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IRIVs:具有免疫增强作用的重组流感病毒体
具有免疫增强作用的重组流感病毒体(immunopotentiating reconstituted influenza virosomes,IRIVs)作为一种脂质体运载体系,已获准用于人体,它能安全有效地运送和特异性地靶向抗原,其中包括灭活的病毒蛋白、合成肽、DNA和RNA等现代疫苗,从而诱导细胞免疫或体液免疫应答[1].
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兔抗大鼠LM23蛋白合成肽多克隆抗体的制备与初步应用
目的 制备大鼠精子发生相关蛋白LM23的合成肽多克隆抗体, 对其特性进行初步鉴定,并对LM23多克隆抗体进行初步应用. 方法 利用生物信息学方法分析选择LM23蛋白的多肽序列.应用Fmoc法化学合成大鼠LM23蛋白N端第1～20和第274～291个氨基酸多肽(接近C端), 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法,将纯化的LM23蛋白的多肽与KLH交联,免疫新西兰大耳白兔,获得LM23蛋白的多克隆抗体.用ELISA方法鉴定多克隆抗体效价.通过Western blot方法鉴定LM23多克隆抗体的特异性并研究LM23在大鼠睾丸中的表达;通过免疫组化方法研究LM23在大鼠睾丸组织和细胞中的定位. 结果 化学Fmoc法分别合成大鼠LM23蛋白N端第1～20,第274～291个氨基酸多肽, 纯化后两条多肽纯度都达到90%以上, 符合免疫用抗原标准.将多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经ELISA鉴定,两种多克隆抗体的效价分别达到1∶64 000 和 1∶128 000.应用大鼠睾丸组织切片进行LM23-18肽多克隆抗体的免疫组织化学研究,发现精母细胞有阳性颗粒反应,且LM23主要表达于细胞核. Western blot 研究证实,LM23-18肽多克隆抗体可特异识别大鼠睾丸组织中相对分子量(Mr)约为36 kD的LM23蛋白. 结论 所制备的LM23合成肽多克隆抗体可用于ELISA、Western blot及免疫组化研究.LM23合成肽多克隆抗体的制备为进一步研究LM23的功能和作用机制提供了有力支持.
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合成肽技术用于流感病毒快速免疫诊断的分析
高致病性禽流感病毒感染人类病例发现后,因其大规模危害性和病毒高度变异性决定了对流感病毒的研究必须不断加强;也决定了针对流感病毒这类高变异病毒的识别诊断技术研究必须是动态的、灵活的和快速反应型,才能符合当前新发传染病不断出现的诊断需要.合成肽技术的简便易行使之成为能够针对流感病毒变异作出快速反应,并迅速建立有效的快速检测方法的首选技术平台.为此,结合合成肽技术发展的特点,就其针对不同亚型流感病毒的病原学和血清学精确诊断优势作一综述.
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业精务博诲人不倦--记20世纪化学家、生物化学家、生物物理学家罗伯特·施维兹
罗伯特*施维兹 (Robert.Schwyzer) 是20世纪的著名化学家、生物化学家和生物物理学家.他是人工合成生物活性肽及研究肽与膜相互作用的奠基人.他还发展了分离肽与合成肽的技术方法.他的优秀弟子有包括2002年诺贝尔奖获得者Kurt Wuethrich在内的数十名.以下介绍他的业绩.
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VEGF受体结合抑制肽的筛选及其特性鉴定
目的筛选能抑制VEGF与血管内皮细胞表面受体结合的VEGF模拟短肽,探讨小分子短肽作为血管内皮细胞生长抑制剂、肿瘤疫苗的可行性. 方法以抗-VEGF单克隆抗体分别对噬菌体随机7肽、12肽库进行筛选.通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定.用噬菌体克隆免疫小鼠检验这种短肽可否模拟VEGF的抗原决定簇诱发机体产生能与VEGF结合的抗体,研究小鼠抗血清、噬菌体表达的7肽和12肽以及人工合成7肽对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)生长的抑制作用. 结果对肽库进行3轮筛选后,噬菌体克隆具有良好的富集效果.硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100%,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列:GWYYDAL、VASAVFYSALVE.这两种噬菌体短肽免疫小鼠能激发产生高效价的抗-VEGF抗体.噬菌体表达的7肽和12肽对HUVEC的生长有明显的抑制作用.由短肽GWYYDAL阳性克隆免疫的抗血清对VEGF诱导的内皮细胞生长起抑制作用,人工合成的7肽(GWYYDAL)呈剂量依赖性阻拮VEGF促HUVEC增殖作用. 结论从噬菌体肽库中筛选到的噬菌体短肽GWYYDAL、VASAVFYSALVE模拟了VEGF的抗原表位,为研究VEGF受体结合抑制肽和设计肿瘤疫苗奠定了实验基础.
关键词： 噬菌体随机展示肽库 血管内皮细胞生长因子 抗原表位 合成肽 疫苗 -
SARS冠状病毒S蛋白表位合成肽抗原性的研究
目的研究SARS病毒合成肽疫苗.方法根据目前已知SARS病毒的基因组序列及其编码的蛋白质,选择了SARS病毒编码的spike蛋白抗原表位蛋白质序列,运用计算机抗原表位预测技术,筛选抗原表位,以合成肽抗原表位.通过对SARS病人血清进行筛选确定与血清高交叉反应的3个短肽,再合成多重抗原肽(multiple antigenic peptide,MAP),与KLH偶联后免疫小鼠.结果筛选的3条与SARS病人血清反应强的肽,免疫小鼠均产生了高效价的抗体.结论以合成肽为免疫原研究SARS病毒肽疫苗有着广阔前景.
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以合成肽作抗原的酶联免疫吸附法检测抗精子抗体
血清、精浆和宫颈粘液中的抗精子抗体(AsAb)是导致不孕和自然流产的原因之一。现常用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测AsAb，但该法以正常生育者的精子直接或制成包被抗原来包被酶标板［1］，受抗原来源限制，且稳定性和重复性不理想。本研究用人工合成的特异性精子肽作包被抗原，以ELISA检测AsAb，取得较满意结果。
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MUC5AC、MUC6核粘蛋白合成肽诱导小鼠抗肿瘤免疫反应
目的:探讨MUC5AC,MUC6核粘蛋白合成肽在诱导小鼠抗肿瘤免疫反应中的作用.方法:采用动物实验方法观察MUC5AC和MUC6黏核蛋白的合成肽诱导小鼠的细胞和体液免疫反应及其淋巴细胞体外抗肿瘤作用.结果:MUC5AC,MUC6合成肽可诱导小鼠产生相应的抗体及迟发型过敏反应,但不能产生脾淋巴细胞的明显增生及体外抗7901胃癌细胞株的作用.结论:MUC5AC,MUC6合成肽免疫小鼠可引发体液及细胞免疫反应,但尚不足以产生淋巴细胞毒作用.
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GB病毒B型(GBV-B)感染的临床与免疫病理研究
目的自从建立起甲、乙、丙、丁、戊5种肝炎病毒的病原学诊断之后,仍有少部分肝炎患者的病因得不到明确,因此不少学者试图探索是否还有新型肝炎病毒的存在,并进行了大量的流行病学和实验诊断的研究,认为的确存在可经肠道外传播并引起人类肝炎的致病因子.1995年Simons et al成功地克隆出2株黄病毒RNA序列,称之为GBV-A,GBV-B.继而从一名西非患者血清中克隆出另一黄病毒RNA序列,称之为GBV-C.1996年初美国另一研究小组从一名慢性输血后肝炎患者血清中克隆出一株黄病毒RNA序列,称之为HGV.进一步的研究后认为GBV-C,HGV为同一病毒的不同分离株.动物实验发现,GBV-B可单独引起动物发病,而GBV-A单独感染时未能引起发病.本文以此为依据,对GBV-B感染者的临床与免疫病理加以研究,试图探讨GBV-B对人体肝脏的致病性及其在人体内的分布状态.方法根据GBV-B NS5区的核苷酸和氨基酸序列,通过计算机软件对其抗原位点进行了预测,并分析其亲水性、键流动性、电荷状态及抗原表位分布等特性,合成一条30个氨基酸多肽.探讨合成肽佳包被量之后,成功地建立了间接ELISA法,用来检测抗-GBV-B.应用此方法检测各型肝炎及其他高危人群血清标本1286份.同时应用RT-PCR检测血清中GBV-BRNA及免疫组化检测肝炎患者肝组织相关病毒抗原.结果经鉴定合成肽纯度在95%以上,氨基酸分析的实际值与理论值基本一致.将合成肽与牛血清清蛋白(BSA)偶联免疫白兔获得高效价抗-GBV-B NS5区的多克隆抗体(PcAb).批内、批间变异系数分别为6.06%和7.65%(均＜10%);中和抑制试验结果证明我们建立的ELISA法具有较好的特异性.血清抗-GBV-B检测结果表明各型肝炎患者血清抗-GBV-B阳性率为10.56%;其中非甲～非戊型肝炎患者血清抗体阳性率为8.57%;肝炎高危人群如献血员、血液透析者及静脉药瘾者血清抗-GBV-B阳性率分别为2.90%,8.62%及13.44%.随机抽取抗-GBV-B阳性和抗-GBV-B阴性血清标本各32例进行RT-PCR检测GBV-BRNA,结果64例均为阴性.应用抗-GBV-B多克隆抗体为试剂,对42例肝炎患者肝组织进行免疫组化研究,均未检测出GBV-B相关抗原.结论提示GBV-B可能不是人类肝炎病毒,对人体肝脏的致病性轻微,其抗体在不同人群中出现可能是一种短暂的感染,其意义有待进一步研究.
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P2蛋白及其合成肽与实验性变态反应性神经炎的研究
概述了P2蛋白及其合成肽SP26的免疫学特性,对P2的理化性质、结构、体内分布以及P2-EAN模型进行分析,探讨实验性变态反应性神经炎的发病机制,以期提高吉兰-巴雷综合征诊断、治疗、预防水平.
关键词： P2蛋白 合成肽 实验性变态反应性神经炎 -
复发性阿弗他溃疡和热休克蛋白的关系
既往对复发性阿弗他溃疡(recurrent aphthous ulcer, RAU)自身免疫学说尚未提出有说服力的实验证据,本研究旨在探讨:①RAU患者T细胞是否对分枝杆菌热休克蛋白(heat shock protein, HSP)合成肽发生特导性增殖;②与分枝杆菌HSP65同源的人类线粒体HSP60合成肽能否同样刺激RAU患者T细胞特异性增殖.
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卡泊芬净醋酸酯
卡泊芬净醋酸酯(caspofungin acetate)是由Glarea lozoyensis的发酵产物合成得到的半合成肽化合物(棘白素类).卡泊芬净是新一类抗真菌药物(葡萄糖合成酶抑制剂)的第一个上市产品,通过抑制真菌细胞壁的重要组成成分β(1,3)-D-葡萄糖的合成而发挥抗真菌作用.
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几种新型合成肽的体外稳定性和酶降解机制研究
目的:建立体外胰混合酶和胃蛋白酶的代谢评价模型,评价3种新型黄体生成素释放激素(LHRH)拮抗剂十肽A,B和C的体外代谢稳定性;用大鼠肝组织匀浆模型和蛋白酶抑制剂研究其降解机制,以便为该类化合物的结构优化提供实验基础.方法:采用盒式给药法,将3种肽分别与胰混合酶、胃蛋白酶在体外温孵,用高效液相色谱法测定不同时间点的合成肽的浓度,计算各个肽的半衰期,用以比较其稳定性大小;将其中较稳定的肽与大鼠肝组织匀浆和几种蛋白酶抑制剂在体外温孵,初步判断参与合成肽降解的蛋白酶类型.结果:3种合成肽在胰混合酶中的半衰期分别为108,60,44 min,作为对照组的degarelix的半衰期为84 min;3种合成肽在胃蛋白酶中温孵4h后,原型药物的保留率分别为94.5％,88.2％,94.1％,对照组degarelix的原型保留率为82.7％.其中较稳定的肽A与大鼠肝匀浆和各种酶抑制剂共同孵育1h后,加入氨肽酶抑制剂、胰蛋白酶抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂的实验组,原型药物的剩余量明显高于degarelix对照组,有显著性差异,而加入金属蛋白酶抑制剂的实验组,和对照组相比,则无显著性差异.结论:3种合成肽中,其中肽A在体外胰混合酶、胃蛋白酶中的稳定性较好;肽A在大鼠肝匀浆中的降解可能与氨肽酶、丝氨酸蛋白酶和胰蛋白酶有关.提示在该类LHRH拮抗剂的结构优化过程中,应着重考虑这几种酶的降解.
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基于甲型流感病毒血凝素的广谱流感疫苗研究进展
目前使用的流感疫苗都是针对现行流行株设计的,因此难以有效应对病毒快速变异出现的新病毒株,而开发能同时抵抗多个流感病毒株感染具有交叉保护作用的通用疫苗是今后流感疫苗研发的趋势.本研究对近年来基于流感病毒血凝素构建的通用流感疫苗作一综述.
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甲肝疫苗Epaxal Berna的特性
脂质被认为是提高一些抗原和可溶、无膜蛋白或合成肽免疫原性的一种好的物质.到目前为止,仅有铝盐是人类使用的辅助剂.这些疫苗可在接种部位引起轻度至中度的反应.
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合成肽检测柯萨奇B病毒IgM抗体及治疗病毒性心肌炎
1.应用柯萨奇B病毒(CVB)蛋白合成肽抗原检测病毒性心肌炎(VMC)患者血清中CVBIgM抗体.
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合成肽技术在抗生育研究中的应用
免疫性避孕疫苗的研究是当前计划生育研究的重点之一。利用受精相关分子抗原表位肽的氨基酸序列合成的嵌合肽具有成分明确、安全性高、易于大量制备等优点，适合于开发抗生育疫苗，并已获得了一定成效。
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兔抗人细胞色素P450 1A2多克隆抗体的制备及鉴定
目的:制备兔抗人细胞色素P450 1A2(CYP1A2)抗体及其特性鉴定.方法:利用生物信息学方法分析CYP1A2蛋白的序列,根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择多肽序列,合成CYP1A2多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,免疫日本大耳白兔制备抗CYP1A2抗体.辛酸-硫酸铵法纯化抗体,间接ELISA法测定抗体的效价及相对亲和力常数,Western blot鉴定其特异性,免疫组化进行定位.结果:获得针对小分子CYP1 A2的抗体.该抗体效价为1∶16 000;相对亲和力常数在105～106/M,具有实用价值;可与CYP1A2合成肽及天然CYP1A2出现特异性反应;可识别正常人肝脏组织CYP1A2;Western blot的结果显示,该抗体识别的相应抗原的相对分子质量为58 000.结论:合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体.制备的兔抗CYP1A2合成肽抗体可应用于酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫组化实验.
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人睾丸特异性新基因hTSC29合成肽单克隆抗体制备与鉴定
目的：制备和初步鉴定人睾丸特异性新基因hTSC29（ GenBank 登录号： BC032957）合成肽的单克隆抗体（ mAb）。方法：利用生物信息学方法对hTSC29的蛋白质序列进行分析和预测，根据免疫原性、表露性、亲疏水性及柔韧性4个参数，合成一段由18个氨基酸组成的多肽，并以此为抗原免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合后，通过有限稀释法筛选阳性克隆，采用ELISA法、Western blot、免疫组化和免疫荧光法鉴定hTSC29 mAb的特异性。结果：获得了1株稳定分泌hTSC29 mAb的杂交瘤细胞株，分泌的抗体属IgG2b（κ）亚型，杂交瘤细胞培养上清效价达到1∶104；Western blot鉴定表明，制备hTSC29 mAb可特异性地识别人睾丸总蛋白中Mr约为60000处的蛋白；免疫组织化学和免疫荧光结果显示hTSC29蛋白主要定位在正常人睾丸组织中的精母细胞和精子细胞。结论：成功建立了1株稳定分泌抗hTSC29 mAb的杂交瘤细胞株，其分泌的抗体效价高、特异性强，为进一步研究hTSC29的功能提供了特异的检测工具。
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pICln蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定
目的:制备特异性的抗plCln蛋白的单克隆抗体(McAb),为plCln的纯化及检测等提供必要的工具.方法:以pICln的合成肽为免疫原,对BALB/c小鼠注射免疫,将免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合,用显微镜下挑选单个克隆的克隆化方法克隆化,用间接ELISA检测法进行筛选.单抗的效价、亚型及特异性用ELISA、免疫双向扩散实验和Western blot等检测.结果:获得了稳定的分泌型杂交瘤细胞株大2B7和4A3,2B7培养上清液单抗效价为1:64,属IgGl亚型,其腹水抗体效价及纯化抗体的效价分别为1:1.28×104、1:6.4×103,Westem blot及免疫耗竭实验呈现一条约40 kD)的特异性带,免疫组织化学染色显示在细胞核和细胞质中呈现阳性反应.结论:本次制备的单抗具有特异性、高效价,可应用于plCln蛋白的纯化及检测等研究.
关键词： pICln 合成肽 单克隆抗体 Westem blot
