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乳腺癌组织中CD15抗原的免疫组化和免疫电镜研究
目的:探讨CD15抗原在乳腺癌组织中表达及分布特点与肿瘤发生发展和转移的关系.方法:应用CSA(catalyzed signal amplification,催化信号放大)免疫组化技术,对乳腺癌及正常乳腺组织进行CD15抗原检测,采用胶体金免疫电镜技术观察超微结构组织中CD15抗原的分布特征.结果:94例乳腺癌中75例呈CD15阳性表达,阳性率79.8%,10例正常乳腺组织腺管上皮细胞亦呈CD15弱阳性表达.CD15表达阳性率在乳腺癌组织学II-III级(87.3%)显著高于I级(69.2%,P<0.05),伴有淋巴结转移的乳腺癌中(90.2%)显著高于无转移者(67.4%,P<0.01).免疫电镜显示,CD15抗原主要分布于乳腺癌细胞质的界膜、内质网、高尔基体及近细胞核膜处和正常乳腺组织腺管上皮细胞质的界膜处.结论:CD15对判断乳腺癌恶性程度和预测淋巴结转移状况是一个具有实用价值的标志物,对探讨乳腺癌的发生、发展机理是一个新途径.
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锇酸固定组织的包埋后免疫电镜胶体金标记方法的改进
目的建立一种适用于中枢神经系统蛋白质抗原定位的包埋后免疫电镜胶体金标记方法.方法利用还原饿酸固定大鼠脑组织切片,首先在冰冻漂浮切片上用NaIO4确定待检抗原的可修复性,然后在亲水树脂Technovit7100包埋的半薄切片寻找使抗原得以大程度修复的佳NaIO4浓度,后在超薄切片上进行相应抗原的免疫胶体金标记.结果NaIO4对不同抗原的修复作用明显不同.对于可修复抗原,低浓度NaIO4即可以使其充分修复.低浓度NaIO4处理组织可使组织超微结构保持完好,并可使胶体金高密度标记.
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寒冷应激对大鼠肾上腺髓质亨廷顿蛋白相关蛋白1表达的影响
目的 探讨亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)在大鼠肾上腺髓质的超微结构定位,以及寒冷应激对大鼠肾上腺髓质HAP1表达的影响. 方法 成年雄性Wistar大鼠14只,2只用于免疫电镜研究,12只用于寒冷实验研究.寒冷实验中,将动物随机分为对照组和寒冷组,每组6只,寒冷组动物放置4℃环境下,12h后用免疫组织化学和Western blotting方法 检测大鼠肾上腺髓质HAP1表达的变化. 结果 免疫电镜结果 显示,HAP1免疫反应产物分布在肾上腺髓质细胞分泌颗粒外膜及分泌颗粒间的膜性细胞器上.寒冷组大鼠肾上腺髓质HAP1的表达明显减少,和对照组比较有显著性差异( P <0.01). 结论 HAP1可能与肾上腺髓质细胞内分泌颗粒及位于分泌颗粒内的肾上腺素/去甲肾上腺素的运输和释放有关.
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慢性强迫游泳应激抑郁模型大鼠行为学及海马Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ的变化
目的 探讨慢性强迫游泳应激(CFSS)模型大鼠行为学的改变和海马神经元Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达变化. 方法 成年健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为对照组(30只)和慢性强迫游泳应激组(30只).慢性强迫游泳组强迫游泳4周,制备慢性强迫游泳应激模型;糖水偏好实验、开场实验和Morris水迷宫检测大鼠行为学改变;荧光探针标记法测定海马神经元内Ca~(2+)浓度;胶体金免疫电镜、免疫印迹和RT-PCR检测CaMKⅡ的表达变化. 结果 慢性强迫游泳应激组糖水消耗量和糖水偏好百分比分别为4.114±0.644和86.610±4.450,对照组为8.157±1.105和94.930±2.893,差异有统计学意义(P<0.01);开场实验中慢性强迫游泳应激组和对照组的直立次数分别为1.75±0.96和6.00±0.82,差异有统计学意义(P<0.05);水迷宫实验逃避潜伏期分别为(20.762±3.236)s和(5.632±1.065)s,差异有统计学意义(P<0.01);海马神经元内游离Ca~(2+)浓度分别为(498.94±40.45)nmol/L和(288.91±32.42)nmol/L,差异有统计学意义(P<0.01);CaMKⅡ蛋白和mRNA相对表达水平均高于对照组(P<0.01). 结论 海马Ca~(2+)及CaMKⅡ的表达上调,可能是抑郁模型大鼠情感行为异常的病理生理基础之一.
关键词： 慢性强迫游泳应激 海马 钙离子 钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ 免疫电镜 免疫印迹 反转录-聚合酶链式反应 大鼠 -
α-突触核蛋白在正常大鼠脑神经元中的亚细胞定位
目的研究α-突触核蛋白(α-synuclein)在正常大鼠脑神经元中的亚细胞定位,为阐明其正常的生理功能提供线索.方法超小金标记结合银增强免疫电镜技术.结果α-突触核蛋白不仅存在于神经细胞的突触前终末,也见于神经细胞的轴突、胞浆与核中.在突触前终末,α-突触核蛋白的分布与突触小泡无明显的关系.在神经细胞核内,靠近核膜部分α-突触核蛋白的分布较为密集,细胞核中心部位α-突触核蛋白则较为稀疏.在胞浆和轴突中,α-突触核蛋白散在分布.另外,在线粒体中也有该蛋白表达.结论α-突触核蛋白广泛分布于神经元的各个部位,可能参与神经元的多种生理功能.
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高渗刺激诱导大鼠视上核与孤束核内神经元-星形胶质细胞复合体反应
目的 探讨大鼠接受高渗刺激后,视上核和孤束核内神经元-星形胶质细胞复合体(N-ASC)反应.方法 成年雄性SD大鼠50只,随机分为光镜组(n=40)和电镜组(n=10).采用多重免疫荧光标记法,在光镜下观察高渗刺激(9%氯化钠,5.5ml/kg尾静脉注射)后15、45、90和180 min,视上核内胶质纤维酸性蛋白(GFAP,标记星形胶质细胞)、催产素(OXT,标记视上核神经元)、Fos(标记神经元胞核)和孤束核内GFAP、酪胺酸羟化酶(TH,标记神经元)、Fos表达的时程变化.采用双重免疫电镜法,观察高渗刺激后视上核N-ASC内星形胶质细胞(用Cx43标记)与神经元(用Cx32标记)之间接触处的超微结构.结果光镜下在视上核和孤束核可分别观察到3种N-ASC,即:由 GFAP阳性星形胶质细胞与 OXT(或TH)阳性神经元形成的N-ASC;由GFAP阳性星形胶质细胞与Fos阳性神经元形成的N-ASC;由GFAP阳性星形胶质细胞与Fos和OXT(或TH)双阳性神经元形成的N-ASC.高渗刺激后 N-ASC的数量明显增加.抗Cx43和抗Cx32的双重免疫电镜显示,高渗刺激后Cx43阳性星形胶质细胞突起(即Cx43半通道)以及Cx32和Cx43形成的异型缝隙连接(HGJ)的数量明显增加.结论视上核和孤束核内的N-ASC参与渗透压调节反应.
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大鼠神经垂体催产素能神经元内神经分泌颗粒的免疫电镜观察
目的观察大鼠神经垂体催产素(OT)能神经元轴突及终末内颗粒囊泡形态学及免疫细胞化学特点.方法应用电镜包埋后免疫细胞化学方法,对大鼠神经垂体进行OT免疫染色.结果在OT能神经元轴突终末内,可见OT免疫反应性的致密核芯大颗粒囊泡和无OT免疫反应性的清亮小泡存在.部分囊泡与轴膜靠近,并可见颗粒囊泡与轴膜融合形成的胞吐现象;在轴突非终末部分,也可见OT免疫反应性的颗粒囊泡,散在分布轴浆内,还可见无OT免疫反应性的颗粒囊泡,呈散在或聚集分布,两种囊泡均可位于微管之间.结论位于轴突和轴突终末内的囊泡,在形态学和OT免疫染色方面有明显差异,推测它们在功能上也有不同.
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IL-1的Ⅰ型受体在大鼠颈动脉体中的超微定位
目的研究IL-1的Ⅰ型受体(IL-1RⅠ)在大鼠颈动脉体内的表达和亚细胞定位. 方法灌流固定的正常大鼠颈动脉体组织,用冰冻置换法包埋,超薄切片,胶体金免疫组织化学染色,电镜下观察. 结果 IL-1RⅠ样免疫反应阳性产物主要存在于主细胞,胶体金颗粒分布在胞膜、胞浆和胞浆中的细胞器及细胞核.支持细胞和毛细血管内皮细胞的胞浆中也可见少量免疫胶体金颗粒. 结论 IL-1RⅠ在大鼠颈动脉体特别是主细胞中有较强表达,此结果为进一步研究颈动脉体作为细胞因子化学感受器的可能性提供形态学基础.
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难治性癫痫患者脑组织胶质原纤维酸性蛋白和多药耐药基因蛋白的免疫电镜观察
目的在电镜水平上观察多药耐药基因蛋白(MDR1蛋白)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)在难治性癫痫患者脑组织的表达,确定其在细胞超微结构中的定位.方法临床难治性癫痫患者手术切除的病理组织标本,固定、冷冻超薄切片,以免疫胶体金(PAG)标记技术标记检测MDR-1和GFAP蛋白,在电镜下观察其表达.结果MDR-1蛋白与GFAP均在胶质细胞内有阳性表达,见于胶质细胞膜及其胞浆的广泛区域.在神经元和毛细血管内皮细胞中未见有GFAP和MDR-1蛋白的阳性表达. 结论在难治性癫痫患者脑组织中,MDR1蛋白与GFAP的高表达现象只存在于胶质细胞胞膜和胞浆内.
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大鼠脊髓后角浅层初级传入C纤维内μ阿片受体的免疫组织化学定位光镜与电镜研究
目的在光镜及电镜下观察大鼠脊髓后角内μ阿片受体(MOR)与C纤维的关系,为进一步揭示阿片镇痛的突触机制提供形态学证据. 方法根据辣椒素对初级传入神经中C纤维的特异性神经毒性,在大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素以毁损C纤维,用免疫组织化学ABC法比较脊髓后角内MOR免疫反应性的变化;根据西非单叶豆同工凝集素I-B4(griffonia simplicifolia isolectin I-B4,I-B4)与初级传入C纤维选择性结合的特性,应用双标(免疫)组织化学电镜技术(ABC-纳金法)分别标记脊髓后角内I-B4结合位点和MOR. 结果大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素3～7d后,其脊髓后角Ⅰ～Ⅱ层内的MOR免疫反应性较对照动物明显减弱;电镜下在大鼠脊髓后角浅层内观察到,MOR不仅定位于树突内,也分布在含I-B4结合位点的C纤维终末内.无论在树突内还是在轴突终末内,MOR主要分布在非突触部位,仅少量MOR与突触前膜和/或突触后膜有关. 结论脊髓后角中部分MOR来源于辣椒素敏感的C纤维,外源性吗啡或内源性吗啡样物质如内吗啡肽等MOR激动剂在脊髓后角内既可通过突触后(树突内)的MOR发挥作用,也可通过突触前(轴突终末内)的MOR对C纤维产生突触前抑制效应,而且在此过程中,MOR激动剂在非突触部位的作用可能是主要的.
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大鼠丘脑前核内海马下托复合体谷氨酸能传入终末与皮质投射神经元的突触联系
目的 探讨大鼠丘脑前核-海马下托复合体神经元环路的突触结构及谷氨酸分布特征.方法 应用HRP束路追踪结合包埋后胶体金免疫电镜技术.结果 在丘脑前核内,可见HRP顺行标记的海马下托复合体传入轴突终末,终末多为卵圆形,内含圆形透亮突触小泡和数个线粒体.其做为突触前成分与HRP标记的树突或非HRP标记的树突形成非对称性突触.在谷氨酸胶体金免疫反应切片上,胶体金颗粒标记胞体、树突、轴突终末等.HRP标记的轴突终末和一些非HRP标记的与突触后成分形成非对称性突触的轴突终末(Gray Ⅰ型)内,胶体金颗粒密度明显大于背景(胞体、树突、Gray Ⅱ型轴突终末等)的胶体金颗粒密度.其平均胶体金颗粒密度为突触后树突的3倍多,为对称性轴突终末(Gray Ⅱ型)的6倍多.在两张邻近的连续切片,γ-氨基丁酸(GABA)胶体金免疫反应切片上,GABA胶体金颗粒浓重标记Gray Ⅱ型轴突终末,背景标记极少;而非对称性轴突终末(Gray Ⅰ型)胶体金颗粒标记极弱.谷氨酸胶体金免疫反应切片上,Gray Ⅱ型轴突终末胶体金颗粒标记极弱.GABA阳性轴突终末与HRP标记的树突形成对称性突触,在同一树突上可见GABA能轴突终末形成的对称性突触和其他轴突终末形成的非对称性突触.结论 丘脑前核内来自海马下托复合体投射神经元的轴突终末是谷氨酸能的;来自海马下托复合体皮质投射神经元轴突终末,在丘脑前核与投射至海马下托皮质的神经元树突形成非对称性轴-树突触.
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冰冻切片进行免疫电镜的新尝试
利用冰冻切片制作电镜标本,由于冰晶的大量出现无法进行超微结构的识别,故很少有人涉足.在免疫电镜及酶细胞电镜等研究中,需要定位后进行电镜标本制作,为了避免冰晶的出现,只能使用非常烦琐的振动切片机切片.若进行系统的光镜、电镜观察,就更加困难.为此我们经过反复实验,不断探索,成功地使用冰冻切片进行脑组织免疫电镜的标本制作,改变了传统的冰冻切片不能制作电镜标本的观念,并取得了极为理想的效果.
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Sj43B基因编码蛋白的日本血吸虫虫体组织定位
目的确定Sj43B基因编码蛋白在日本血吸虫成虫体内组织及亚细胞水平定位. 方法取新鲜日本血吸虫成虫标本,按电镜生物样品制备方法常规固定、包埋,制成超薄切片,与鼠源纯化的抗重组Sj43B基因编码蛋白的IgE抗体(对照组试验为正常鼠血清)反应,再与大鼠抗小鼠IgE的IgG抗体结合,后与蛋白A-胶体金连接,透射电镜下观察胶体金颗粒的分布. 结果用正常鼠血清处理虫体切片,从皮层、肌层到皮层细胞体,未见有明显的电子致密的胶体金颗粒分布.用特异性IgE抗体处理的样品上,胶体金颗粒分布较广泛,见于皮层、肌层、胞质、核膜和核质内. 结论Sj43B基因编码蛋白在血吸虫成虫体内的分布无组织和亚细胞结构特异性.
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卵巢癌细胞株来源的外来体的抗原性初步研究
外来体(Exosomes)是一种直径30～90nm的膜性囊泡,初在网织红细胞中被观察到并命名,后来发现多数细胞可分泌此囊泡,如血小板、B淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞、树突状细胞(DC)、肥大细胞和一些肿瘤细胞.本研究培养了5种卵巢癌细胞系,试图从培养上清液中分离出外来体,经过免疫电镜和Western blot鉴定其是否携带有肿瘤细胞的特异性抗原,为外来体用于卵巢癌主动免疫治疗提供理论基础.
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水通道蛋白1 在肺组织中的表达
肺泡腔和血管腔间水的快速转运有极其重要的生理功能。水的转运障碍将会使肺水稳态失衡，导致肺水肿等液体代谢紊乱性疾病。然而，肺泡毛细血管屏障转运水的机制尚不清楚。90年代初水通道蛋白（AQPs）的发现，使水代谢的研究有了一个飞跃。有关AQP1在肺组织的表达位置及数量，国内外研究尚无定论。本研究采用免疫组织化学技术及免疫电镜方法检测AQP1在肺组织中的表达，为探究肺水代谢机制提供实验及理论依据。 一、 材料与方法 1.肺组织标本留取：将30只体重为200～250 g SD大鼠(中国医科大学实验动物部)随机分成2组，每组15只，麻醉、放血后冲洗肺血管床。一组大鼠气管内灌流4％多聚甲醛并浸泡24 h以上，在每只大鼠左肺上叶取一小块肺组织及下段气管0.5 cm长。常规脱水、包埋制成蜡块，用于免疫组化染色。另一组大鼠气管内灌流0.5％戊二醛和2％多聚甲醛固定2 h，再浸泡于2％多聚甲醛中固定过夜，在每只大鼠左肺上叶取一小块肺组织，用于免疫电镜检查。
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整合素α5β1在病理性瘢痕中的表达及意义
目的研究整合素α5β1在病理性瘢痕中的表达情况,探讨其在瘢痕发生、发展中的作用和意义.方法运用SP免疫组化及SPA-胶体金免疫电镜技术对15例增生性瘢痕、15例瘢痕疙瘩及10例正常皮肤进行整合素α5β1的检测,并对结果进行半定量及定量分析.结果在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的成纤维细胞中整合素α5β1呈阳性表达,较正常皮肤强(P＜0.01);在瘢痕疙瘩中的表达较增生性瘢痕强(P＜0.01).结论整合素α5β1与病理性瘢痕发生、发展关系密切.设法减少整合素α5β1在成纤维细胞的过度表达或许是抑制瘢痕增生、软化瘢痕的新途径.
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围术期胃癌患者血小板膜糖蛋白的免疫电镜观察
目的:研究胃癌患者围术期血小板膜糖蛋白CD41、CD62P含量的变化和分布位置的变化,为进一步研究肿瘤细胞的生长、转移与血小板膜糖蛋白CD41、CD62P形态、结构变化的关系奠定基础,为围术期防凝抗凝提供客观依据.方法:应用免疫电镜技术检测9例胃癌患者围术期CD41、CD62P表达的变化,同时选择年龄相当的正常人5例作对照.结果:与正常人相比,胃癌患者CD41、CD62P表达增多,手术使血小板活化更为加剧,同时观察到CD41、CD62P明显的形态、结构的改变.结论:胃癌患者血小板膜糖蛋白CD41、CD62P表达和释放增加,处于激活状态;手术促使血小板活化进一步加强.
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我国神经免疫学研究主要进展
自中华神经科杂志创刊50年来,我国在神经免疫方面取得了长足进展.随着许多传染病的控制,艾滋病已上升为主要矛盾.电镜、免疫电镜、CT、磁共振成像(MRI)、单光子发射计算机体层摄影术(SPECT)和正电子发射体层摄影术(PET)等的引入,把医学诊断学推上了一个新台阶.药理学进展已改写了帕金森病和癫癎的治疗,肾上腺皮质激素(ACS)、β干扰素和其他免疫药物为神经免疫性疾病的治疗开拓了新领域.基因组学、蛋白质组学和分子遗传学的崛起刷新了我们过去对很多疾病,包括肿瘤的看法.
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大鼠胃窦粘膜G、D细胞的免疫电镜观察
采用胶体金免疫电镜方法并加以改良,对大鼠胃窦粘膜G、D细胞进行观察,同时对G、D细胞内胶体金颗粒数目进行定量分析.结果发现,免疫胶体金颗粒分布于G、D细胞中,标记胃泌素或生长抑素的金颗粒主要呈分叶状或岛状的聚集体,多数游离存在于G、D细胞基底膜侧的胞浆中,少部分定位在G、D细胞核内;G细胞中金颗粒聚集体的金颗粒数目为107.04±19.68,D细胞中金颗粒聚集体的金颗粒数目为83.36±17.58.
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急性肾功能衰竭与内皮素-1关系的电镜免疫组化观察
目的:探讨ET-1 在ARF发病机制中的作用.方法:甘油肌注法复制成大鼠ARF模型,免疫电镜技术动态观察ET-1 在超微水平的分布与变化.结果:ARF大鼠肾小管上皮及其线粒体中ET-1 含量明显增加,且与肾组织病变程度呈正相关.结论:肾小管上皮细胞中ET-1 持续增多是导致肾小管坏死的重要原因,提示ET-1 与ARF发病机制中有重要联系.
