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二氧化硫诱导小鼠脾细胞凋亡与谷胱甘肽水平的关系
许多研究表明二氧化硫(SO2)长期吸入后除直接影响呼吸系统功能,引起气管炎、支气管炎、哮喘等症状外,尚可进入血液系统进一步转化为亚硫酸氢钠(NaHSO3)、亚硫酸钠(Na2SO3)、硫酸钠(Na2SO4)等形式对机体造成多方面的损害,如引起脂质过氧化、硫血红蛋白血症等[1,2].
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MTT法检测卵蛋白刺激哮喘小鼠脾淋巴细胞增殖佳实验条件的研究
目的 探讨MTT法检测卵蛋白(OVA)刺激哮喘小鼠脾淋巴细胞增殖的佳实验条件.方法 制备OVA诱导哮喘小鼠模型,分离脾淋巴细胞.接种不同浓度的脾淋巴细胞,在不同培养时间点测定吸光度(A)值,确定佳细胞浓度和检测时间.观察不同浓度OVA对脾淋巴细胞增殖的影响.结果 佳脾淋巴细胞接种浓度为2×106 ～4×106 cells/ml,佳检测时间为48 h.培养24和48 h时,细胞浓度为1×106 ～4×106 cells/ml,A值与细胞浓度呈线性关系(r＞0.99).10μg/ml OVA可诱导脾淋巴细胞显著增殖,100μg/ml OVA反而抑制脾淋巴细胞增殖.结论 MTT法可用于检测哮喘小鼠的脾淋巴细胞增殖,细胞浓度与A值呈线性关系.OVA浓度是影响脾淋巴细胞增殖的重要因素.
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睾酮在体外对脾淋巴细胞增殖反应和分泌IgG的影响
为探讨雄激素对大鼠脾淋巴细胞产生免疫球蛋白和增殖反应的影响,用不同浓度睾酮作用于脾淋巴细胞,用中性红活染比色法和四甲基偶氮唑兰法(MTT)分别观察睾酮对培养的大鼠脾淋巴细胞增殖的影响;用酶联免疫法(ELISA)检测不同浓度睾酮处理的脾淋巴细胞由刀豆素A(ConA)刺激产生白细胞介素6(IL-6)和免疫球蛋白(IgG)的影响.结果发现在睾酮作用下,细胞增殖反应下降;睾酮可下调脾淋巴细胞产生的IgG.提示睾酮在体外可以通过改变脾淋巴细胞增殖能力和产生的IgG来调节免疫反应.
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人参多糖的分级及其免疫活性初探
目的:采用柱分离对人参多糖进行分级,并考察各级分对脾淋巴细胞增殖的刺激作用,找出活性部位.方法:用快流速Q-琼脂糖凝胶( Q-Sepharose FF)色谱将人参多糖进行分级,先用水和0.4 mol·L - 1 NaCl溶液洗脱,将人参多糖分成中性多糖和酸性多糖,再将酸性糖依次用0 ～0.4 mol·L-1NaCl溶液洗脱,得到不同的级分.取小鼠脾脏制备脾淋巴细胞,调整小鼠脾淋巴细胞密度至3.0×106/mL,加样品混合均匀,孵育48 h,考察每个级分不同浓度(25,50,100,200,400 mg·L -1)对脾淋巴细胞增殖的刺激作用.结果:从GP中分级得到GPN和GPA,GPA分级后得到GPA-1,GPA-2,GPA-3和GPA-4.GP,GPA,GPN,GPA-2,GPA-3和GPA-4对脾淋巴细胞增殖都具有促进作用,其大刺激指数分别为1.073,1.082,1.119,1.101,1.102和1.296.GPA,GPA-2,GPA-3和GPA-4的刺激作用均随着浓度的增加而增强；GPN随着浓度的增加促进作用减弱,在大于100 mg·L-1时呈现抑制作用,且浓度越大抑制作用越强.GPA-1对脾淋巴细胞的增殖具有抑制作用,且浓度越大抑制作用越强.结论:Q-Sepharose FF色谱可将酸性不同的人参多糖逐级分离.人参多糖各级分对脾淋巴细胞增殖有不同程度的促进作用,以GPA-4的刺激作用强.
关键词： 人参多糖 快流速Q-琼脂糖凝胶 脾淋巴细胞 -
清胰化积方对移植胰腺癌小鼠免疫抑制因子及脾淋巴细胞功能的影响
目的:观察清胰化积方对移植Panc 02胰腺癌小鼠血清免疫抑制因子及脾淋巴细胞功能的影响.方法:将荷瘤小鼠随机分为5组:生理盐水组、白细胞介素-2(IL-2)组、清胰化积方小、中、大剂量组;观察给药后肿瘤变化,检测小鼠血清免疫抑制因子可溶性IL-2受体(slL-2R)、转化生长因子β1(TGF-β1,)、血管内皮生长因子(VEGF)的水平以及小鼠脾淋巴细胞增殖活性.结果:清胰化积方各剂量组胰腺癌移植瘤瘤重均小于Ns组(P<0.05),血清sIL-2R、TGF-β1、VEGF水平均低于NS组,脾淋巴细胞增殖活性高于NS组(P<0.05).结论:清胰化积方对胰腺癌体内生长有抑制作用,并能抑制免疫抑制因子的分泌、增强淋巴细胞功能,从而改善宿主的免疫抑制状态.
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清胰化积方联合IL-2对胰腺癌小鼠脾淋巴细胞功能的影响
目的:研究清胰化积方联合白细胞介素-2(IL-2)对PancO2胰腺癌小鼠脾淋巴细胞功能的影响.方法:荷瘤小鼠随机分为对照组、清胰化积方组、清胰化积方联合不同剂量的IL-2组,治疗后称量瘤质量并计算抑瘤率,分别以淋巴细胞增殖活性和转化率评价小鼠脾淋巴细胞功能.结果:中药组、中药+IL-2小、中、大剂量组的瘤质量均小于对照组(P<0.01),抑瘤率分别为37.84%、44.14%、38.74%和39.64%;各治疗组脾淋巴细胞增殖活性和转化率均高于对照组(P(0.01),并呈现IL-2的剂量依赖性,其中中药+IL.2大剂量组高,与中药组比较有显著性差异(P<0.05).结论:增强脾淋巴细胞免疫功能足清胰化积方联合IL-2抗小鼠胰腺癌的机制之一;清胰化积方联合IL-2的免疫效应优于单用清胰化积方,具有协同效应.
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滋阴清热方对狼疮鼠脾淋巴细胞的核蛋白质的影响
目的:探讨滋阴清热方和泼尼松对狼疮鼠脾淋巴细胞的核蛋白质的影响.方法:用生理盐水(对照组)、中药、西药和中西药等不同的干预措施处理狼疮鼠5周,提取脾淋巴细胞核蛋白质,运用表面增强激光解析离子化-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测各处理组狼疮鼠核蛋白质的表达差异,揭示滋阴清热方以及联合泼尼松治疗SLE的作用环节.结果:在脾淋巴细胞的核蛋白质中发现对照组出现一些加重自身免疫的蛋白质,而西药组出现一些抑制免疫反应的蛋白质;中西药组和西药组对脾淋巴细胞的核蛋白质影响的结果是相似的.结论:滋阴清热方中药和或泼尼松可能通过影响脾淋巴细胞细胞的分化和蛋白质的表达达到治疗目的.
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五指毛桃药物血清对老龄小鼠脾淋巴细胞氧化损伤的影响
目的：观察五指毛桃药物血清对老龄小鼠衰老所致脾淋巴细胞氧化损伤的影响，探讨其作用机制。方法将40只老龄小鼠随机分为空白对照组和五指毛桃高、中、低剂量组，分别给予0.9%氯化钠溶液和6.6、4.4、2.2 g/kg五指毛桃水提物灌胃，测定脾脏指数，确定五指毛桃水提物的佳剂量，采用MTT法确定佳剂量药物血清干预老龄小鼠脾淋巴细胞增殖的佳稀释浓度及佳作用时间。使用佳稀释浓度药物血清作用老龄小鼠脾淋巴细胞48 h后观察衰老细胞阳性率，检测细胞内总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性、丙二醛（MDA）和活性氧（ROS）含量。结果与空白对照组比较，药物组老龄小鼠脾脏指数均明显提高（P＜0.05，P＜0.01)，以中剂量组效果佳；五指毛桃药物血清促进老龄小鼠脾淋巴细胞增殖的佳浓度为20%，佳作用时间为48 h。20%五指毛桃药物血清明显降低衰老细胞阳性率（P＜0.01)，提高老龄小鼠T-SOD活性，降低MDA和ROS含量（P＜0.05，P＜0.01）。结论五指毛桃药物血清能够提高老龄小鼠脾淋巴细胞增殖活性，其机制与降低衰老细胞阳性率、增强细胞抗氧化能力有关。
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3种人参皂苷对小鼠脾淋巴细胞的生物热力学表达的影响
目的 考察3种人参皂苷对小鼠脾淋巴细胞生物热活性影响的差异,为中药活性的筛选建立新方法.方法 采用热活性检测系统,根据淋巴细胞生长代谢曲线,检测淋巴细胞的大发热量,代谢热平均值及衰减速率常数;同时,采用MTT法对实验结果进行验证.结果 3种人参皂苷单体在不同浓度下均可使淋巴细胞的大发热值升高,代谢热平均值上升,衰减速率常数减慢,基本趋势为人参皂苷Rg3>人参皂苷Rg2>人参皂苷Rgl,其中人参皂苷Rgl的作用不明显,MTT法所得的实验结果与上述结果基本-致.结论 热活性检测系统可准确检测出3种人参皂苷能够不同程度地增加脾淋巴细胞生物热活性.
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人脐血非造血干细胞免疫原性的实验研究
目的 探讨人脐血非造血干细胞免疫原性,为脐血非造血干细胞的应用提供依据.方法 通过流式细胞术检测人脐血非造血干细胞的免疫表型;体外混合淋巴细胞培养观察人脐血非造血干细胞原代、P1代、诱导分化细胞及干扰素-γ(IFN-γ)刺激异种T淋巴细胞增殖活化作用.结果 人脐血非造血于细胞表达HLA-ABC,微弱表达HLA-DR,经IFN-γ处理后,未明显改变HLA-ABC、HLA-DR的表达水平.混合淋巴细胞培养未见各处理组人脐血非造血干细胞明显刺激T淋巴细胞的增殖.结论 人脐血非造血干细胞无论原代、传代细胞、分化细胞及IFN-γ处理的细胞免疫原性均较弱.
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双价痢疾疫苗滴鼻免疫小鼠诱导持续性粘膜与系统免疫反应
用双价痢疾疫苗(FSM-2117)滴鼻免疫小鼠后7、30和90 d,分别观测粘膜和系统免疫反应的变化.疫苗经鼻内免疫后7 d,诱发鼻咽、肺、胃肠道和生殖道等不同粘膜部位及血清中特异性抗福氏、宋内LPS IgA、IgG水平显著增高(P＜0.01),而特异性抗体水平在免疫后30、90 d明显下降,尤其是胃肠道和鼻咽部粘膜,但仍明显高于PBS对照组水平;疫苗滴鼻免疫后7 d,小鼠NALT、NP和PP淋巴细胞中CD3+ T细胞显著增加,其中以CD4+ T细胞增加为主,脾细胞中B22+细胞显著增加;4次免疫后30 d,NALT、NP和脾淋巴细胞出现上述变化,而4次免疫后90d,仅NALT和NP淋巴细胞出现同样变化.
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华蟾素注射液体外对小鼠脾淋巴细胞功能影响的研究
目的：观察华蟾素注射液对小鼠脾淋巴细胞增殖、活化的影响，探讨其对免疫系统调节的作用，为阐明其免疫作用机制提供药理学依据。方法无菌分离小鼠脾淋巴细胞，制备淋巴细胞悬液，按临床给药量设置华蟾素注射液不同浓度组给药。MTT法分别检测刀豆蛋白A（ ConA）刺激和脂多糖（ LPS）刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖；用华蟾素注射液预孵育淋巴细胞6 h，分别加入Con A或LPS诱导淋巴细胞活化，利用流式细胞仪通过Aimplex?对细胞上清液进行GM-CSF、TNF-α，IFN-γ，IL-1α，IL-2，IL-6，IL-10细胞因子检测，评价其免疫效果。结果华蟾素注射液7.82 mg/ml、15.63 mg/ml和31.25 mg/ml浓度组与ConA协同刺激淋巴细胞增殖。1.96 mg/ml和62.50 mg/ml浓度组与LPS协同抑制细胞增殖。华蟾素注射液可促进TNF-α和IL-6分泌，一定程度抑制IFN-γ和GM-CSF分泌，与不同刺激剂作用可不同程度促进或抑制IL-2、IL-1α和IL-10的分泌。结论华蟾素注射液可一定程度促进B淋巴细胞增殖，但对体液免疫的作用效果和作用机制还有待进一步研究。
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达纳康对大鼠溃疡性结肠炎细胞因子的影响
目的:观察大鼠实验性溃疡性结肠炎脾淋巴细胞,肠组织和血清中,细胞因子的表达及达纳康对其的影响,探讨达纳康对溃疡性结肠炎的保护作用及其机制.方法:用三硝基苯磺酸(TNBS)建立大鼠溃疡性结肠炎模型.将动物随机分为空白对照组、三硝基苯磺酸、三硝基苯磺酸+生理盐水组、三硝基苯磺酸+达纳康组四组观察肠道大体形态和组织学改变.采用ELISA法测定脾细胞、大肠黏膜及血清中的白介素-12(IL-12)、干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4).结果:与三硝基苯磺酸组比较三硝基苯磺酸+达纳康损伤指数明显下降(2.83±0.94 vs 5.33±1.50,P＜0.01,1.92±0.67 vs 4.33±0.98,P＜0.01).IFN-γ浓度明显下降.脾细胞:60±21.5 vs 125.6±14.6,P＜0.01大肠黏膜:202.8±49.6 vs 431.8±57.6,P＜0.01血清:8.6±1.4 vs 13.5±1.7,P＜0.01.与模型组比较TNBS组+EGb组IL-4浓度明显升高(脾细胞:11.2±1.3 vs 6.05±1.5,P＜0.01大肠黏膜:10.2±1.9 vs 6.9±1.4,P＜0.01血清:7.9±1.8 vs4.2±1.1,P＜0.01).血清IL-12浓度明显下降(8.2±2.2 vs25.8±4.8,P＜0.01)血清IL-12/IL-4比值下降(1.13±0.49 vs64±1.8,P＜0.01).IFN-γIL-4比值明显下降(脾细胞:5.2±2.0 vs 21.9±4.9,P＜0.01,大肠黏膜:20.9±7.97 vs65.9±18,P＜.01;血清:1.1±0.3 vs 3.4±0.8,P＜0.01).结论:TNBS诱导的大鼠UC模型是Th1(IL-12)亚型为主的免疫应答反应,EGb通过抑制IL-12,IFN-γ生成,恢复Th1/Th2细胞因子的平衡,发挥对溃疡性结肠炎的保护作用.
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MUC5AC、MUC6核粘蛋白合成肽诱导小鼠抗肿瘤免疫反应
目的:探讨MUC5AC,MUC6核粘蛋白合成肽在诱导小鼠抗肿瘤免疫反应中的作用.方法:采用动物实验方法观察MUC5AC和MUC6黏核蛋白的合成肽诱导小鼠的细胞和体液免疫反应及其淋巴细胞体外抗肿瘤作用.结果:MUC5AC,MUC6合成肽可诱导小鼠产生相应的抗体及迟发型过敏反应,但不能产生脾淋巴细胞的明显增生及体外抗7901胃癌细胞株的作用.结论:MUC5AC,MUC6合成肽免疫小鼠可引发体液及细胞免疫反应,但尚不足以产生淋巴细胞毒作用.
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HBV转基因小鼠免疫耐受机制的实验研究
目的:观察乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠(Tg鼠)树突状细胞(DC)抗原递呈功能,T淋巴细胞(TC)免疫活化状态和肝细胞(HC)的应答能力,探讨慢性HBV感染免疫耐受形成的机制.方法:用流式细胞术,氚一胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法,ELISA和免疫组织化学方法,分别测Tg鼠脾DC,TC和HC表面分子,HBsAg刺激淋巴细胞增生反应以及TC产生的细胞因子含量.结果:Tg鼠DC表面MHC-Ⅱ类分子和CDS0表达低下,DC诱导脾淋巴细胞对HBsAg刺激的增生反应减弱,TC分泌的mIFN-γ,mIL-2,mIL-6,mIL-10均显著减少,HC膜MHC-I类分子表达量也降低.结论:Tg鼠DC的HBV抗原递呈功能低下,TC免疫活化受到抑制,HC的应答能力减弱,其中DC功能低下起关键作用.
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烫伤后高迁移率族蛋白B1的变化及其对脾淋巴细胞周期的影响
目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在烫伤中的表达规律及其对烫伤延迟复苏大鼠脾淋巴细胞周期的影响.方法 103只大鼠随机分为正常对照组(n=7)、假伤组(n=32)、烫伤组(n=32)和丙酮酸乙酯(EP)液(3.23mg/ml)治疗组(n=32),后3组分别在伤后第1、3、5、7天活杀,采用Western blot检测血浆HMGB1水平,应用流式细胞仪检测细胞周期.结果大鼠烫伤后1、3、5天血浆HMGB1水平显著升高(P<0.05或P< 0.01).与假伤组比较,烫伤后1、3天G1期淋巴细胞明显增加,同时G2+S期细胞百分比明显减少.EP组,伤后第1天G1期淋巴细胞百分比明显减少(P<0.05),G2+S期细胞比例明显增加(P<0.05).结论 HMGB1对严重烫伤后脾淋巴细胞周期具有明显影响,参与了烧伤延迟复苏后免疫功能紊乱的发病过程.
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电离辐射对小鼠脾淋巴细胞IL-10表达的影响
目的观察75 mGy、2 Gy X射线全身照射对小鼠脾淋巴细胞中IL-10的影响.方法采用Northern blot检测IL-10转录水平的变化,并同时通过流式细胞术检测其蛋白合成的变化.结果①蛋白合成结果表明,75 mGy X射线全身照射后脾淋巴细胞IL-10合成在照后2 h开始即呈时间依赖性降低,至48 h仍无恢复迹象(P＜0.01),而2 Gy照射后则出现IL-10合成升高,于照射后8 h达到峰值(P<0.05).②Northern blot结果表明,75 mGy照射后脾细胞IL-10 mRNA转录水平从照后1 h即降低,并维持较低水平一直到48 h开始恢复,达到假照射组的88.35%;2 Gy X射线全身照射后早期mRNA水平即有所升高,2 h达到假照组的134.06%,4 h略有下降,随后逐渐恢复至假照射组水平.结论不同剂量X射线全身照射可引起不同的辐射效应,IL-10在其中起着重要的作用.
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红海榄叶的化学组成及其生物活性
红树植物是一类生长在热带和亚热带沿海潮间带并受周期性洁水浸淹的木本植物[1].
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白芷提取物对大鼠脾淋巴细胞免疫抑制作用初探
目的：探讨白芷提取物对地塞米松致大鼠脾淋巴细胞免疫抑制作用的影响。方法建立地塞米松致大鼠免疫抑制模型，考察白芷提取物对大鼠脾淋巴细胞的增殖活性、自然杀伤细胞(NK细胞)活性的影响。结果白芷提取物(5.0 g/kg)对刀豆蛋白A(ConA)诱导脾淋巴T细胞增殖能力有升高作用，但对脂多糖(LPS)诱导脾淋巴B细胞增殖能力未见明显影响，对脾淋巴细胞的NK细胞活性也有增强作用。结论白芷提取物(5.0 g/kg)能提高大鼠脾淋巴T细胞和NK细胞的增殖活性。
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熟地黄提取物体外免疫调节作用实验研究
目的 初步探讨熟地黄发挥免疫增强作用的活性物质及其作用机制.方法 常规分离Balb/c小鼠胸腺及脾的淋巴细胞,通过四甲基偶氮唑蓝法检测小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖,酶联免疫吸附法(ELISA法)检测小鼠胸腺、脾淋巴细胞上清液Th1细胞因子白细胞介素-2、干扰素-γ和Th2细胞因子白细胞介素-4、白细胞介素-5的水平.结果 熟地黄水提物(0.049、0.49、4.9 mg·mL-1)和粗多糖(0.032、0.32、3.2 mg· mL-1)均可显著促进刀豆蛋白A刺激前后小鼠胸腺及脾的淋巴细胞的增殖,提高上清液白细胞介素-2、干扰素-γ白细胞介素-4、白细胞介素-5水平,并呈现剂量依赖性关系.结论 熟地黄具有免疫增强作用,且发挥免疫增强作用的活性物质可能为熟地黄粗多糖,作用机制与其增强T淋巴细胞Th1和Th2细胞因子的表达有关.
