首页 > 文献资料
-
梭曼脱烷基的机制及化合物对其的延缓作用
梭曼脱烷基的分子机制有六十年代形成的碳离子形成机制及近年来提出的推拉(push-pull)机制,碳离子形成机制是组氨酸咪唑基上的质子化基团与烷氧基上的氢氧键结合,使C-0极化形成碳离子,然后C-0断裂脱下烷基.推拉(push-pull)机制认为甲基转移的动力来自AChE活性中心阴离子结合部位的氨基酸残基E199、W84的静电及空间相互作用,伴随甲基Cβ至Cα的转移,C-O键断裂.H440H+及氧阴离子洞对C-O断裂及随后负电荷形成起拉(pull)作用.
-
HCV脱氧核酶在荧光素酶表达细胞中活性的初步观察
脱氧核酶(deoxyribozyme,DRz)是具有生物催化活性的小分子酶性DNA(catalytic DNA),能定点剪切RNA分子,其活性中心系所谓10~23基序(motif).`
-
乙型和丙型肝炎病毒与胱冬肽酶3的关系
0引言凋亡(apoptosis)又称为程序化细胞死亡(programmed cell death,PCD),是多细胞有机体为调控机体发育,维护内环境稳定,由基因控制的细胞主动死亡过程[1],他的发生是一系列称为胱冬肽酶(cysteinyl aspartate-specific protease,caspase)蛋白酶家族成员的作用,由活性中心的半胱氨酸上的巯基发挥活性,所以属于半胱氨酸酶类.胱冬肽酶蛋白酶家族也称为ICE/Ced-3家族,是一组与细胞因子成熟和细胞凋亡有关的蛋白酶,是美丽线虫(Caenorhabditiselegans)死亡基因Ced-3的同源物,这个家族的蛋白酶具有特异性地在特定的氨基酸序列中将肽链从天门冬氨酸(Asp)之后切断的活性.
-
硫氧还蛋白-1在胰腺炎时的表达及其作用
硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,Trx-1)是一种广泛分布的氧化还原蛋白,通过二硫化物活性中心可逆地催化许多氧化还原反应,具有抗氧化和抗炎作用.胰腺炎的病程存在着氧化应激和炎性细胞浸润,Trx-1作为一种内生的抗氧化剂,通过直接清除活性氧发挥抗氧化作用,通过减少致炎细胞因子的表达,发挥间接抗炎、抗氧化作用.重组Trx-1能抑制中性粒细胞浸润,减轻胰腺和肺的炎症,可作为一种新的治疗急性胰腺炎的策略.
-
纳米细菌诱发泌尿系结石形成的研究进展
结石是泌尿系统的常见病、多发病,长期以来一直严重地威胁着人类的健康.关于泌尿系统结石的成因长久以来有诸多的学说和理论,受到幽门螺杆菌(HP)的启发和影响,近年来纳米细菌( nanobacterium,NB)引起了国内外学者越来越多的关注.由于纳米细菌( nanobacterium,NB)具有独特的矿化能力,其生长过程中能在菌体周围产生坚硬的羟磷灰石矿化外壳,形成晶体核心,可作为活性中心,黏附、侵入并破坏肾集合管的上皮细胞和肾乳头细胞,形成磷灰石晶核,从而诱发结石形成[1,2],故而为泌尿系统结石的发生机制及防治等领域的研究提供了新的切入点,本文仅就纳米细菌诱发泌尿系结石形成的研究进展做一综述.
-
SOD模拟化合物的研究进展
超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),是生物体内普遍存在的一种金属蛋白酶,按国际标准命名为EC 1.15.1.1.它在血浆中的半衰期仅5~8 min,其保存的稳定性,与生物膜的亲和性,病灶趋向性及抗原性等问题均是临床应用的难点[1].为此用化学手段合成与表征具有相关结构铜、锰、铁甚至钴等金属离子的配合物来模拟SOD[2~14],将为进一步认识SOD的结构与功能的相关规律性和开发研制新型SOD制剂,提供重要的理论依据.
关键词: 超氧化物歧化酶(SOD) 活性中心 模拟化合物 -
微粒体甘油三酯转运蛋白MTP研究进展
MTP存在于细胞微粒体、内质网腔内,在内质网内含量高,占总蛋白的0.5%~1.0%.用层析技术获得纯的MTP在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳上表现为两种异构体,其分子质量是58000和88000;另外用沉降平衡技术测得的分子质量是150 000,说明MTP有两种异源二聚体.氨基酸测序和免疫技术分析证明低的是一个亚单位,称为蛋白二硫化合物异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)它的二硫化合物异构酶活性能使新合成蛋白质的一对半胱胺酸残基形成二硫键.另外它也是四聚体酶的成分,四聚体羟化酶有α和β两个亚基,β则为PDI.在体外PDI可以单独存在,其含量超过MTP,也可以自我形成二聚体和四聚体.MTP的大亚基不被去污剂所溶解,其可能与PDI协同翻译有关或者是PDI的分子伴侣(chaperone).PDI对于MTP是很重要的,这表现在当单独将MTP表达在昆虫Sf9,MTP无活性,而与PDI一起表达时MTP才有活性,说明它是MTP的组成和功能基础.PDI由491个氨基酸组成,当它成为MTP成分时活性仅为游离时的1/10,当其解离后活性增加,其活性中心在35~40和379~384两段氨基酸残基序列处.人的MTP大亚基具有高度的保守性、但同源性较低;其少数几个区域与卵黄磷脂蛋白序列具有同源性,可推测它是卵黄原蛋白的家族[1].
-
警惕"洋快餐"中的丙毒危害
1丙毒1.1丙毒的特性及用途丙烯酰胺(CH2=CH-CONH2)又称丙毒,纯品为白色结晶,分子量为70.08,易溶于水、甲醇、乙醇、丙酮,稍溶于乙酸乙酯、氯仿,微溶于苯.丙烯酰胺分子具有两个活性中心,兼具弱酸性和弱碱性反应.
-
健康之路自己走(七)微量元素与老年健康(下)
人体内有近千种生物酶,它们的核心和活性中心是各种微量元素.人体代谢只有在这些酶的参与下才能进行,如体内能量代谢的三磷酸腺苷酶就含锌、铜、镁等微量元素;胰岛素中的葡萄糖耐量因子,其核心是铬;甲状腺素的核心是碘.维生素E具有抗衰老作用,能清除体内自由基,靠微量元素硒来完成.细胞摄取叶酸靠维生素B12,而维生素B12的核心是微量元素钴.可见,人体内酶、激素、维生素只有在微量元素参与下才能正常发挥作用.
-
中草药中硒的生物功能及测定方法研究进展
硒是动物生命中必需的微量元素,是谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px) 的活性中心. 人体缺硒是造成癌症、心脑血管疾病、糖尿病、肠胃病、白内障等 40多种疾病的主要原因. 我国是世界上严重缺硒国家之一,有70% 以上地区缺硒,而多种中草药中含有微量硒,具有开发利用价值. 探讨硒的生理功能和药理作用,研究富硒食品和药物的开发利用,对人体保健、疾病治疗具有重大意义.
-
合理使用活性炭的探讨
在制备输液的过程中,加入活性炭是起到吸附热源、色素以及杂质的作用.活性炭是木材、骨及氯化锌在高温下(700℃~800℃)烧制而成的.它是一种多孔性的物质,表面结构极不均匀,呈现凸凹不平的结构,处于凸点的分子就具有多的剩余表面自由能,是活性炭吸附剂表面的活性中心,且活性炭结构表面上有很多的羧基团和羰基官能团,其余部分只有较低的表面自由能,因表面上的分子与内部分子处境不同,因而互相作用与运动状态不同的碳分子在表面上的作用力是不饱和的,所以有剩作力,而当其它物质的分子与此表面有接触时,即受到这种剩余力和表面活性官能团的作用而吸附于表面.
-
基因改造中快速PCR定点突变方法应用
铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)因为可以消除O2·-而被广泛应用于延缓衰老和控制炎症,但是由于多种因素影响,尤其是Cu,Zn-SOD具有种质特异性以及在体内停留时间短(通常只有6~10 min),使得Cu,Zn-SOD的应用受到很大限制.定点突变技术是改造、优化基因常用的手段,也是研究蛋白质结构和功能之间复杂关系的有效方法,在医学上还可用于基因治疗等.目前常用的定点突变方法有寡核苷酸引物介导的定点突变、重叠延伸PCR定点突变及盒式突变等[1].但由于这些方法操作繁琐,意外突变多等缺陷,使定点突变的实验受到一定限制.本研究采用一种近年来新的定点突变技术一快速PCR定点突变方法成功地对hCu,Zn-SOD进行了基因改良(将hCu,Zn-SOD基因中非活性中心的Cys111密码子突变为Ala密码子,以提高其稳定性),同时对该定点突变技术要点进行探讨.
-
铁代谢与肝癌预防
一、铁离子的生理作用与铁代谢的分子机制铁离子是人体中含量大的金属元素,主要作为红细胞内的血红蛋白铁和肌肉中的肌红蛋白铁而从事分子氧的运输作用.它还存在于一切细胞之中,催化细胞内的氧化还原而形成多数的酶活性中心,并与细胞生长和凋亡等机制相关.铁离子如果在体内存在过剩,则其毒性极强,可成为细胞损害之原因.它在细胞内同铁蛋白、在血液内同运铁蛋白相结合,以使不成为细胞毒而加以储藏或进行运送.
-
肺炎时NO、活性一氧化氮的产生和基质金属蛋白酶活性表达的调节
基质金属蛋白酶(MMP)的活性中心是含有Zn的蛋白分解酶,具有分解和重建细胞外基质的重要作用,与感染、炎症、创伤愈合、血管再生及肿瘤浸润转移等相关.
-
尾加压素Ⅱ与肺脏疾病的研究进展
尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)初是从硬骨鱼的尾部下垂体中分离得到的一种类似于生长抑素的环肽.各种动物来源的UⅡ均由11~1 5个氨基酸组成,活性中心均为CFWKYC6个氨基酸组成的环状结构.1998年Coulouarn等在人体组织中发现UⅡ,并认为其是一种强烈的血管收缩剂.1999年,Ames等先证明了孤儿受体GPR14是UⅡ的特异性受体,国际药理联合会(IUPHAR)将其命名为UT.UT是一种G蛋白偶联受体,至今尚未发现其受体亚型.近又发现了一种尾加压素Ⅱ相关肽( urotensin related-peptide,URP),它在UⅡ的活性结构两端各连接一个氨基酸残基,并具有UⅡ相似的作用.很多学者对以上三种激素进行了大量研究,现研究证明其可能与肺脏疾病有关.本文对其作一综述.
-
N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶活性位点的构成研究
目的:用生物信息学软件预测出N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶的活性中心的金属离子结合位点.方法:选用DEPC、WRK、PMSF、NBS、DTNB 5种化学试剂选择性修饰N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶中组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、色氨酸和半胱氨酸;同时考察Co2、Fe3+、Mg2+、Mn2+、ZN2+、Ni2+、Cu2+等金属离子对酶活性的影响.结果:在DEPC、WRK修饰后,酶的活力明显下降,而PMSF、NBS、DTNB对酶的活力影响不大;说明组氨酸和酸性氨基酸为酶活性中心的必需氨基酸,而丝氨酸残基、色氨酸残基、半胱氨酸残基不参与酶活性中心的组成;Co2+对酶反应有促进作用,验证了生物信息学的预测结果;底物N-乙酰-D,L-蛋氨酸对酶有较好的保护作用,保护作用随浓度增加而增加.结论:本研究为深入研究酶结构与功能的关系提供实验依据,为N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶的工业应用提供理论参考.
关键词: N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶 化学修饰 活性中心 底物保护 -
金属β-内酰胺酶表型检测进展
1 前言金属β-内酰胺酶(MBLs)是一组以金属离子为活性中心的β-内酰胺酶,其活性可被金属螯合剂所抑制.按功能分类Bush将其定为第3组,按分子生物学分类Ambler将其定为B类酶.
-
硫氧还蛋白mRNA在非酒精性脂肪肝大鼠肝组织中的表达
近年来,随着生活水平的提高,饮食结构的改变,NASH的发病率有逐年升高的趋势,并可发展为肝硬化和肝癌以及成为肝衰竭的少见原因.对其发病机制的研究表明,NASH与氧化应激诱导的肝细胞内脂质过氧化损伤密切相关.硫氧还蛋白(Trx)是一个控制细胞氧化还原状态的、广泛表达的小分子蛋白质,通过其活性中心硫氢键和二硫键的可逆转换参与细胞内的氧化还原过程.Trx被认为是除GSH和SOD系统之外的另一个内源性抗氧化系统.为此,本研究采用高脂胆固醇饮食建立的NASH大鼠模型,观察大鼠肝组织中Trx mRNA的表达情况,对NASH的发病机制作初步探讨,为其发生和治疗提供理论基础.
-
羧肽酶A1及其活性中心基因的表达及活性分析
目的:克隆羧肽酶A1(carboxypeptidase A1,CPA1)全酶及其活性中心基因,构建重组表达载体进行诱导表达,分析表达产物活性.方法:RT-PCR扩增CPA1全酶及活性中心基因,测序分析后将目的基因克隆于表达载体pGEX-4T-1,测序证实插入方向正确后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达目的基因后SDS-PAGE电泳分析.目的蛋白经变性、复性、纯化后MTT法和集落形成试验鉴定其活性.结果:获得了人CPA1全酶及活性中心基因,目的基因诱导表达后约66 kD及46 kD处可见新生蛋白带;活性分析显示CPA1全酶和活性中心蛋白都具有一定的催化水解活性,但后者对肿瘤细胞的杀伤效果较弱.结论:能成功克隆了人CPA1全酶及其活性中心基因,获得了二者的原核表达产物,体外具有一定活性.可望以人羧肽酶A1全酶及其活性中心基因为新起点,继续完善优化羧肽酶A1系统,为抗体靶向治疗前列腺癌的临床应用奠定基础.
-
半胱氨酸蛋白酶在医学寄生虫学领域的研究进展
半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease)是一类在酶的活性中心含有半胱氨酸残基的蛋白水解酶,该酶在生物体内初合成时常为前体物质,包括无活性的前体区和催化区.前体区提供了大量独特的功能,涉及在细胞内有助于蛋白质折叠的监护分子、内源性的蛋白抑制因子以及信号肽序列.半胱氨酸蛋白酶广泛地存在于人类、寄生虫等多种动物体内,因此生物体内的绝大多数化学反应都需要蛋白酶的催化.对人类半胱氨酸蛋白酶的研究工作主要集中在凋亡和肿瘤两个方面 [1,2],而对寄生虫半胱氨酸蛋白酶的研究,由于该酶涉及虫体的毒力、对组织和细胞的侵袭力和免疫逃避等多个方面,因此对其研究更为广泛.本文重点对寄生虫半胱氨酸蛋白酶近期研究的进展作一综述.