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胶体金免疫层析技术在食品检测中的运用
胶体金是由氯金酸在还原剂如柠檬酸三钠、抗坏血酸、柠檬酸钠、鞣酸等作用下聚合成一定大小的金颗粒，并在静电作用下形成稳定的胶体状态。因为胶体金具有肉眼可见的红色，当抗原与抗体结合部位的金颗粒达到一定数量时，便可观察到红色条带，通过红色条带即可判断检测结果。本文将对胶体金免疫层析技术在食品检测中的运用展开研究，以期能够为关注这一领域的人们提供相关有价值的参考。
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屏风固金颗粒免疫调节作用的血清药理学研究
屏风固金颗粒由黄芪、白术、防风、太子参、金银花、连翘、藿香、防风、甘草等组成.本实验采用血清药理学方法,通过测定屏风固金颗粒含药血清对自然杀伤细胞(NK细胞)杀伤活性、脾脏T淋巴细胞增殖活性及分泌白细胞介素-2(IL-2)的活性等指标,探讨该药的免疫药理活性及其作用机制.
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金纳米微粒在放疗中应用
在过去几年中，随着纳米技术的飞速发展以及对肿瘤生物学的深入认识，纳米技术在肿瘤分子医学领域的应用越来越多。纳米粒子的特殊理化性质，使得放射肿瘤学家对其在放疗和对正常组织的放射保护方面的应用尤为感兴趣。DNA纳米技术高效制备结构可调的金颗粒二聚体胶体纳米粒子的“自下而上”自组装是纳米材料领域的热点研究内容，在纳米尺度内调控粒子的自组装过程，对研究粒子之间的近场相互作用、制备功能纳米材料及发展纳米器件等具有重要意义。
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美国微生物学会杂志摘要
1.美国德州MD Anderson癌症研究中心开发了一种颗粒,是带有金(金属)的重组丝状M-13噬菌体的颗粒,据称可以用作影像诊断试剂,并还可能具有可将药物导入损伤组织的潜在作用.该组研究人员曾发现人血管系统具有特异的分子标记,并被称"邮编"(zip codes).根据这一特性,他们利用重组噬菌体DNA可展示一些肽,从而可以识别这些"邮编",而与之结合并到达特殊的组织内.目前学者们进一步利用金颗粒可以与数种噬菌体结合,并增强与组织发生特异结合.金还可与药物及干细胞结合,传递至特异的组织.当将金与噬菌体混合时,由于分别带有不同电荷,可形成一种胶丝物质.在这种物质上还可容许干细胞生长,据认为比平皿更具有生理性.如将在该物质上生长的干细胞注入患处,还可有利于干细胞生长.多数学者认为这是一个重大突破.
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神经组织的电镜酶标记方法
电镜免疫细胞化学是利用抗原与抗体反应的原理对生物结构的化学成分进行定位和定量分析的方法,为了显示细胞中某种化学成分,需具有该成分的标记抗体及标记物,电镜常用的标记物有铁蛋白、辣根过氧化物酶和胶体金等.近十年来,免疫电镜金标的报道日益增多[12],酶标则相对较少[3].在实际工作中,有些组织金颗粒很难进入,需用酶标才能完成.结合我们的经验,介绍神经组织的酶标记方法.
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免疫胶体金在标记超薄切片中抗原的几点体会
金标法是利用胶体金在碱性环境中带负电的性质,使其与抗体相吸引,从而将抗体标记.我们在使用免疫胶体金标记超薄切片抗原的实验中深深地体会到,要提高标记阳性的成功率,某些因素将在实验中起到很重要的作用.1、材料和方法1.1材料 20例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为IgA肾病的肾活检组织的环氧树脂包埋块.1.2方法取肾活检组织,经0.05%戊二醛,1%多聚甲醛(二甲砷酸钠缓冲液配制)固定3-4h,1%OsO4后固定2h,梯度丙酮脱水,Epon812包埋,60℃聚合12h,制备超薄切片(50-70nm),粘贴于带有formar膜的镊网上.以下实验在湿盒内进行:10%H2O2蚀刻30min,双蒸水冲洗;正常羊血清30m in;0.05M TBS冲洗;一抗((1:10)4℃冰箱内孵育20h,加室温2h; 0.05M Tris冲洗;正常羊血清孵育15min;0.05M Tris冲洗,0. 02M Tris(其中含0.1%BSA 0.05%NaN3pH8.2)冲洗;二抗 (1:20),室温孵育2h;0.02M Tris冲洗,0.05M Tris冲洗, 0.05M Tris加Tritonx-100浸洗,3次每次10min,双蒸水冲洗 ;1%戊二醛固定15min,双蒸水冲洗;铅铀双重染色,电镜观察.2、结果金颗粒主要集中于肾小管上皮细胞的胞质,有的沉积在线粒体内,或刷状缘其间 .详细内容见(用金标法检测细胞因子在人IgAN肾细胞内的位点及意义)金晓明等一文.3、体会和注意事项3.1 戊二醛的浓度直接影响抗原的保存.我们经过多次实验,戊二醛浓度在0.05%, 多聚甲醛1%时,固定时间不少于3小时,组织大小在1-2mm3,组织结构保存良好 ,同时对抗原影响也不大.3.2 抗体的稀释液采用0.05M Tris,0.15M NaCL,pH7.0,含 0.05%聚乙二醛(PEG)和0.05%NaN3.其中PEG可以使金颗粒分散, 提高蛋白质间的结合力,有利于一抗与二抗的结合,血清和BSA作为稀释液时都没有PE G效果好.一抗与二抗的稀释比例根据所标记抗原的情况而定.3.3 Triton x-100加入到0.05M Tris缓冲液中作为冲洗液,可以提高胶体金的穿透力,同时Triton x-100又是一种表面活性剂,在2抗标记后用含有0.05Triton x-100的Tris缓冲液浸洗30min,可以清除一部分非特异性反应的胶体金,使切片中组织形态清晰,提高样品的反差,而过量浓度的Tri ton和过长时间的浸洗会破坏组织中的膜结构.3.4 在实验中采用网架装载铜网,一次可以同时孵育几张到几十张超薄切片,同时不用担心在孵育过程中切片的正反面,又可避免镊子夹破支持膜和切片,节省每一实验步骤中的操作时间.网架是用铜网装载盒制成的,钻漏铜网盒,按所需的大小锯成小网架.清洗时用浓盐酸浸泡几分钟后冲洗,放在无水乙醇中保存,待下次使用前晾干.
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用金标法检测细胞因子在人IgAN肾组织内的位点及意义
IgA肾病(IgA N ephropathy,IgAN),为世界各地区常见的肾小球疾病之一,其中1/3 的病人于10～20年内逐渐进展为慢性肾功能衰竭.目前对IgAN的研究热点是多肽类细胞因子在肾脏疾病中的作用.作者等通过用转化生长因子(TGF β)、血小板源生长因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)对20例IgAN的免疫组化检测发现 ,TGFβ和bFGF在IgAN的活动期大量表达于肾皮质区的近曲小管和部分远曲小管的上皮细胞内,肾小球的系膜区亦见散在的表达.在完全或不完全硬化的肾小球周围的萎缩肾小管并伴有淋巴细胞浸润区域可见大量的TGFβ、bFGF的表达.为进一步了解上述细胞因子存在的位点,我们选用了金标法进行了免疫电镜观察.1、材料和方法1.1材料肾活检组织主要来源于哈尔滨医科大学附属第二院肾内科.选用通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为IgAN的20例环氧树脂包埋的组织块.1.2方法①免疫组化:TGFβ和bFGF抗体均由北京生物制品有限公司提供.采用s ABC法,具体步骤略.②免疫胶体金:羊抗兔IgG-胶体金3nm和5nm,由武汉博士德生物工程有限公司提供.采用间接法,具体步骤见[免疫胶体金在标记超薄切片中抗原的几点体会]宋雁南等一文.2、结果2.1免疫组化检测 TGFβ、bGFG在IgAN中弥漫的分布于肾皮质区的近曲小管和部分远曲小管的上皮细胞内(70%和90%),在肾小球内可见散在的细颗粒分布于系膜区(45%和35%).2.2免疫胶体金检测金颗粒(标记TGFβ、bFGF细胞因子)主要集中于小管上皮细胞的胞质,有的沉积于线粒体内,或刷状缘其间,或内质网表面等,在肾小球的系膜区、基底膜、内皮细胞及足细胞,亦可见散在的或集中的金颗粒.bFGF在肾间质内也表现为散在的金颗粒.3、讨论金标法是Faulk和Taylor(1971年)提出的,并首先用于免疫电镜.金标法是利用胶体金在碱性环境中带负电的性质,使其与抗体相吸引,从而将抗体标记.金颗粒集中的部位,既是抗原、抗体反应的部位.通过金标法,可以在细胞器的水平上观察到TGF β、bFGF细胞因子主要存在于小管上皮细胞的胞质内、线粒体内及线粒体周围,脱落于管腔的上皮细胞周围亦存在.实际检测的TGFβ、bFGF细胞因子是促进系膜增生的细胞因子,如果同时检测抑制系膜增生的细胞因子,可以将镍网翻过来,加上抑制系膜增生的细胞因子的抗体做双重染色(选用直径不同金颗粒),可在超微结构水平上,对促进/抑制系膜增生的细胞因子在IgAN肾组织中相互作用的研究提供理论依据.
