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锇酸固定组织的包埋后免疫电镜胶体金标记方法的改进
目的建立一种适用于中枢神经系统蛋白质抗原定位的包埋后免疫电镜胶体金标记方法.方法利用还原饿酸固定大鼠脑组织切片,首先在冰冻漂浮切片上用NaIO4确定待检抗原的可修复性,然后在亲水树脂Technovit7100包埋的半薄切片寻找使抗原得以大程度修复的佳NaIO4浓度,后在超薄切片上进行相应抗原的免疫胶体金标记.结果NaIO4对不同抗原的修复作用明显不同.对于可修复抗原,低浓度NaIO4即可以使其充分修复.低浓度NaIO4处理组织可使组织超微结构保持完好,并可使胶体金高密度标记.
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牛-山羊异种克隆早期胚的分叶状线粒体
利用牛卵母细胞和山羊耳皮肤成纤维细胞制作异种克隆胚,分别于激活后1、36、44、60、144 h,观察发育情况,并收集原核期胚,2-细胞胚,4-细胞胚,8-细胞胚和桑甚胚.光镜检查各时期胚,分别选取形态良好的5枚,用2.5%的戊二醛固定24 h后,用1.5%锇酸后固定40 min,再用乙醇逐级脱水并用丙酮置换,Epon-812包埋,后包埋块放入烤箱内聚合(37℃,24 h,45℃,24 h;60℃,24 h).
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透射电镜样品制备过程中节约锇酸的方法
在常规透射电镜(TEM)样品制备过程中,通常用1%~2%锇酸作后固定,由于锇酸价格昂贵,特别是临床电镜样品的制备量大,故节约使用锇酸一直是电镜工作者探索的内容.我们应用生理盐水(医用0.9%NaCl)配制的0.75%锇酸作样品后固定,不仅节约了锇酸还使组织结构较前清晰,现介绍如下.
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钌红染色在显示肺泡表面活性物质超微结构中的作用
采用戊二醛和锇酸浸没、或经支气管灌注固定肺组织,很难显示肺泡衬里层肺表面活性物质(PS)超微结构,其原因是固定剂取代肺泡内空气时,PS常被移位[1].
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电镜标本制作中锇酸的再利用
四氧化锇(OsO4)是一种强氧化剂,简称锇酸。对氮有较强的亲和力,对蛋白质、脂肪性物质及磷脂蛋白的膜结构有良好的保存作用。同时由于质量密度大,能产生较好的电子反差,经固定的组织不致变硬、变脆,便于超薄切片,所以是超微病理制片中不可缺少的试剂。但锇酸易发生氧化而产生锇黑,改变锇酸浓度,一般较难保存。所以我们采用物理方法收集,经收集的锇酸不产生锇黑,液体清亮透明。在短时间里收集使用过的锇酸制作第二批标本,经实践证明是可行的。
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AODO细胞浸渍-扫描电镜样品的制备
传统方法显示心肌间质中胶原纤维的形态,多依赖于组织学的切片和光学显微镜的观察,很难展示其立体的构筑形式和细微的结构特征.如何制作用于扫描电镜观察的胶原样品,在国内尚未见有报道.我们经过反复的实验,摸索出AODO细胞浸渍(四氧化锇细胞浸渍)-扫描电镜样品的制备方法,使此问题得以解决.材料和方法:①升主动脉插管,生理盐水冲洗;②0 .5%戊二醛+0.5%多聚甲醛灌注固定;③取左心室壁,修块至3×3×5mm;④入 1%锇酸后固定;⑤于0.1%锇酸20℃中浸渍3~5天;⑥经50%二甲基亚砜包埋; ⑦液氮中冷冻断裂;⑧1%锇酸和单宁酸导电染色;⑨真空干燥、喷镀,电镜观察.结果: 扫描电镜下,可观察到位于心肌细胞和毛细血管之间的各种粗细不等的胶原纤维,可观察到胶原纤维编织成的各种网状和框架式的结构,以及它们的立体构筑形式.意义:利用此方法制备的样品,不仅可在扫描电镜下甚为清晰地、立体地显示胶原纤维的形态和结构,亦可同时显示心肌细胞、毛细血管和胶原纤维间的形态和位置关系.我们认为它是使用电镜技术研究细胞间质各结构的理想方法.心得和体会:①为保证样品制作的质量,固定样品时,样品体积不可过大,固定时间不可过长,否则细胞表面和胶原的结构不易显露;②0.1%锇酸的浸渍是样品制备是否成功的关键一步,其温度须控制在20℃左右,温度过低,细微结构显示不清;温度过高,样品极易破碎.
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单用叔丁醇和戊二醛的扫描电镜样品制备技术探讨
单用叔丁醇扫描电镜样品制备法是在叔丁醇冷冻干燥法的基础上作适当改良,以叔丁醇代替酒精脱水,不需置换直接进行叔丁醇冷冻干燥,后固定的锇酸价格昂贵,必须依靠进口.用戊二醛单固定处理的样品能达到双固定的效果,提高了部分生物样品的制备速度和质量,为制备扫描电镜样品提供了一条简易而快速的制备方法,现将制备方法报道如下.
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改良的锇酸脂肪染色法
锇酸亦称四氧化锇,是一种金属氧化物,为无色结晶体,价格昂贵.市售包装有0.5g和1g等,均以玻璃管密封.