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优化和验证人精浆miRNAs提纯方法
目的 优化精浆miRNAs提纯方法,为后续实验奠定基础. 方法 收集国家卫生计生委科研所生殖健康服务中心正常精液样本5例,非梗阻性无精子症(NOA)患者(经北京大学第三医院检查确诊)精液样本22例.根据不同RNA提取方法分为4组:Trizol LS组、蛋白酶K+Trizol LS组、miRNeasy Micro kit组及Trizol LS+miRNeasy Micro kit联合使用组(改良组).比较4组提纯NOA患者精浆RNA的OD260/280,使用Agilent2100生物分析仪检测改良法提纯精浆miRNAs的纯度和质量,采用实时定量PCR方法比较4组精浆miR-106b的溶解曲线,并比较精液参数正常组(n=5)和NOA患者组(n=10)精液样本中的miR-106b的表达量. 结果 改良组提纯精浆RNA的OD260/280为(1.90±0.03)显著高于其他3组(P<0.05);改良组提纯精浆miRNAs的完整数合格,色谱图位置特异性明显,峰值清晰;4组miR-106b的溶解曲线中,改良组曲线符合标准;NOA患者精浆中miR-106b的表达丰度显著低于参数正常组(P<0.01). 结论 Trizol LS与miRNeasy Micro kit联合使用提纯的精浆miRNAs质量好,能满足后续实时定量PCR、深度测序等实验要求.小样本分析发现NOA患者精浆miR-106b含量显著低于精液参数正常组,有待大样本验证其是否能作为临床诊断NOA的分子指标.
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精子发生的调节机制及其进展
精子发生是一个复杂的过程，受多种因素的精细调节以确保把正确的基因和表观遗传信息传给子代，包括激素(如FSH、LH、T和E2等)、局部调节因子(如FGF9、SHP-2以及VEGF等)以及miRNAs的调节。本文将从精子发生的激素调节、睾丸内的调节因子、miRNAs与精子发生关系等方面的研究进展进行综述。
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MicroRNAs作为环境暴露或效应标志物的研究进展
随着基因组学的发展,人们发现编码基因序列并不能完全解释所有的遗传效应,而环境暴露和非编码基因序列等在机体的病理、生理过程中也起重要作用.因而,表观遗传学逐渐受到关注.从生命早期到成年时期暴露的各种环境有害因素均可增加机体患病风险.microRNAs(miRNAs)在转录后翻译水平调控蛋白质的表达,能与一种或多种靶mRNAs相互作用,几乎参与了生命体所有的病理、生理过程,可作为疾病早期生物标志物.同时,miRNAs易受环境因素影响,在从暴露到出现健康效应的过程中起重要的调节作用,有望作为环境暴露或效应生物标志物.由此,在环境暴露危险度评价中,miRNAs将发挥越来越重要的作用.
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MicroRNAs在心肌梗死后心肌纤维化中的作用
心肌梗死是一类严重危害人类健康和生命安全的重要疾病,心肌梗死后心脏重构导致的心力衰竭是患者发生不良预后及死亡的主要原因.心肌纤维化是心肌梗死后心脏重构重要的病理过程之一,其发生机制可能涉及到细胞凋亡及细胞信号调节等,MicroRNAs (miRNAs)可通过调控多种与心肌纤维相关的信号通路和抑制多种细胞外基质蛋白的表达参与心肌纤维化过程,本文对与心肌梗死后心肌纤维化相关的几种主要miRNAs的表达、调控及其心脏修复的作用作一综述.
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MicroRNAs与胃癌早期诊断、化疗耐药及预后的作用机制研究进展
胃癌是世界范围内常见的恶性肿瘤之一.由于胃癌早期缺乏特异性临床症状,患者确诊时常已处于进展阶段.进展期胃癌往往需要联合化疗,但由于化疗多药耐药的存在,常导致疗效不佳.而确诊晚、化疗耐药等一系列问题严重影响了胃癌的预后.因此,提高胃癌的早期诊断率,监测预后情况,清晰了解胃癌耐药的相关机制并进行靶向治疗对提高胃癌整体生存率至关重要.大量研究表明,microRNAs(miRNAs)参与胃癌的侵袭、转移、预后及化疗耐药等.此篇综述总结了近期发现的与胃癌诊断、预后、耐药等相关的miRNAs,如miRNA-627、miRNA-629、miRNA-652(诊断),miRNA-10b、miRNA-21、miRNA-223、miRNA-338、let-7a、miRNA-30a-5p、miRNA-126(预后),miRNA-181b和miRNA-497(耐药),有利于胃癌相关生物学标志物研究的发展.
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神经生长分化相关miR-124a与miR-9在癫痫发生中表达动态改变的研究
目的 探讨神经生长分化相关miR-124a和miR-9在癫痫发生各时间点上表达水平的动态变化.方法 将56只Sprague-Dawley大鼠随机分为2组:正常对照组(n=6)、实验组氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫持续状态(SE)致痫大鼠组(n=50).观察SE发作时的动物行为学改变,并行长程视频监测,观察慢性期自发性癫痫的发作情况.选取SE后l、7、14和28 d为主要研究时间点(每组6只),适时处死动物、获取组织标本.同时处死、获取正常对照组(n=6)大鼠的组织标本.提取各时点上大鼠海马脑组织中总RNA,应用荧光定量qPCR检测大鼠海马脑组织中miR-124a和miR-9表达,明确其在上述各研究时点上的表达水平,统计学分析miR-124a和miR-9在各研究时点上的表达差异和动态变化.结果 实验组(n=50)大鼠中有40只进入SE.与正常对照组比较,miR-124a的表达水平在SE后l d变化不明显(P＞0.05),但在其后7、14、28 d呈现显著下降趋势,与对照组比较有统计学意义(P＜0.05),该趋势随时间点延长愈加明显.与正常对照组比较,miR-9的表达水平在SE后1、7、14和28d呈现显著升高趋势(P＜0.05),miR-9的表达上调在SE后7d存在波动,但其总体呈上升趋势,并随时间点延长愈加显著.结论 神经生长分化相关miR-124a和miR-9在SE后大鼠海马癫痫发生中呈现表达下调或上调的动态变化,推测miR-124a和miR-9表达动态改变与癫痫发生机制有关,可能参与了 SE后海马神经再生和重塑.
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microRNA在酒精毒性机制中作用及叶酸保护机制的研究
MicroRNAs(miRNAs)是一种由22个核苷酸组成的小的非编码的RNAs,序列特异性的靶向结合并调节mRNAs的表达.miRNAs调节的靶基因广泛涉及到发育、细胞增生、凋亡、和肿瘤基因.
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MicroRNAs与肝纤维化及相关中医药研究的进展
肝纤维化是由多种原因引起的慢性肝损害所导致的病理改变.肝星状细胞(HSC)激活、增殖和凋亡等是肝纤维化发生、发展的中心环节.MicroRNAs(miRNAs)是19-24核苷酸长度的内源性单链非编码小RNA分子,在转录后水平调控多基因的表达,是表观遗传基因调控网络中的重要部分.肝纤维化过程中多种miRNAs异常表达,miRNAs通过调控其靶基因参与HSC相关信号通路,从而介导肝纤维化的发生发展;miRNAs在肝纤维化诊断及治疗中具有重要作用;miRNAs可作为治疗肝纤维化干预的靶点,用以阐释中药的抗肝纤维化机制研究;miRNAs与慢性肝病的中医证候相关,在肝纤维化的证候研究方面具有很大的前景.本文就miRNAs在肝纤维化及与中医药的相关研究进展作一综述.
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地黄植株体内miRNAs与其连作障碍关系的研究进展
MicroRNAs是一类内源性小分子的非编码RNA,它通过对其靶基 因的降解或抑制翻译来调控基因表达,进而调控植物的生理活动.植物在遇到逆境胁迫时,miRNAs 会作用于与逆境相关的基因,启动体内的抗逆机制抵抗不利因素.地黄的连作障碍也是一种胁迫,从miRNAs水平上研究,有利于解读地黄连作障碍的分子机制.该文对地黄体内miRNAs的功能及调控 机制进行了综述,并对miRNAs在地黄的研究中进行了展望.
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转染miRNAs降低脂多糖诱导的大鼠肠微血管内皮细胞水通道蛋白1表达
目的 探讨大鼠肠微血管内皮细胞miRNAs对脂多糖(LPS)诱导的水通道蛋白1(AQP1)表达的影响.方法 用机械吹打法及胰蛋白酶消化法从大鼠空肠分离微血管内皮细胞,用免疫荧光染色鉴定细胞;用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测AQP1和miRNAs的表达;miRNAs芯片分析结合在线软件筛选调控AQP1表达的miRNAs,瞬时转染miRNAs模拟体及对照序列进行进一步验证.结果 肠微血管内皮细胞vWF免疫荧光染色为阳性.用LPS(0、0.1、1和10 mg/L)处理细胞后,AQP1 mRNA表达水平随LPS浓度增加呈下降趋势,其中1和10 mg/L LPS处理细胞后AQP1 mRNA表达水平与对照组相比有明显差异(P<0.05和P<0.001);与对照组相比,LPS处理组有22个表达上调2倍以上的miRNAs及9个下调2倍以上的miRNAs;软件预测显示芯片结果中的miR-423-5p、miR-874-5p、miR-361-3p、miR-219a-5p、miR-27b-3p、miR-133b和miR-666可与AQP1启动子区互补配对;miR-874-5p、miR-361-3p、miR-133b和miR-666在LPS处理后的肠微血管内皮细胞中表达上调;转染miR-133b和miR-666模拟体后可使AQP1 mRNA表达水平下调.结论 LPS可通过上调miR-133b和miR-666表达水平,间接抑制AQP1的表达,继而影响肠黏膜通透性.
关键词： miRNAs 脂多糖 水通道蛋白1 大鼠肠微血管内皮细胞 -
衰老相关miRNAs的筛选及鉴定
目的 以快速老化模型SAM小鼠的海马组织作为研究对象,通过miRNA芯片大规模筛选与衰老相关的miRNAs,为探讨衰老的机制提供线索.方法 随机各选取3只4、8和12月龄SAMP8及SAMR1小鼠,提取海马组织RNA进行芯片检测;以snRNA U6作为内参,SYBR Green作为染料,用real-time PCR方法进行验证,对miRNA的表达进行相对定量分析.结果 对比miRNA芯片和real-time PCR验证结果,证实芯片结果具有相对较好的重复性和真实度.对3张miRNA芯片结果进行综合分析,在4和8月龄均表现出表达差异的miRNA共7个,在8和12月龄均表现出表达差异的miRNA共8个,4和12月龄均表现出表达差异的miRNA共3个,在3个月龄间均表现出明显表达差异的1个(miR-9*).结论 miRNAs在SAMP8及SAMR1的差异表达提示其在SAMP8衰老进程中发挥重要作用.
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LIN28B调控miRNAs维持MCF-7肿瘤干细胞的干性特征
目的 研究LIN28B对人乳腺癌细胞(MCF-7)肿瘤干细胞的干性状态维持的作用机制.方法 在MCF-7细胞中瞬时过表达LIN28B,用qPCR和Western blot检测干性相关基因SOX2、NAONG、c-Myc和OCT4的表达;用流式细胞仪检测CD44high/CD24low细胞亚群的比例;利用体外成球培养检测肿瘤干细胞自我更新的能力,通过RNA第二代测序技术检测在LIN28B过表达后MCF-7细胞中miRNAs的表达差异,通过转染差异表达的miRNA,检测其对MCF-7细胞肿瘤干细胞比例和体外成球能力的影响.结果 转染p-CMV6-LIN28B后能明显提高LIN28B的mRNA和蛋白水平(P＜0.001);过表达LIN28B后MCF-7细胞中SOX2、NANOG和OCT4在RNA和蛋白水平表达都明显增高(P ＜0.05);CD44high/CD24low细胞比例由1.71％上升至11.60％ (P ＜0.05);体外成球培养发现成球细胞数量明显增多(P＜0.01);通过RNA测序发现有16个miRNAs在LIN28B过表达后差异表达倍数在2倍以上且P＜0.05,LIN28B过表达后miR-92b-5p表达显著上调(P＜0.01);转染miR-92b-5p mimic后MCF-7细胞的CD44high/CD24low细胞比例由1.14％上升至3.59％ (P ＜0.05),体外成球能力明显增强(P＜0.01).结论 LIN28B能维持MCF-7肿瘤干细胞的干性状态,其作用机制可能是通过miRNAs的表达来实现的.
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miRNA与缺血性疾病中的血管新生
MicroRNAs(miRNAs)是存在于真核生物中一类长度约为20～24 nt的非编码小分子单链RNA,可调控多种基因的表达.研究发现,缺血性损伤组织中一系列的miRNAs表达发生了明显变化,且其改变可显著影响缺血组织的血管新生.
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肿瘤及其微环境源性外泌体miRNAs在致癌机制、肿瘤诊断和治疗中的研究进展
肿瘤及其微环境来源的外泌体miRNAs可以促进肿瘤细胞增殖和侵袭运动;通过介导肿瘤细胞与免疫细胞、转移靶器官间的信息交流促进肿瘤细胞定向转移;诱发肿瘤细胞对顺铂和吉西他滨等的耐药;同时针对肿瘤患者血清和唾液中外泌体miRNAs的检测显示出应用于肿瘤诊断和预后判断的潜在重要价值.
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miRNAs在心肌梗死和心力衰竭中的作用
miRNAs(microRNAs,miRs)在调节心脏病理生理的发展过程中起着极其重要的作用.miRNAs可作为诊断心血管病敏感且特异的标志物,在不同的心肌损伤中其表达水平和表型各不相同.充分利用miRNAs的调节机制可以更精确且有效的治疗心血管疾病.
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肿瘤干细胞与肿瘤靶向治疗
肿瘤干细胞(TSC)理论认为,肿瘤内部存在的一小部分具有干细胞特性的细胞,是肿瘤形成、生长、转移和复发的根源,只有靶向肿瘤干细胞的治疗才能使恶性肿瘤治愈.目前肿瘤的治疗只能杀死大部分已分化的肿瘤细胞,不能杀死肿瘤干细胞,造成了肿瘤治疗效果的不理想.扰乱维持肿瘤干细胞自我更新的信号通路和微环境;或诱导肿瘤干细胞的分化;或针对肿瘤干细胞所表达的区别于正常干细胞的表面标志的靶向治疗都是可行的策略.
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非编码RNA在棕色/米色脂肪细胞发育中的调控网络
棕色脂肪组织(BAT)的主要作用是燃烧脂肪产热和消耗能量去防御寒冷和肥胖.大量的研究表明:通过各种措施提高BAT的活性可调节代谢稳态和导致一个健康的表型.近年来研究显示非编码RNA (ncRNA):microRNA (miRNA)和长链非编码RNA(lncRNA)在棕色和米色脂肪细胞的分化和代谢中扮演重要的调节作用.本文主要就一些对棕色和米色脂肪细胞发育、分化和功能起调节作用ncRNA进行综述,以期通过对提高BAT活性的靶向ncRNA的研究进行肥胖及其相关疾病的治疗提供新的思路.
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miRNAs对血管平滑肌细胞功能的调节与心血管疾病
miRNA(miRNAs)是一类长约18～24个核苷酸的高度保守性的小分子非编码RNA,主要通过与特异性靶基因mRNA 3' -UTR区结合来调控基因的表达.miRNAs与细胞增殖、分化、凋亡、胚胎发育、组织器官等形成以及多种疾病的发生发展密切相关.新近研究显示,miRNAs对血管心血管平滑肌细胞功能及心血管疾病的发生发展起着重要的调节作用.本文就miRNAs对血管平滑肌细胞功能的调节及心血管疾病的病理生理学意义作一概述.
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miRNAs与脂蛋白酯酶
miRNAs是一类具有调控基因功能的非编码RNAs,它在细胞核中合成,可转运至细胞质,调控脂质代谢相关性疾病的发生发展.脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL)作为甘油三酯水解的限速酶,由心肌、脂肪、骨骼肌、乳腺及巨噬细胞等实质细胞合成和分泌,在脂蛋白转运和脂质代谢过程中发挥重要作用.近期研究证实多种miRNAs,包括miR-29、miR-467b、miR-590、miR-27、miR-134和miR-186,可通过调控脂蛋白酯酶LPL的表达,进而影响脂质代谢.为了深入探讨miRNAs对LPL的影响,本文以miRNAs对LPL的调控作用进行综述,期望以miRNAs为靶点,为脂质代谢相关性疾病的防治提供治疗方案.
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非编码RNAs对骨骼肌发育及疾病的调控作用
非编码RNAs(noncoding RNAs,ncRNAs)包括长链非编码RNAs (long noncoding RNAs,lncRNAs)和小RNAs(microRNAs,miRNAs),与成肌分化、肌纤维类型的调控和骨骼肌疾病关系密切;近期循环ncRNAs成为研究热点,可用作某些疾病的潜在血浆分子标志物,对疾病早期进行筛选.通过研究ncRNAs在骨骼肌发育中的作用及机制将会为骨骼肌疾病的治疗提供潜在靶点.
