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人GL50转基因细胞的建立
ICOS/GL50是CD28/B7家族的一对新成员,GL50组成性表达在B细胞、巨噬细胞上.GL50-Ig能显著上调IL-4、IL-10、IFN-γ等细胞因子的表达,但对IL-2的产生没有影响,ICOS/GL50主要在T细胞的效应阶段发挥重要的调节作用.为了进一步研究其功能,我们利用逆转录病毒载体系统有效介导了基因转移.
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脊髓TNFα、IL-1β和IL-6在神经病理性疼痛过程中的表达变化
近年研究表明,外周与中枢免疫系统的激活参与了神经病理性疼痛的过程,其中细胞因子是联系神经-免疫反应的关键分子.尽管对细胞因子在神经病理性疼痛中的作用进行了大量研究,但研究结果尚有分歧~([1]).由于不同的细胞因子在病理性疼痛中的作用可能不同,并且细胞因子的表达时间特点依赖于不同的动物模型和测定的组织类型和部位~([2]).本文采用大鼠坐骨神经慢性压迫损伤模型,探讨了脊髓中TNFα、IL-1β和IL-6在神经病理性疼痛过程中的表达变化.
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流式细胞术检测单个淋巴细胞内的细胞因子表达
各种辅助性T淋巴细胞(Th)之间的失衡与自身免疫病、过敏性疾病、肿瘤、移植排斥反应以及感染性疾病的发生发展有密切的关系,而掌握一种准确、灵敏、快速的检测Th的方法,是研究Th细胞间平衡与疾病关系的前提。我们采用免疫荧光抗体双标记法,用流式细胞仪检测单个淋巴细胞内的细胞因子的表达,能准确地了解淋巴细胞的极化状态,对研究疾病的发病机制以及相应的治疗策略具有实用意义。
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达纳康对大鼠溃疡性结肠炎细胞因子的影响
目的:观察大鼠实验性溃疡性结肠炎脾淋巴细胞,肠组织和血清中,细胞因子的表达及达纳康对其的影响,探讨达纳康对溃疡性结肠炎的保护作用及其机制.方法:用三硝基苯磺酸(TNBS)建立大鼠溃疡性结肠炎模型.将动物随机分为空白对照组、三硝基苯磺酸、三硝基苯磺酸+生理盐水组、三硝基苯磺酸+达纳康组四组观察肠道大体形态和组织学改变.采用ELISA法测定脾细胞、大肠黏膜及血清中的白介素-12(IL-12)、干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4).结果:与三硝基苯磺酸组比较三硝基苯磺酸+达纳康损伤指数明显下降(2.83±0.94 vs 5.33±1.50,P<0.01,1.92±0.67 vs 4.33±0.98,P<0.01).IFN-γ浓度明显下降.脾细胞:60±21.5 vs 125.6±14.6,P<0.01大肠黏膜:202.8±49.6 vs 431.8±57.6,P<0.01血清:8.6±1.4 vs 13.5±1.7,P<0.01.与模型组比较TNBS组+EGb组IL-4浓度明显升高(脾细胞:11.2±1.3 vs 6.05±1.5,P<0.01大肠黏膜:10.2±1.9 vs 6.9±1.4,P<0.01血清:7.9±1.8 vs4.2±1.1,P<0.01).血清IL-12浓度明显下降(8.2±2.2 vs25.8±4.8,P<0.01)血清IL-12/IL-4比值下降(1.13±0.49 vs64±1.8,P<0.01).IFN-γIL-4比值明显下降(脾细胞:5.2±2.0 vs 21.9±4.9,P<0.01,大肠黏膜:20.9±7.97 vs65.9±18,P<.01;血清:1.1±0.3 vs 3.4±0.8,P<0.01).结论:TNBS诱导的大鼠UC模型是Th1(IL-12)亚型为主的免疫应答反应,EGb通过抑制IL-12,IFN-γ生成,恢复Th1/Th2细胞因子的平衡,发挥对溃疡性结肠炎的保护作用.
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溃疡性结肠炎患者肠黏膜Th1/Th2类细胞因子m-RNA的表达
目的:探讨溃疡性结肠炎肠黏膜内Th1型细胞分泌的细胞因子TNF-α、IL-2,Th2型细胞分泌的细胞因子IL-4、IL-10的作用.方法:住院重症溃疡性结肠炎患者30例,男24例,女6例,年龄18-59(平均45±13)岁.全部患者均经电子结肠镜检查及组织学检查确诊,并连续粪培养2次排除细菌感染,同时排除阿米巴肠病,血吸虫病,肠道肿瘤和内分泌疾病.病变部位包括全结肠型15例,乙状结肠9例,直肠型6例;临床类型包括复发型20例,持续型7例和初发型3例.急性期患者均服用强的松30 mg,柳氮磺胺嘧啶500 mg 2次/d.治疗8 wk后复查纤维结肠镜.另选健康对照20名,男14名,女6名,年龄22-61(平均43±12)岁,排除胃肠道和内分泌疾病.应用RT-PCR检测溃疡性结肠炎患者黏膜内细胞因子的表达.结果:溃疡性结肠炎患者急性期应用柳氮磺胺吡啶和糖皮质激素可降低TNF-α(急性期1.22±0.02,慢性期0.78±0.08,P<0.01)、IL-2(急性期0.82±0.06,慢性期0.47±0.04,P<0.01)的表达;提高IL-10(急性期0.68±0.03,慢性期0.91±0.02,P<0.01)的表达.结论:溃疡性结肠炎患者以分泌Th1细胞因子为主,存在Th1和Th2细胞因子的平衡漂移.提示他们在溃疡性结肠炎的发生发展中起了重要作用.
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溃疡性结肠炎组织中NF-κB,OX-2和iNOS表达的意义
目的:转录因子NF-кB的诱导,调控着免疫和炎症反应中众多基因的表达.溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,C)存在上皮细胞、淋巴细胞、巨噬细胞的异常激活及细胞因子的表达失调.我们检测了UC组织中NF-кBp65,及两种启动子含NF-кB结合位点的蛋白COX-2和iNOS的表达和分布,探讨他们在UC发病机制中的作用,及三者之间的关系.方法:用免疫组化SP法检测39例活动期溃疡性结肠炎内镜活检标本及30例正常对照石蜡包埋组织中NF-κBp65,OX-2和iNOS的表达情况.结果:UC组p65,OX-2和iNOS均为阳性表达,主要分布于上皮细胞.固有层炎性细胞及血管内皮细胞也有程度不同的表达对照组均为阴性或弱阳性表达.三者在UC组的表达与对照组相比,差异均有非常显著性(P<0.01).p65的表达与内镜及病理分级有关.内镜Ⅱ级与Ⅰ级比较(5.8±2.6 vs 3.6±1.9),差异显著(P<0.05).病理Ⅱ,Ⅲ级与Ⅰ级比较(6.1±2.4,.3±2.5 vs 4.0±2 3),差异显著(P<0.05,<0.01).iNOS的表达与病理分级有关,Ⅲ级与Ⅰ,Ⅱ级比较(7.8±2.5 vs 4.6±2.3,5.0±1.6),差异显著(P<0.01,<0.05).COX-2的表达在病情轻重,内镜及病理分级间差异无显著性(P>0.05).p65与COX-2,NOS表达显著相关(rs1分别为0.713,.706;P<0.01),COX-2与iNOS表达显著相关(rs1=0.854,<0.01).结论:NF-кB的诱导参与UC的发生、发展.COX-2,NOS也参与UC的炎症及损伤过程,可能iNOS发挥的作用更显著.COX-2,NOS表达的调控机制可能相似,且与NF-κBp65的诱导有直接关系.
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人胰腺癌组织中Th2类细胞因子的优势表达及其临床意义
目的:观察Th1/Th2类细胞因子在胰腺癌组织中的表达模式及临床意义.方法:以IFN-γ和IL-2代表Th1类细胞因子,IL-4和IL-10代表Th2类细胞因子.收集45例胰腺癌患者的手术切除组织蜡块,以免疫组织化学PV-9000通用型二步法染色,DAB显色试剂盒显色,检测胰腺癌组织中Th1/Th2类细胞因子的表达.结果:IFN-γ和IL-2在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异(P>0.05),说明Th1类细胞因子在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异;IL-4和IL-10在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织(P=0.022<0.05;P=0.023<0.05),说明Th2类细胞因子在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织.结论:胰腺癌组织中Th2类细胞因子呈优势表达状态,这可能是肿瘤免疫逃逸的机制.
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硫氧还蛋白-1在胰腺炎时的表达及其作用
硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,Trx-1)是一种广泛分布的氧化还原蛋白,通过二硫化物活性中心可逆地催化许多氧化还原反应,具有抗氧化和抗炎作用.胰腺炎的病程存在着氧化应激和炎性细胞浸润,Trx-1作为一种内生的抗氧化剂,通过直接清除活性氧发挥抗氧化作用,通过减少致炎细胞因子的表达,发挥间接抗炎、抗氧化作用.重组Trx-1能抑制中性粒细胞浸润,减轻胰腺和肺的炎症,可作为一种新的治疗急性胰腺炎的策略.
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盐酸氨溴索及牛磺酸对大鼠肺间质纤维化的影响
肺间质纤维化(ILD)的发生发展与许多细胞因子的参与密切相关.核因子κB(NF-κB)是一个具有广泛生物活性的转录因子,当激活后能调控多种细胞因子的表达.本实验利用博莱霉素(BLM)诱导大鼠IPF,观察NF-κB及其调控的转移生长因子β1(TGF-β1)的动态变化,并用牛磺酸和盐酸氨溴索干预以探讨其对肺间质纤维化的影响.
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二氧化硫吸入致大鼠肺组织核因子κB的激活及蓝桉油的抑制作用
核因子κB(NF-κB)作为一种转录调节因子在有关炎症反应的基因转录表达的调控中起关键作用[1].长期吸入二氧化硫(SO2)可制作慢性支气管炎模型,然而在此模型制作过程中,肺组织细胞核内NF-κB水平是否增高,国内、外尚少报道.蓝桉油主要含有桉油素等,能够抑制多种细胞因子的表达和炎症反应[2],但其具体抗炎机制仍不明确.本研究目的为观察SO2所致大鼠慢性支气管炎模型肺组织细胞核内NF-κB水平的变化及蓝桉油对其影响.
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川芎嗪与地塞米松对支气管哮喘大鼠GATA结合蛋白3/淋巴细胞T盒的作用
支气管哮喘(简称哮喘)是常见的气道慢性炎症性疾病,辅助Th2占优势的Th1/Th2细胞比例失衡是其重要发病机制[1].转录因子鸟嘌呤腺嘌呤胸腺嘧啶腺嘌呤序列(GATA)结合蛋白3(GATA-3)特异性表达于Th2细胞,促进初始CD+4 T淋巴细胞向Th2细胞分化并正调控Th2细胞因子的表达,表达于淋巴细胞的T盒(T-bet)特异表达于Th1细胞,促进初始CD4+ T淋巴细胞向Th1细胞分化并正调控γ-干扰素(IFN-γ)的表达,二者的相互制衡对T淋巴细胞的分化及其细胞因子的分泌至关重要.
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脑胶质瘤Th1/Th2类细胞因子的漂移及意义
我们采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测了4株脑胶质瘤细胞株、52例新鲜脑胶质瘤标本和15例脑胶质瘤患者外周血标本的Th1/Th2类细胞因子的表达情况,初步探讨了脑胶质瘤Th2类细胞因子漂移的意义。 1.材料与方法:胶质瘤细胞株SHG-44、U251、C6和9L,购自上海细胞生物研究所或本室保存。胶质瘤组织标本52例,取自我院患者,术前均未接受放疗、化疗或免疫治疗。术后病理:星形细胞瘤Ⅰ级4例,星形细胞瘤Ⅱ级6例,间变性星形细胞瘤23例,多形性胶质母细胞瘤9例,少突胶质细胞瘤3例,脉络丛乳头状瘤1例,室管膜瘤2例,髓母细胞瘤4例。胶质瘤患者外周血标本15例,取自术前静脉血。细胞传代收获1×106个细胞;胶质瘤组织约1 cm3大小,仔细去除坏死组织;外周血5~10 ml,肝素抗凝,Ficoll梯度离心法分离出单个核细胞;总RNA的提取采用异硫氰酸胍一步法[1]。(1)检测指标:以IFN-γ、IL-2代表Th1类因子,IL-4、IL-6、IL-10、IL-13代表Th2类细胞因子,β-actin为内参照。(2)逆转录反应:5~10 μg细胞总RNA,加入0.1 mol/L DTT 2 μl、4×dNTP 1 μl、M-MLV 1 μl (200 U)、下游引物P2 1 μl(50 pmol/L),总体积20 μl。37℃ 1 h后,95℃ 10 min灭活M-MLV。(3)PCR反应:继续加入25 mmol/L MgCl2 8 μl、4×dNTP 1 μl、上游引物P1 1 μl,总体积98 μl;95 ℃ 5 min后,加入Taq DNA聚合酶2 μl (1 U/μl) 。循环条件为94 ℃ 1 min,58℃ 1 min,72℃ 1 min,循环35次,后72℃延长7 min。(4)1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR结果。
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中耳胆脂瘤的可能发病机制
胆脂瘤是一种角化复层鳞状上皮来源的囊样病变,不同厚度的上皮组织堆积在基质周围,过度角化与杂乱无章的角蛋白纤维层层堆积,形成了炎症反应包裹的囊性肿物。中耳胆脂瘤的发病机制主要有四种假说:1)内陷学说;2)基底细胞增生或乳头层内陷生长学说;3)上皮侵入学说;4)化生学说。其分子生物学机制包括胆脂瘤的染色体异常,上皮的高度增生和骨质破坏吸收,细胞因子的表达和相互作用以及细胞的凋亡机制等等[1-4],但胆脂瘤形成的确切机制尚不明确。本文总结近年来中耳胆脂瘤发病机理研究进展。
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流式细胞因子检测技术及其在结核病中的应用
细胞因子主要介导和调节免疫应答及炎症反应.正常情况下,细胞因子的表达和分泌受到严格的调控,病理状态下会出现异常表达,故检测细胞因子对于疾病的诊断、治疗具有重要意义.细胞因子免疫学检测方法基本原理是将细胞因子作为抗原,用针对该抗原的特异性抗体进行定量或定性的检测.既往检测技术主要采用ELISA法,由于细胞因子半衰期不同,其检测结果的准确性降低.酶联免疫斑点技术(enzyme-linked immunospotassay,ELISPOT)检测的是分泌细胞因子的细胞数量,不受细胞因子代谢的影响,能比较真实反应体内细胞因子水平,已得到广泛研究并应用到临床结核感染的诊断中[1,2].流式细胞术(flow cytometry,FCM)能明确产生细胞因子的细胞数量,不仅可同时检测几种细胞因子,还可确定产生细胞因子的细胞亚型,是一种相对快速并能准确定量的检测细胞因子的方法.
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白介素16与脑缺血
近年来,缺血性脑损伤分子机制的新观念迅速涌现,不断有证据表明,炎症反应在加重中枢神经系统缺血损伤中起了重要作用,特别是细胞因子的重要性备受关注.局部缺血后在炎性细胞反应出现之前有介导炎性反应的细胞因子--前炎症细胞因子的表达.前炎症细胞因子可通过复杂的细胞因子网络影响其他细胞因子的功能和合成,并能触发和调控脑缺血损伤后炎症反应的作用.白介素16(IL-16)是近20年来被认识到的白介素家族的新成员,是脑缺血损伤后一种重要的前炎症细胞因子.
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促炎及抗炎细胞因子在脓毒症小鼠肠道相关淋巴组织的表达
脓毒症及其所并发的多器官功能失常综合征(MODS)是外科医生所面临的困难之一。它是由内源性介质和外源性介质所介导的全身炎症反应,是各种损伤因素通过机体的防御系统而启动了全身炎症系列反应,从而造成炎症反应的失控,产生过量的炎症介质和细胞调节因子损伤正常组织的结果。本研究是以脓毒症小鼠为模型,探讨在致伤后不同时间点,肠道相关淋巴组织中促炎/抗炎细胞因子的表达情况,试图阐明肠道在MODS时既是炎症介质细胞因子的重要来源地,又是参与启动全身炎症反应的重要器官。
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浅低温对肺癌根治术患者Th1/Th2型细胞因子的影响
恶性肿瘤患者术前存在着不同程度的免疫功能抑制,手术、麻醉和低体温等又可进一步加重免疫功能的抑制,使术后感染和肿瘤复发、转移的概率增加.手术过程中由于麻醉、环境温度、体腔暴露等因素导致患者核心温度降低,处于浅低温状态[1].浅低温可诱导IL-2、IL-10等细胞因子的表达发生变化[2],该作用可能与其抑制免疫功能有关.机体抗肿瘤免疫主要是细胞免疫,Th1/h2型细胞因子是细胞免疫应答调节中的关键环节.本研究拟探讨浅低温对肺癌根治术患者Th1/Th2型细胞因子的影响,进一步研究浅低温对恶性肿瘤患者细胞免疫功能的影响.资料与方法本研究已获本院伦理委员会批准,患者均签署知情同意书.拟行肺癌根治术的患者,年龄30~64岁,体重50 ~ 70kg,性别不限,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级,TNMⅡ或Ⅲa期,术前未行放化疗,围术期无发热,预计术中失血量<500 ml,采用随机数字表法,将患者随机分为2组:常温组(Ⅰ组)和浅低温组(Ⅱ组).
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白细胞介素-18在系统性红斑狼疮发病中的作用
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者体内细胞因子反应非常复杂,Th1细胞因子和Th2细胞因子的表达均上调,在疾病的不同发展阶段可能有不同的细胞因子产生,细胞因子失衡在SLE的发病中起重要作用.白细胞介素(IL)-18是新发现的一种细胞因子,主要由活化的巨噬细胞产生,是IL-1家族的成员之一,与IL-12有相似的生物学功能.IL-18可以诱导T细胞和自然杀伤(NK)细胞活化并产生干扰素(IFN)-γ而引起Th1型细胞反应,在SLE的发病中起很重要的调节作用,并与疾病的活动性相关.
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丝裂原活化蛋白激酶及核因子κB在佐剂关节炎大鼠滑膜中的表达
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)为一种自身免疫性疾病,其病理改变主要为滑膜组织的增生,炎性细胞浸润以及骨和软骨的进行性不可逆性破坏.许多研究表明滑膜中多种炎性细胞因子的表达增加,如肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8,细胞粘附分子(ICAM)-1及基质金属蛋白酶(MMP)等.且滑膜细胞的凋亡减少,从而导致滑膜的增生及破坏.那么这种炎性细胞因子增加及凋亡减少的机制如何,研究表明与信号传导系统--鞘磷脂通路有关.而丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及核因子Kappa B (nuclear factor κB,NF-κB)在该信号传导通路中起着重要的中介作用,MAPK及NF-κB被激活可上调许多炎性细胞因子基因的表达[1].本实验初步观察了佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜中MAPK及NF-κB的表达情况,以探讨RA滑膜病变的机制.
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体外冲击波对MG63细胞中碱性成纤维细胞生长因子表达的影响
体外冲击波(ESW)是近年来用于治疗骨折不愈合的一种新的保守治疗方法,因其费用低、痛苦小且有效而受到关注.但ESW治疗骨折不愈合的生物学机制还不清楚.有研究显示,ESW对成骨细胞的生物学活性、分化及各种细胞因子的表达有影响[1],但对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响报道较少.本研究采用不同能量ESW干预MG63细胞代谢,旨在观察ESW冲击后MG63细胞中bFGF的表达变化.