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藏药紫金标抗HSV-1的作用机理研究
目的: 探讨紫金标抗单纯疱疹Ⅰ型病毒(HSV-1)的作用及机理,为进一步开发该药提供理论依据.方法:采用不同剂量的紫金标作用于适量HSV-1感染的Vero细胞,以50%组织细胞感染量(TCID50),细胞病变效应(CPE), MTT法和核酸分子杂交作为评价指标.结果: MTT法测得紫金标的50%抑制浓度(IC50)为29.46 mg·L-1, 50%中毒浓度(TC50) 为1 077 mg·L-1,治疗指数(TI)为36.56,结果表明紫金标有明显抑制HSV-1的作用,其作用强度和有效时间与药物浓度成正比.紫金标无直接灭活HSV-1的作用,也不能影响病毒的释放;但可干扰HSV-1对宿主细胞的吸附.不同浓度的紫金标能明显抑制HSV-1gD基因复制和Mrna表达.结论:紫金标具有显著的抗HSV-1的作用,能抑制HSV-1对宿主细胞的吸附以及抑制HSV-1gD基因复制与转录.
关键词： 紫金标 单纯疱疹病毒I型 MTT法 斑点杂交 Northern杂交 -
抗生素S632A3在体外抗肠道病毒及单纯疱疹病毒I型(HSV一1)作用的初步研究
目的:体外测定抗生素S632A3抗肠道病毒及单纯疱疹病毒I型的作用,为筛选新型抗病毒药物提供参考依据.方法:用不同稀释度的抗生素S632A3抑制3种肠道病毒及单纯疱疹病毒I型对vero细胞的感染作用,48h后观察细胞病变效应,并用MTT法测定细胞活性.结果:抗生素S632A3能明显抑制肠道病毒及疱疹病毒对Vero细胞的致病变作用,使细胞存活率升高.结论:该药物有较显著的抗肠道病毒及单纯疱疹病毒I型的作用,且对细胞的毒性很低,是一种具有潜在开发前景的药物.
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单纯疱疹病毒Ⅰ型StOcker株gD膜外区基因的克隆与序列测定
目的:为了克隆单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)gD膜外区基因.方法:采用Vero细胞培养HSV-Ⅰ Stocker株,并提取病毒DNA作为PCR模板.PCR扩增出的gD片段经EcoR I和PstI双酶切,插入质粒pBV220相应位点,转化E.coli DH5α.重组质粒经PCR、酶切鉴定命名为pBV220-gD.对克隆的HSV-I Stocker株gD基因进行序列分析,并与其他HSV-I、ⅡgD基因相应部分进行比较.结果:核苷酸序列同源性分别为99.77%、86.55%,氨基酸序列同源性分别为99.31%、88.28%.结论:HSV-I gD基因的克隆为表达该基因,进一步研制重组抗原诊断试剂、研究亚单位疫苗及gD、gD受体的结构功能奠定了基础.
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单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B核酸疫苗对小鼠血液学指标的影响
目的 检测单纯疱疹病毒I型糖蛋白B核酸疫苗(pcDNA3-gB)对小鼠血液生理学和血液生化学指标的影响,探索其安全性及实用性.方法 将不同浓度pcDNA3-gB(1 mg/ml、3 mg/ml、5mg/ml)通过肌肉注射免疫健康小鼠,对照组使用等量生理盐水,每10天免疫一次,共3次.末次免疫后24 h,检测各组小鼠9项血常规指标和9项血液生化学指标.结果 各组小鼠的全部血液生理、生化指标均较稳定,各试验组与对照组之间均无显著差异(P＞0.05).结论 不同剂量pcDNA3-gB免疫小鼠后,对小鼠的血液生理生化指标均无明显影响,初步证实了其安全性.
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荧光恒温扩增技术检测单纯疱疹病毒Ⅰ型 RNA 方法的建立
目的：利用荧光恒温扩增技术（SAT）建立一种快速、可靠的单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）检测方法。方法根据 Genbank 上获取 HSV-1开放读码框 Us5区域的 RNA 序列设计扩增引物及优化探针，使用 M-MLV反转录酶及 T7 RNA 多聚酶对 HSV-1 RNA 进行核酸扩增，同时利用荧光定量聚合酶链反应（PCR）仪进行实时荧光信号收集和检测。收集儿童病毒性脑炎或疑似患儿样本212份（脑脊液样本150份、血浆样本62份），以巢式 PCR +测序为参比方法，对 SAT 结果进行 Kappa 一致性分析。结果SAT 检测 HSV-1 RNA 的灵敏度为100拷贝/μL，采用 SAT 检测212份临床样本，共检测出18例 HSV-1阳性样本，巢式 PCR 检出16例阳性，经测序证实其中12例为阳性结果。SAT 与巢式 PCR+测序方法的 Kappa 值为0.785，其敏感性为100.0%、特异性为97.0%。结论建立的 SAT 检测脑脊液和血浆中 HSV-1 RNA 的方法具有敏感性高、特异性强、准确、快速、可靠的优点，适用于临床对单纯疱疹病毒性脑炎早期的快速诊断。
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施普善对HSV-1感染乳鼠脑神经细胞保护作用研究
目的 探讨施普善对HSV-1感染小鼠神经细胞保护作用.方法 建立HSV-1感染神经系统的小鼠模型,将模型分为未治疗和施普善治疗组,同时设正常对照组,比较各组小鼠病死率、血清NO、IL-lβ水平变化和电镜下小鼠神经细胞形态结构变化.结果 施普善治疗组小鼠病死率、血清NO及IL-1β水平均比未治疗组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);电镜下施普善治疗组小鼠神经细胞,髓鞘病变均较轻.结论 施普善可能通过降低HSV-1感染小鼠血清NO、IL-1β水平,减轻神经细胞的炎症反应及细胞因子引起的神经毒性作用,达到对神经细胞的保护作用.
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刺参糖胺聚糖对单纯疱疹病毒Ⅰ型抑制作用的实验研究
目的 探讨刺参糖胺聚糖对单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)I型的抑制作用以及对感染小鼠的保护作用.方法 以Vero细胞为靶细胞,接种HSV-1SM44毒株,同时分别加入不同浓度的刺参糖胺聚糖,观察细胞病变和定量PCR检测刺参糖胺聚糖的抗病毒作用;体内实验以HSV-1SM44毒株颅内接种感染小鼠,4h后以不同剂量的刺参糖胺聚糖灌胃,观察刺参糖胺聚糖对感染病毒小鼠的保护作用.结果 刺参糖胺聚糖浓度在1.6mg·mL-1以上时,表现出对Vero细胞的毒性作用;在0.25～0.2mg·mL-1浓度范围表现出抗病毒活性,且具有一定的量效关系.对细胞无毒性作用.动物实验表明颅内感染小鼠刺参糖胺聚糖灌胃后,存活时间延长,死亡数明显减少;且呈一定正相关.结论 刺参糖胺聚糖具有抗HSV-I、保护HSV-I感染小鼠的作用.
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应激对小鼠单纯疱疹病毒I型潜伏感染再激活的影响
目的探讨不同应激对小鼠三叉神经节潜伏感染的单纯疱疹病毒再激活的影响,以期对疱疹病毒复发性感染的发病机制有更深的了解.方法给潜伏感染单纯疱疹病毒I型的小鼠施加高热、过度疲劳、寒冷等不同刺激,然后检测小鼠应激反应后三叉神经节单纯疱疹病毒I型抗原的表达.结果高热、过度疲劳和寒冷应激在小鼠三叉神经节均不同程度地检测到活化的病毒,以高热应激组病毒再激活的数目多.结论应激可以诱发小鼠三叉神经节内潜伏感染的单纯疱疹病毒I型再激活,是单纯疱疹病毒复发性感染的重要诱因.
