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胶体金免疫层析技术在食品检测中的运用
胶体金是由氯金酸在还原剂如柠檬酸三钠、抗坏血酸、柠檬酸钠、鞣酸等作用下聚合成一定大小的金颗粒,并在静电作用下形成稳定的胶体状态。因为胶体金具有肉眼可见的红色,当抗原与抗体结合部位的金颗粒达到一定数量时,便可观察到红色条带,通过红色条带即可判断检测结果。本文将对胶体金免疫层析技术在食品检测中的运用展开研究,以期能够为关注这一领域的人们提供相关有价值的参考。
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山莨菪碱对大鼠体内梭曼解毒作用的影响
啮齿类动物对梭曼有很强的解毒能力,但在梭曼靶前解毒(指梭曼进入机体之后并在到达靶器官之前机体对其解毒作用中并没有得到充分发挥,如肠道和肝脏羧酸酯酶(car-boxylesterase,CaE)的结合部位约占机体总结合部位的80%,但因梭曼在这两个器官中的通过比例较小,且在到达这两个器官之前已经有足够的毒剂进入靶器官,所以大部分酶结合位点并没有得到充分利用.因此,如能设法提高它们的利用度,就有可能减少梭曼到达靶器官的量,从而降低梭曼的毒性作用.
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梭曼脱烷基的机制及化合物对其的延缓作用
梭曼脱烷基的分子机制有六十年代形成的碳离子形成机制及近年来提出的推拉(push-pull)机制,碳离子形成机制是组氨酸咪唑基上的质子化基团与烷氧基上的氢氧键结合,使C-0极化形成碳离子,然后C-0断裂脱下烷基.推拉(push-pull)机制认为甲基转移的动力来自AChE活性中心阴离子结合部位的氨基酸残基E199、W84的静电及空间相互作用,伴随甲基Cβ至Cα的转移,C-O键断裂.H440H+及氧阴离子洞对C-O断裂及随后负电荷形成起拉(pull)作用.
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甲型H1N1流行性感冒病毒血凝素HA1氨基端的表达及双抗体夹心ELISA法的建立
甲型H1N1流行性感冒(简称流感)病毒是一种人类常见的流感病毒之一,2009年引起流感大流行的病毒并非一种全新的流感病毒[1],陆一涵等[2]推测可能是北美地区的H1N4病毒发生了一定程度的变异(包括重组和重排)所致。基因组测序发现,该病毒包含禽流感、猪流感和人流感3种流感病毒的基因片段[3-4],其中血凝素(HA)蛋白来源于猪谱系,一直存在于经典猪流感病毒和三源重排子猪流感病毒中[5]。HA蛋白是流感病毒主要的表面抗原,与病毒吸附穿膜及宿主对病毒易感性有关[6-8],其变异率较高,常通过突变使病毒逃脱宿主免疫引起新的流感大流行。这种变异主要体现在HA1氨基端球形头部的受体结合部位与抗原决定簇氨基酸的改变,因此甲型H1N1病毒HA1氨基端蛋白的表达是建立特异性检测方法的关键。笔者通过原核表达此次甲型H1N1流感病毒血凝素HA1氨基端蛋白,制备多抗血清,建立了特异性双抗体夹心ELISA检测法。
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不同工艺人血白蛋白与地西泮结合功能的比较研究
目的 研究比较不同生产工艺制备的人血白蛋白(HSA)与地西泮的结合功能.方法 在0.1 mol/L的地两泮储备液中加入PBS缓冲液,并调整地两泮的终浓度分别为5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μmol/L,用可见-紫外分光光度计于波长254 nm处测定各样品的吸光度(A)值并绘制标准曲线.取预处理后的各HSA样品(0.615 mmol/L),分别加入终浓度为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mmol/L的地两泮储备液,采用超滤离心法测定超滤透析液中游离地西泮浓度,据此参照公式计算在地西泮浓度为0.1 mmol/L时HSA与地两泮的结合率,以及各HSA样品与地西泮之间的结合常数.结果 标准曲线显示地西泮浓度与A254值呈线性关系.各HSA样品与地西泮结合率的检测结果显示,HSA与地西泮的结合率高为98.18%,低为97.47%,不同生产工艺制备的样品间比较,HSA与地西泮的结合功能差异均无统计学意义.各HSA样品结合常数范围在6×104~10×104 mol-1之间,国内不同生产工艺制备的各HSA样品的结合常数平均值约为9.00×104 mol-1,与国外HSA样品(8.91×104 mol-1)比较差异无统计学意义,其中采用Cohn's改良法(离心)制备的样品结合常数平均值低(7.78×104 mol-1),采用Cohn's经典法(压滤)制备的样品结合常数平均值高(9.57×104 mol-1),生产工艺对于HSA的结合常数没有明显影响.结论 不同生产工艺制备的HSA与地西泮的结合功能基本一致.
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软组织肿瘤病理诊断中的一些疑难问题
一、高分化血管肉瘤与乳头状血管内皮细胞增生在软组织病理诊断中,血管肿瘤没有完整包膜,良性的血管瘤也可以侵袭性生长,因此血管肉瘤和良性血管病变的鉴别依赖于内皮细胞的异型性和组织结构的异型性,如核染色质深染,靴钉样核,内皮细胞层次增多,核分裂象增多等.更重要的一点是血管腔隙间的相互吻合沟通.在一些特殊情况下,还需要结合部位、病史和其他临床情况一起考虑,不能仅凭镜下形态进行判断.
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HCV IRES介导荧光素酶小鼠体内表达模型的建立
HCV内部核糖体起始位点 (internal ribosomal entry site, IRES)含有40S核糖体的有效结合部位和与内部翻译起始因子eIF-3的结合部位,以内部起始方式调控介导HCV蛋白的翻译启动,在翻译调控中具有重要作用[1],是反义寡核苷酸、核酶和siRNA等药物治疗的重要靶位.王小红等[2]曾构建了CMV启动子启动转录的HCV IRES调控荧光素酶表达载体pHCV-neo4,建立了转基因细胞模型.获得了在细胞水平上对HCV有明显抑制作用的反义寡核苷酸.而在动物水平上的评价却无合适的模型.我们进一步采用水动力转染法将pHCV-neo4表达载体转染到小鼠体内,在小鼠肝脏检测到荧光素酶的高水平表达,可作为体内瞬时评价以HCV IRES为靶位的抗HCV药物活性的小鼠模型.
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子宫内膜癌雌激素非基因转录效应研究进展
子宫内膜癌是一种雌激素依赖性肿瘤,其发生、发展与高雌激素水平密切相关.1983年,BokJaman [1]提出,根据发病机制,子宫内膜癌分为Ⅰ莲即雌激素依赖型和Ⅱ型即非雌激素依赖型,其中Ⅰ型子宫内膜癌占70%~80%.雌激素发挥其生物学效应主要是通过结合细胞核内特异性的受体(即核受体),但Pietras和szego [2]提出,细胞膜也存在雌激素的结合部位(即膜受体),而膜受体的研究也只在近10年才有所进展.雌激素与受体结合后通过两条途径发挥其生物学作用.
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E2F1对XRCC1启动子调节作用的研究
目的:探讨E2F1对XRCC1启动子的调节作用及其意义.方法:PCR扩增XRCC1启动子序列克隆至pGL3-Basic荧光报告载体上,与E2F1或突变的E2F1(132E)表达载体分别同时转染Sao2细胞;从基因Bank中调取XRCC1启动子序列和E2F结合位点序列分析其相关性;设计引物逐渐从5'端删除与E2F结合位点相关的序列,将PCR产物分别克隆至pGL3-Basic荧光报告载体上,转染至Sao2细胞.细胞裂解后与β-gal反应液一同保温,570 nm处读取吸光度值.结果:XRCC1与E2F1共转染后,可以诱导XRCC1荧光强度的增加;XRCC1启动子序列5'端-819~-803与E2F结合位点相关,删除5'端序列使荧光强度减少.结论:E2F1作用于XRCC1启动子序列,上调XRCC1转录.
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老年人铸造支架制作中金--塑结合的初探
随着口腔修复技术的发展,铸造工艺的应用越来越广泛.近几年,在学习研究铸造工艺理论的基础上,紧密结合临床实践,对老年人修复体中应用整铸金属可摘支架中的金--塑结合问题进行了深入探索和总结.本文就铸造支架使用于大、中、小各型可摘局部义齿中金--塑结合部位的制作方法作以浅析,与同仁们共同探讨.制作方法利用熔模精密铸造法制作修复体有两种方法,即带模铸造法和脱模铸造法.这里主要使用带模铸造法:共铸造支架80件,其中小型30件、中型30件、大型20件.
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新型微管靶向化合物 WX-127-07体外抗肿瘤活性及作用机制
目的:体外评价新型微管靶向化合物 WX-127-07的抗肿瘤活性,并探讨其作用机制。方法以3种微管靶向药物紫杉醇、长春新碱和秋水仙碱为阳性对照,化合物 WX-127-07在0.3~300 nmol·L-1浓度下作用于5种细胞,72 h 后用 SRB 法检测细胞增殖抑制活性,用流式细胞术检测细胞周期阻滞,用高内涵分析(HCA)技术分析该化合物的细胞毒性特征及其与肿瘤和炎症等相关的信号转导途径,用秋水仙碱/荧光-长春碱竞争实验和胰酶消化微管蛋白实验在分子水平测定该化合物的微管蛋白结合位点。结果 WX-127-07对肝癌HepG2细胞、宫颈癌 HeLa 细胞、非小细胞肺癌 A549细胞、人胚肺成纤维细胞及脐静脉血管内皮细胞增殖均具有明显的抑制活性,lC50分别为4.47±0.05,5.18±0.08,4.90±0.19,4.10±0.16和(5.04±0.08)nmol·L-1,低于秋水仙碱〔 lC50分别为21.17±1.22,14.19±0.53,43.80±1.64,145.89±10.97和(27.67±1.79)nmol·L-1〕和长春新碱〔lC50分别为16.51±0.36,16.76±0.33,27.80±2.75,43.80±1.48和(9.15±0.78)nmol·L-1〕,低于或近似于紫杉醇〔lC50分别为10.68±0.61,12.86±0.25,4.81±0.61,102.07±15.17和(3.04±0.12)nmol·L-1〕。用 HCA 技术进行细胞多参数分析显示,与长春新碱和秋水仙碱相似, WX-127-07浓度依赖性地诱发 A549细胞微管含量降低(P=0.0075),且作用浓度低于对照药物紫杉醇、长春新碱和秋水仙碱;WX-127-07、紫杉醇、长春新碱和秋水仙碱均能诱发 A549细胞出现 G2/ M 期阻滞,并使HepG2细胞核膜通透性增加,出现早期凋亡现象,但不影响肿瘤以及炎症相关的信号通路。微管蛋白位点竞争实验结果表明,WX-127-07浓度依赖性地抑制秋水仙碱与微管蛋白的结合(P =0.0259)。化合物与微管蛋白作用后用胰酶消化,其产物经 SDS 电泳,发现 WX-127-07作用后的条带与秋水仙碱相似。结论WX-127-07具有较强的体外抗肿瘤细胞增殖活性,其抗肿瘤作用机制符合微管靶向药物的作用特点,选择性地作用于微管秋水仙碱位点,是新型高活性的微管解聚剂。
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乙型肝炎病毒基因型与治疗
一、HBV基因型检测方法分析病毒全碱基基因序列以分子系统树判定HBV基因型的方法,需时、费力且欠实用.作者早年研究证实,单依S基因序列即完全可以确定.然而这也需要处理大量检体,颇为繁琐,遂行深入探索,终于开发出了应用S基因区为引物的PCR检测法.此即采用能识别各基因型特异性序列的限制酶并依其限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymor-phism:RFLP)而确定基因型的技术.尔后,又研究成功采用识别前-S2区基因型特异性区氨基酸的单克隆抗体的EIA检测法,更简化了检测手续.只是采用本法由于引物结合部位的甚微变异或抗体识别部位变异,仍可有百分之几病例不能获得确定.对于此类病例,则必须根据S基因序列的实测结果再依系统树分析判定.
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不同反应性抗体分子产生机制的研究
抗体拥有丰富的多样性,提供大量不同的结合部位以识别环境中数以百万计的各种抗原分子.据估计,一个个体所产生的抗体的不同类型(据估计约为108)比体内所有其他蛋白质加在一起还多,而且这些抗体类型的数量也多于基因组中的基因数.
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抗IgE抗体治疗成人和儿童慢性哮喘
背景:Omalizumab是重组人源化抗IgE单克隆抗体,能抑制免疫系统对变应原接触的应答.它针对IgE与高亲和力Fc受体的结合部位.Omalizumab能阻止血清游离IgE附着于肥大细胞和其他效应细胞,从而防止IgE介导的炎症变化.
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阿米卡星和头孢唑啉对大肠埃希菌的体外抗生素后效应实验观察
抗生素后效应(Postantibiotic effect,PAE)是抗生素与细菌短暂接触后再清除抗生素,细菌生长在一定时间内受抑制的现象.此现象的机制解释为药物持续占据细菌结合部位所致的非致死性损伤[1,2],药物作用后细菌胞内ATP浓度的恢复需要一定时间[3],并出现DNA合成的变化[4]等.国外学术界在PAE机制、意义和方法学等领域的相关研究十分活跃.国内亦有方法学和金黄色葡萄球菌的实验报告[2],但对于临床病原菌及结合临床用药实际所进行的研究尚不多见.鉴于氨基糖苷类和β-内酰胺类的联合抗菌方案较为常见,我们以阿米卡星(AMK)和头孢唑啉(CEZ)分别对20株不同来源的大肠埃希菌作PAE观察,继而将两种药物联合用于上述菌株,以期探讨在联合抗菌治疗中PAE作为药效动力学指标的可行性.
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膦甲酸钠治疗乙型肝炎病毒YMDD变异株感染疗效观察
膦甲酸钠具有良好的抑制乙型肝炎病毒的作用[1,2],它直接作用于核酸聚合酶的焦磷酸结合部位.与核苷类药不同,它不涉及细胞或病毒的胸腺嘧啶激酶,因而对无环鸟苷等耐药株仍有抑制作用[3,4].
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甘氨酸延伸型胃泌素受体在结肠和结直肠肿瘤中的研究
目的:建立甘氨酸延伸型胃泌素胞浆膜受体结合试验,并应用该方法检测甘氨酸延伸型胃泌素受体的部分特性及其在正常结肠和人结直肠肿瘤中的表达.方法:用人结直肠肿瘤细胞株DLD-1建立胞浆膜制备方法,125I标记的甘氨酸延伸型胃泌素进行受体结合试验.结果:胞浆膜受体结合试验的条件为:5~10 mg胞浆膜(离心25 000 r/min 45 min制备),37℃温育60min.正常Sprague-Dawley大鼠结肠粘膜和从结肠粘膜制备的胞浆膜有特异结合,而从完整结肠制备的胞浆膜无特异结合.胞浆膜甘氨酸延伸型胃泌素受体抑制50%结合的非标记配体浓度(IC50)为3.64μmol/L±1.93μmol/L;特异性胆囊收缩素(CCK)-A受体拮抗剂L364和特异性CCK-B受体拮抗剂L365不能拮抗该受体;非特异性受体拮抗剂氯苯酰色氨酸则能拮抗.结论:甘氨酸延伸型胃泌素受体位于正常大鼠结肠粘膜、结肠粘膜和结直肠肿瘤细胞膜上,属单结合位点、低亲和力受体,不能被特异性CCK-A或CCK-B受体拮抗剂拮抗,是一种新受体.
关键词: 结合部位 结肠直肠肿瘤 受体 缩胆囊素/拮抗剂和抑制剂 -
胃癌细胞垂体腺苷环化酶激活肽相关受体分析
目的:研究低分化胃癌细胞株MKN-45细胞膜上的垂体腺苷环化酶激活肽(PACAP)受体及其特性.方法:用125I-PACAP-27对MKN-45细胞膜上的PACAP受体进行放射受体分析.结果:Scatchard分析结果表明MKN-45细胞膜上存在PACAP-27单位点结合受体,其解离常数(Kd)=24.34 nmol/L±2.85 nmo1/L,大结合能力(Bmax)=419.52 pmol/106细胞±7.25 pmo1/106细胞,PACAP-27的50%抑制浓度(IC50)=24.24 nmol/L.PACAP-38和血管活性肠肽(VIP)均可竞争125I-PACAP-27与PACAP-27受体的结合,PACAP-38(IC50=67.97 nmol/L)对受体的亲和力与PACAP-27相似,VIP对受体的亲和力较弱(IC50=239.74nmol/L).结论:MKN-45胃癌细胞膜上存在PACAP功能受体,提示PACAP可能对胃癌细胞的生长起一定作用.
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成都地区人乳头瘤病毒16型E2基因和长控制区序列分析
目的 研究人乳头瘤病毒(HPV)16型E2基因和长控制区(LCR)序列变异以及其与子宫颈病变的相关性.方法 成都地区HPV16型感染者标本50份,包括38份HPV携带者的子宫颈脱落细胞,8份生殖器疣患者的疣体组织,2份子宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ级和2份子宫颈CINⅢ级的病变组织.PCR扩增E2基因与LCR序列并测序,构建进化树.结果 50份标本中,E2基因有12个突变位点,其中1份生殖器疣标本3683有C→A突变;其他48份标本均存在≥2个位点的突变.所有标本的LCR序列都有突变,共有28个突变位点.选择10份标本测序并构建进化树,8份为Asian变异株;E2突变在各种子宫颈病变中均存在,而LCR 7867 G→A为4份子宫颈CIN所特有.结论 LCR 7867 G→A突变是成都地区子宫颈病变相关的一个突变位点.
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乙型肝炎表面抗原基因启动子ⅠDNA结合蛋白1对诱导型一氧化氮合酶基因启动子转录活性的双向调节
目的 探讨HBV表面抗原基因启动子Ⅰ DNA结合蛋白1(SBP1)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子转录的调节作用.方法 利用生物信息学技术确定iNOS基因的启动子区域(iNOSp)和3个缺失突变体的基因序列,PCR分别扩增iNOSp和3个缺失体的基因序列,分别克隆至报告基因表达载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-iNOSp报告载体;以构建的这4种报告质粒分别转染人肝母细胞瘤细胞系HepG2,用ELISA检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HBV SBP1共转染HepG2细胞系,用ELISA检测CAT的表达活性.结果 成功获得iNOS基因启动子和3个缺失突变体的正确克隆,其中p1-iNOSp和pcDNA3.1(-)-HBV SBP1瞬时共转染HepG2细胞时,iNOS启动子的转录活性上升1.54倍;p3-iNOSp启动子和pcDNA3.1(-)-HBV SBP1瞬时共转染HepG2细胞时,iNOS启动子的转录活性下降31.3%,重复实验得到相似结果.结论 克隆的新基因SBP1在细胞内的表达,对iNOS基因反式激活iNOS启动子的转录活性具有明显的双向调节作用,双向调节的部位是iNOS启动子的核因子(NF)-IL6、A-激活域结合位点(AABS)和NF-κB这3个结合位点.