减毒现状和困境,对比现存减毒方式间的差异,为雷公藤减毒增效研究提供思路,促进其合理开发和临床安全应用,也为其他有毒中药的合理应用提供参考.
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基于主成分分析评价雷公藤配伍金钱草的相杀减毒作用
目的:考察雷公藤(LGT)配伍金钱草(JQC)的相杀减毒作用,优选二者的佳配比,初步评价二者配伍后特征化学成分的贡献程度.方法:通过小鼠连续给药14 d的亚急性毒性试验并基于主成分分析优选LGT配伍JQC后相杀减毒作用的佳配比,给药剂量以LGT提取物计均为60 mg· kg-(相当于LGT生药约2 g·kg-),给药体积均为20 mL· kg-.基于常规小鼠急性毒性试验评价佳配比的减毒效果,通过对配伍前后差异特征化学成分与总体减毒作用的灰色关联分析,评价化学成分对其相杀减毒作用的贡献大小.结果:与正常组比较,LGT单用组极显著升高了小鼠血清生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平,肝组织和肾组织中的脂质过氧化指标丙二醛(MDA)水平以及总体减毒作用得分Z值(P＜0.01).与LGT单用组比较,LGT-JQC质量比为2∶1,1∶1,1∶2,1∶4的配伍组均能显著降低LGT引起的血清过高的ALT水平(P＜0.05,P＜0.01),质量比为4∶1,2∶1,1∶1,1∶2,1∶4配伍时均能显著降低LGT引起的过高的血清AST,Cr,BUN,肝MDA水平以及总体减毒作用得分Z值(P＜0.05,P＜0.01),质量比为4∶1,2∶1,1∶1配伍时均能显著降低LGT引起的肾过高的MDA水平(P＜0.05,P＜0.01).LGT和JQC在各质量比(4∶1,1∶1,1∶2,1∶4)配伍时的总体减毒作用Z值均明显高于配比在2∶1时的Z值(P＜0.01).LGT单独用药对小鼠的半数致死量(LD50)517 mg·kg-1,LGT-JQC(2∶1)配伍用药时的LD50升高至889 mg·kg-1,升高了72％.配伍前后12个差异特征化学成分与其总体减毒作用得分Z值的灰色关联系数大的是雷公藤甲素(TP).结论:LGT和JQC在质量比为4∶1 ～1∶4配伍时,对LGT所致亚急性肝毒和肾毒均具有配伍减毒作用,二者相杀减毒的佳配比为2∶1;在2∶1配比时,急性毒性和亚急性毒性分别下降了72％和138.5％;TP是引起二者相杀减毒作用贡献大的化学成分.
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雷公藤配伍白芍对雷公藤提取物透皮吸收的影响
目的:考察雷公藤与白芍配伍后对雷公藤甲素和2种生物碱类成分(雷公藤吉碱、雷公藤次碱)透皮吸收的影响,从经皮转运的角度探讨雷公藤与白芍配伍减毒的机制.方法:采用改良Franz扩散池,以小鼠离体腹部皮肤为透皮屏障,以20％乙醇生理盐水为接收介质,通过HPLC测定接收液中雷公藤甲素(流动相乙腈-水梯度洗脱,检测波长220 nm)和雷公藤吉碱、雷公藤次碱[流动相乙腈-0.1％磷酸水溶液(57∶43),检测波长230 nm]的含量,计算其累积渗透量和稳态透皮速率等渗透动力学参数.结果:与雷公藤乳膏相比,雷公藤-白芍配伍乳膏均能降低雷公藤吉碱、雷公藤次碱的累积通过量,但对雷公藤甲素的累积透过量无影响;其中雷公藤-白芍以比例1∶2和1∶3配伍的乳膏中雷公藤吉碱和雷公藤次碱的24 h累积透过量呈明显的降低趋势.结论:雷公藤与白芍配伍经皮给药能降低毒性成分的透过量,同时不影响主要活性物质雷公藤甲素的透过量,从而达到了减毒增效的作用.
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甘草对雷公藤甲素与雷公藤内酯酮体内代谢成分的影响
目的:研究甘草对雷公藤甲素与雷公藤内酯酮体内代谢成分的影响.方法:采用LC-MS/MS研究雷公藤甲素和雷公藤内酯酮单独给药及与甘草联合给药后在大鼠血浆中相应代谢成分,比较单独给药及联合给药后代谢产物种类和生成量的差异.结果:在雷公藤甲素单独给药组及其与甘草联合给药组的大鼠血浆中,均发现4个代谢产物:m/z([M+H]+)359,359,375,377,其中羟基氧化代谢产物(m/z359)生成量较大.在雷公藤内酯酮单独给药组及其与甘草联合给药组的大鼠血浆中,均发现代谢产物3个:m/z([M +H]+)375,397,413,其中羟基化代谢产物(m/z 375)生成量较大,在联合给药组的大鼠血浆中还发现1个单独给药组中没有的代谢产物m/z([M +H]+)413.联合给药组比单独给药组的各代谢产物生成量大.结论:雷公藤甲素和雷公藤内酯酮单独给药及其与甘草联合给药后,大部分代谢产物相同,其中氧化代谢产物为主要代谢产物.甘草可加速雷公藤甲素和雷公藤内酯酮的体内代谢,为阐明甘草对雷公藤的减毒增效作用机制提供参考.
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基于雌激素受体信号通路雷公藤甲素抗乳腺癌作用及机制研究
目的:研究雷公藤甲素体(TP)外对小鼠乳腺癌细胞系4T1的抑制作用,基于雌激素受体信号通路探讨TP抗肿瘤药效及其机制,为其临床治疗乳腺癌提供相关的实验依据.方法:MTT法检测TP对小鼠乳腺癌细胞4T1增殖的影响,采用流式细胞仪FITC-Annexin V/PI法检测TP诱导4T1细胞凋亡率;Western blot技术检测4T1细中胞雌激素受体信号通路相关蛋白ERα、p-ERα、ER β、p-ER β、ERK、p-ERK、MEK1/2、p-MEK1/2、p38-MAPK、p-p38 MAPK、SAPK/JNK、p-SAPK/JNK的表达.结果:TP浓度为100、10、1、0.1μmol/L时对4T1细胞均有增殖抑制作用,其中10、1、0.1μmol/L时能诱导4T1细胞凋亡,并能降低MEK1/2、p-MEK1/2、ERα、p-ER α、ERβ、p-ER β的表达,但对ERK、p-ERK、p38 MAPK、p-p38 MAPK、SAPK/JNK、p-SAPK/JNK的表达没有影响.结论:一定浓度范围内,TP对小鼠乳腺癌细胞4T1具有增殖抑制作用,且其能诱导4T1细胞凋亡,可能与下调ERα、ERβ、MEKl/2的蛋白表达及其磷酸化有关.
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雷公藤甲素对FSGS大鼠临床疗效及肾组织Synaptopodin表达的影响
目的:观察雷公藤甲素对局灶节段硬化性肾小球肾炎(FSGS)大鼠的治疗作用及对肾组织Synaptopodin表达的影响.方法:雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,雷公藤甲素低、中、高剂量组,每组10只.通过行5/6肾切除术建立FSGS大鼠模型.雷公藤甲素低、中、高剂量组从术后第8天开始定时灌胃治疗,给药10周.检测各组大鼠体质量,24h尿蛋白水平,血肌酐(Cr)、尿素(Ure)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(Tch).HE染色观察各组肾组织病理变化,免疫荧光法观察肾组织中Synaptopodin表达.结果:与模型组比较,第12周,雷公藤甲素中剂量组大鼠24h尿蛋白定量明显减少(P＜0.05);而从第6周开始,雷公藤甲素高剂量组大鼠24h尿蛋白定量明显减少(P＜0.01,P＜0.05).与雷公藤甲素低剂量组比较,第8、10周,雷公藤甲素高剂量组大鼠24h尿蛋白定量明显减少(P＜0.05).与正常组比较,模型组及雷公藤甲素低、中、高剂量组大鼠血Cr、Ure水平升高,ALB水平降低(P＜0.01).与模型组比较,雷公藤甲素中剂量组血Ure水平降低(P＜0.05);雷公藤甲素高剂量组大鼠血Cr、Ure水平降低(P＜0.01),ALB水平升高(P＜0.05).与雷公藤甲素低剂量组比较,雷公藤甲素高剂量组血Cr、Ure水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01),可见高剂量雷公藤甲素保护肾功能的效果明显优于低剂量.Synaptopodin在正常大鼠肾组织广泛表达,与正常组比较,模型组肾组织中表达明显减少(P＜0.01),治疗后,雷公藤甲素中、高剂量组表达较模型组明显增强(P＜0.05).结论:雷公藤甲素能减少FSGS大鼠尿蛋白,改善肾小球硬化、球囊黏连及系膜基质增生的情况,上调血清及肾组织中Synaptopodin的表达,延缓肾脏病变程度.
关键词： 雷公藤甲素 局灶节段性肾小球肾炎 Synaptopodin 肾组织 -
高效液相色谱法测定雷公藤滴丸中雷公藤甲素的含量
目的:建立雷公藤滴丸中雷公藤甲素的高效液相色谱测定法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:Welch Xtimate C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈:水=25:75;流速:1.0mL/min;柱温:25℃;检测波长:218nm;进样量:20μL.结果:雷公藤甲素在浓度1-20μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程:Y=36 655X+8.3597(r2=0.9996),平均加样回收率101.12％,RSD为0.99％.结论:该方法操作简便、快速、灵敏,重复性好,精密度高,结果准确可靠,可用于雷公藤滴丸中雷公藤甲素的含量测定.
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电针对类风湿关节炎大鼠口服雷公藤甲素药动学及肝损指标的影响
目的:为电针联合雷公藤甲素(triptolide,TPL)治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA),同时减轻TPL所致的肝损提供增效减毒的实验依据.方法:RA模型采用弗氏完全佐剂(freund's complete adjuvant,CFA)建立,运用液相色谱-质谱联用技术(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)检测大鼠血浆TPL浓度,试剂盒测定肝匀浆中谷氨酸-丙酮酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)活性.结果:针药组大鼠足趾肿胀改善情况好,药物组次之,再者为电针组;在同一时刻电针刺“足三里”后的血药浓度高于单独口服TPL的浓度,TPL的药动学参数:达峰时间(Tmax)提前,峰浓度(Cmax)及药时曲线下面积(area under the curve,AUC)提高;针药组ALT、AST含量及MDA活性均较药物组降低,SOD活性则升高.结论:电针“足三里”可以减轻RA大鼠足趾肿胀,提高TPL的血药浓度,进而提高其生物利用度,同时还可减轻TPL对RA大鼠肝组织的损伤,提高其抗氧化应激能力.
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雷公藤甲素药理作用靶分子研究进展
雷公藤甲素(Triptolide,简称甲素)是一种二萜内酯美化合物,具有多种生物学活性.准确定位甲素各种药理作用相应的靶分子,不仅有利于揭示其药理作用机制,也可以为其分子结构改进相关研究提供理论基础,终达到减毒和增效的目的.因而甲素药理作用靶分子的筛选和鉴定成为研究的重点,并在近年来不断取得突破.本文就近年来对甲素药理作用靶分子相关实验研究作一综述,为相关研究人员和临床工作者提供参考.
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雷公藤药材中雷公藤甲素及总二萜内酯的含量测定
目的 建立雷公藤药材中雷公藤甲素及总二萜内酯含量测定的方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱:Platisil ODS柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(45∶55)为流动相进行洗脱,于218nnm波长处检测,测定雷公藤甲素的含量;采用Kedde显色法,在550nm波长处测定吸光度,测定总二萜内酯的含量.结果 以高效液相色谱法测定雷公藤甲素,在0.58～46.40μg·mL-1(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率为100.52％ (n =6);比色法测定雷公藤总二萜内酯(以雷公藤甲素计)在0.49-39.36μg·mL-1(r =0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率为93.28％(n=6);雷公藤药材中雷公藤甲素平均含量为4.20μg·g-1,总二萜内酯为86.64μg·g-1.结论 本实验所建立的方法稳定,精密度良好,适合于雷公藤甲素及总二萜内酯的含量测定,可用于雷公藤药材的质量控制.
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雷公藤甲素对胶原诱导型关节炎小鼠骨与关节的影响
目的 观察雷公藤甲素对胶原诱导型关节炎(CIA)模型小鼠骨与关节破坏的影响.方法 Ⅱ型胶原尾根皮下2次免疫诱导DBA/1小鼠建立CIA模型,第1次免疫后14～42 d,各给药组分别灌服雷公藤甲素(8.18、16.36、32.72μg/kg)和甲氨蝶呤(0.1 mg/kg),定期观察临床症状和发病情况,42 d取材,观察组织病理学和放射学变化,并用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)对破骨细胞特异性染色后进行TRAP阳性细胞计数.结果 雷公藤甲素能显著降低CIA小鼠的临床积分和发病率,减轻关节滑膜、软骨和骨的组织病理学变化及X光片的骨破坏程度,改善关节间隙,增加膝关节和腰椎骨密度,降低膝关节的骨髓腔和炎性肉芽组织中TRAP阳性细胞的数量.结论 雷公藤甲素对CIA小鼠的关节炎症和骨破坏具有一定的抑制作用.
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雷公藤甲素对Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠免疫功能的影响
目的研究雷公藤甲素对CIA小鼠免疫功能的影响.方法分离和培养原代小鼠脾T、B淋巴细胞测定细胞增殖活性(MTT法);流式细胞技术(FCM)检测外周血中CD4+、CD8+T细胞亚群含量;放射免疫分析法(RIA)测定脾细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量.结果雷公藤甲素能抑制ConA、LPS诱导刺激的脾T、B淋巴细胞增殖活性;抑制CD3+、CD4+T细胞和降低CD4+/CD8+比值,但对CD8+T细胞有增强作用;降低脾细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6水平.结论雷公藤甲素能抑制CIA小鼠的免疫功能,其作用机制可能是通过调节CD4+/CD8+比值平衡失调、抑制T、B细胞的增殖活性和内源性细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6的水平而实现的.
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类风湿关节炎患者雷公藤甲素血清浓度测定及其药动学研究
目的：建立雷公藤甲素血药浓度的超高效液相色谱检测法,并对类风湿关节炎患者口服雷公藤多苷片后雷公藤甲素的体内药代动力学进行初步探讨。方法入组3例类风湿关节炎患者,其血清以艾司唑仑为内标,用乙酸乙酯进行提取后进样测定。色谱柱为 Waters Acquity C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%冰乙酸(30∶70),流速为0.2 mL/min,柱温为30℃,检测波长为220 nm。血药浓度数据用DAS2.1.1药动学计算机程序处理。结果雷公藤甲素与内标物分离良好,保留时间分别为4.9、8.9 min左右。雷公藤甲素血药浓度在13.13～840.00 ng/mL范围内,峰面积与内标物峰面积比值之间的线性关系良好,日内、日间精密度均RSD＜15%,回收率为88.25%～99.33%。雷公藤甲素药动学参数Cmax、Tmax、T1/2β、AUC0-12 h分别为(159.97±42.43)ng/mL、(1.33±0.58)h、(7.51±2.26)h、(1131.12±89.20)mg?h/L。结论雷公藤甲素药动学符合二室模型,吸收迅速,个体之间存在差异。
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雷公藤药材中雷公藤甲素变异规律
目的:研究雷公藤药材中雷公藤甲素质量分数的变异规律,为雷公藤药材人工栽培遗传改良、采收加工、质量评价、产区区划提供理论依据.方法:HPLC测定雷公藤甲素质量分数.结果:给出了雷公藤药材中雷公藤甲素质量分数与种质、生长年限、采收季节的关系.结论:雷公藤药材木质部雷公藤甲素质量分数显著地受遗传因素的影响,而根皮受遗传因素的影响不明显;雷公藤甲素的积累需要一定的年限,但超过一定的年限,随着木质部次生代谢能力的由盛转衰而下降;木质部雷公藤甲素质量分数在冬季高,生长季节明显下降;根皮雷公藤甲素质量分数受季节的影响较小,规律不明显.
