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伪狂犬病病毒湖北株糖蛋白gD基因的克隆及序列测定
伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)是多种家畜和野生动物发生伪狂犬病的病原体.该疾病对畜牧业,特别是对养猪业的危害较为严重,两周龄内仔猪致死率可高达100%,成年猪可发生呼吸系统感染症,康复猪可潜伏感染,终生带毒,给世界各国养猪业造成巨大经济损失[1].阐明PRV与宿主的相互关系,研制安全有效的PRV基因工程疫苗成为目前研究的热点.
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单纯疱疹病毒Ⅰ型StOcker株gD膜外区基因的克隆与序列测定
目的:为了克隆单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)gD膜外区基因.方法:采用Vero细胞培养HSV-Ⅰ Stocker株,并提取病毒DNA作为PCR模板.PCR扩增出的gD片段经EcoR I和PstI双酶切,插入质粒pBV220相应位点,转化E.coli DH5α.重组质粒经PCR、酶切鉴定命名为pBV220-gD.对克隆的HSV-I Stocker株gD基因进行序列分析,并与其他HSV-I、ⅡgD基因相应部分进行比较.结果:核苷酸序列同源性分别为99.77%、86.55%,氨基酸序列同源性分别为99.31%、88.28%.结论:HSV-I gD基因的克隆为表达该基因,进一步研制重组抗原诊断试剂、研究亚单位疫苗及gD、gD受体的结构功能奠定了基础.
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传染性喉气管炎病毒gD基因重组禽痘病毒的制备、纯化及初步鉴定
目的 制备传染性喉气管炎病毒(ILlv)gD基因重组禽痘病毒,并进行纯化及初步鉴定.方法 将含有ILTV河南长葛株gD基因的禽痘病毒转移载体转染禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞,采用蓝色蚀斑筛选纯化重组禽痘病毒,并经PCR及间接免疫荧光试验(IFA)进行鉴定.结果 经过5轮蚀斑筛选纯化,获得1株重组禽痘病毒rFPV-ILTV-gD,其PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,可见约1400 bp的ILTV gD特异性条带.IFA检测显示重组禽痘病毒中的ILTV gD基因得到了表达.结论 已成功制备并纯化了ILTVgD基因重组禽痘病毒,为预防ILT提供了新的途径.
