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体外建立及扫描电镜观察腹膜透析留置管大肠杆菌生物被膜模型
细菌生物被膜(biofilm,BF)是指细菌吸附于惰性物体如生物医学材料或机体黏膜表面后,分泌多糖基质将细菌体克隆聚集缠绕其中形成的膜样物.腹膜透析(PD)是慢性肾功能衰竭尿毒症期患者肾脏替代治疗的方式之一.腹膜炎是腹膜透析患者的严重并发症之一,大肠埃希菌是导致腹膜炎的常见G-菌.细菌从腹膜透析的导管出口部位侵入并可在透析液中繁殖能够在腹透管上成长为小菌落生物膜,腹膜透析病人中这些细菌及菌膜与反复发作性腹膜炎可能有关.本研究拟以腹膜透析管为载体,建立体外静置BF模型;然后采用银染法鉴定,扫描电镜观察BF形成能力,为寻找大肠杆菌BF相关感染的治疗方法并提供临床参考,以便制定出相应防治策略对于改善腹膜透析患者预后具有重要意义.
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密度感应对铜绿假单胞菌运动能力及其生物被膜形成调控的研究
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aerugu-nosa,P.a)生物被膜(BF)的形成主要受密度感应(quorum sensing,QS)系统调控,尤其在BF形成早期,QS对P.a泳动、丛集运动和颤搐运动起着非常重要的作用.因此本研究以P.a野生型中PAOI菌株及其OS相关基因缺失菌株为实验菌株,检测其泳动、丛集和颤搐运动,测量菌落生长形成的云雾状区域半径,观察菌落生长形态.以无菌1 cm×1 cm聚氯乙烯气管导管为载体,建立体外P.a静止BF模型,扫描电镜观察载体表面BF.采用SPSS13.0软件包进行分析,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义.
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应用扫描电镜观察全合一营养液的稳定性
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小鼠骨髓树突状细胞改良培养及体外生物学特性的比较
目的:探讨小鼠骨髓树突状细胞体外生物学特性及用自体腹膜培养基代替细胞因子刺激树突状细胞体外生长的可能性.方法:无菌取小鼠的骨髓分离、培养DC前体,分别以小鼠腹膜分泌液和重组细胞因子mGM-CSF,mIL-4刺激培养使DC前体转化为DC,再用混合淋巴细胞增生反应(MLR)、细胞免疫组织化学染色及光镜、扫描电镜观察二种DC生物特性及免疫活性的差异.结果:培养6-8 d,二种方法培养的骨髓DC(BM-DC)均有大量细胞从集落中释放,并呈成熟状态,重组mGM-CSF,mIL-4刺激培养的DC得率稍高(6×106)于腹膜培养组(3×106),但无显著性差异;培养7 d BM-DC的B7-2表达较高,呈强阳性,混合淋巴细胞反应(MLR)中均表现出有强烈刺激同种T细胞增生的能力;尤以重组mGM-CSF,mIL-4组明显高于腹膜培养组,未加任何处理的空白对照组中DC前体具有非成熟DC的形态及功能特征,且无刺激同种T细胞增生的能力.结论:实验结果提示用自体腹膜培养基代替细胞因子刺激树突状细胞体外生长可获得一定数量的树突状细胞并具有相应的生物学特性及功能,基本能满足实验研究的需要,为基层单位开展树突状细胞的研究提供了可能性.
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生物被膜克雷伯杆菌β-内酰胺酶活性的检测
近年来研究证明克雷伯杆菌易形成生物被膜(BF)[1],关于生物被膜克雷伯杆菌产β-内酰胺酶活性的研究国内外尚未见到报道。本实验检测浮游克雷伯杆菌、生物被膜克雷伯杆菌及亚胺培南诱导后生物被膜克雷伯杆菌产β-内酰胺酶的能力,探讨生物被膜中克雷伯杆菌的耐药机制。 材料与方法材料:抗菌药物:亚胺培南(美国默沙东公司)。试剂:2.5%戊二醛、1%锇酸、枸橼酸铅等,均为国产分析醇。菌株:选取产β-内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌30株(中国医科大学附属第二临床学院细菌室分离)。培养基:胰酶大豆肉汤(TSB,法国BioMerieux公司)。Nitrocefin (英国Oxiod公司)。器材:医用硅胶膜(北京医用硅胶研究所);扫描电镜(S-800 日本Hitachi公司);低温超速离心机(上海安亭公司);可见紫外分光光度计:日本岛津制作所MIB-2000型外接岛津超级恒温水浴槽。方法:(1) 生物被膜的建立:取30株肺炎克雷伯杆菌,经37 ℃孵育24 h,配制成0.5 mol/L菌悬液,将每株菌菌悬液3等份分为3组,A组为浮游克雷伯杆菌,B组及C组菌以硅胶膜为载体,用改进的平板培养法[2]建立生物被膜,标本经固定、脱水、置换、干燥、枸橼酸铅染色等处理后通过扫描电镜观察鉴定[3]。(2) 诱导β-内酰胺酶产生:亚胺培南低抑菌浓度(MIC)的测定,采用标准微量稀释法,其MIC值介于0.07~0.5 mg/L,将1/2 MIC亚胺培南加入C组菌悬液中孵育。(3) β-内酰胺酶粗酶提取液的制备:A、B、C 3组菌孵育至第3天,将细菌硅胶膜及胰酶大豆肉汤在超声水浴震荡(120 W,15 min)。提取的菌悬液于4 ℃ 6 000 r/min离心30 min,弃去上清液,以0.05 mol/L,pH 7.0磷酸钾缓冲液洗涤两次后,将收获的菌体悬浮在同样适量的缓冲液中,用冻融法[4]使细菌菌体破坏,然后以低温2 000 r/min离心60 min,上清液即为粗酶提取液。(4) β-内酰胺酶定性:用Nitrocefin纸片测定。(5) β-内酰胺酶活性测定:以Nitrocefin为底物,在紫外分光光度计波长482 nm处进行时间扫描测定酶活性。(6) 统计分析:对A组和B组、A组和C组、B组和C组数据进行配对t检验,分析差异的显著性。
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银汞合金粘结修复界面的扫描电镜观察和能谱分析
银汞合金粘结性修复(bonded amalgam restoration,BAR)是将银汞合金良好的机械性能、保存性窝洞制备原则和粘结剂的边缘粘结封闭性3者相结合,以弥补银汞修复体微渗漏和粘结性不足的新技术.我们的研究目的是了解BAR修复体2界面中银汞-粘结剂界面(A界面)的粘结状况,以期为临床应用提供理论依据.
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离体甲的甲真菌病模型研究
甲真菌病是真菌侵犯甲板引起的感染性疾病.发病率为2%~13%,是常见的甲疾病.甲癣则是皮肤癣菌侵犯甲板引起的甲病.为探讨不同真菌在甲真菌病中的致病作用及凝集素组织化学染色法对判断甲真菌病病原菌的意义,特制备离体甲的甲真菌病模型,进行组织病理检查、扫描电镜观察,并研究甲板中真菌与4种不同凝集素的结合形式.
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喉癌相关研究
1.喉癌生物学特性与预后研究:在全喉标本连续切片的基础上结合临床随访,以生存率为目标对肿瘤形态,分化程度,生长方式,淋巴细胞浸润程度,颈淋巴结转移及手术方式等进行了多元回归分析和扫描电镜观察.其中微观形态的肿瘤表面形态分类,周边生长方式分型,周边淋巴细胞浸润分度等均有创新性.电镜观察的肿瘤周边淋巴细胞触手现象为判定淋巴细胞免疫活性奠定了微观形态学基础.
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三种窝沟封闭剂渗透性的扫描电镜研究
用扫描电镜观察Delton、Ultraseal XT plus、Comcise三种窝沟封闭剂的渗透性.选用美国登士柏公司的Delton、好时利公司的Ultraseal、美国Comcise(3m Dental Products,USA)封闭剂.为考察几种封闭剂渗透性的差异,我们进行了扫描电镜研究,现将结果报告如下.
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探讨全营养混合液在基层医院应用的可能性
目的 通过用扫描电镜结合肉眼观察评价脂肪乳剂在全营养混合液3 d内不同温度下的稳定性.方法 在本院洁净室内按操作规范及配制流程分别配制30个PVC 3L袋的全静脉营养液,分别存放于4℃、室温(<25℃)、高温(40℃)下,在6 h、24 h、48 h分别检测电镜并测其渗透压和pH值.结果 ①肉眼观察48 h内3种不同温度下均无脂肪分层和凝集现象;②扫描电镜观察脂肪颗粒在48 h内3中不同温度下亦无明显增大或聚集;③测定的渗透压和pH值在3种不同温度下随时间变化明显显著差异.结论 按操作规范正确配制的全静脉营养液是稳定的,可以应用于临床.
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臭冷杉的组织学研究
目的通过对臭冷杉的叶和小枝进行组织学研究,为正确用药提供鉴定依据.方法扫描电镜观察Jeffrey液处理后的叶表皮内表面及干燥小枝木材;光镜观察幼茎的横切、叶的横切及小枝木材的徒手切.结果发现臭冷杉叶气孔下陷,副卫细胞4个.下皮层细胞只有上、下表皮的中段有一层分布.内皮层无凯氏加厚;叶肉叶树脂道2个,中生;维管束2.木材中无树脂道;木射线完全由薄壁细胞组成,细胞端壁和水平壁具节状加厚;交叉场纹孔松木型.结论以上结果可作为臭冷杉药材的鉴别依据.
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严重缺碘地区家兔耳蜗螺旋器电镜观察
为了研究在胚胎期受母体严重缺碘影响的动物内耳螺旋器的发育状况,我们对严重缺碘地区的家兔耳蜗进行扫描电镜观察.结果报道如下.
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杜仲胶作为根管充填材料的可行性
背景:杜仲胶具有较好的热塑性、流动性、黏结性及抗菌性,目前尚无将其用于根管充填材料的研究.目的:比较不同含量气相纳米二氧化硅对以杜仲胶为基质复合材料力学性能的影响,以及充填根管后的效果观察.方法:在硫酸钡(20%)及纳米羟基磷灰石(10%)质量分数恒定的情况下,分别加入不同质量分数的杜仲胶与气相纳米二氧化硅(40%与15%,45%与20%,50%与25%,55%与30%),制备4组根管填充复合材料,以纯杜仲胶作为空白对照,检测5组材料的硬度、拉伸强度及断裂伸长率.采用ObturaⅡ技术将4组复合材料与杜仲胶、古塔胶颗粒充填到新鲜拔出的前磨牙根管中,X射线片及扫描电镜观察根管充填效果.结果与结论:随着气相纳米二氧化硅含量的增加,杜仲胶复合材料的硬度呈上升趋势,拉伸强度呈先增大后减小的趋势,断裂伸长率呈降低趋势.杜仲胶组对 X 射线透射,无法显示充填材料的影像,4 组复合材料均具有一定的X射线阻射性,显示复合材料均充填至根管中且充填均匀,充填物内无气泡,与根管内壁接触良好,充填效果满意;扫描电镜显示,杜仲胶组材料表面指状突起多长,随着气相纳米二氧化硅含量的增加,4 组复合材料表面的指状突起长度呈降低趋势.表明杜仲胶复合材料在热流动状态下可注入根管内达到较好的封闭效果.
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生物反应器内工程化软骨的三维动态构建
组织工程化软骨的体外构建,可克服传统治疗方法的一些不足,被认为是一种有望治疗关节软骨缺损的有效途径。文章旨在探究人源脂肪干细胞结合壳聚糖/明胶水凝胶支架,在体外动态环境下构建工程化软骨的优势。实验制备了壳聚糖/明胶水凝胶支架,对其理化性能进行了检测,后将人源脂肪干细胞作为种子细胞,接种在支架上进行软骨的诱导培养,其中,选用转瓶作为动态的培养环境。分别通过组织学染色、共聚焦显微镜观察、扫描电镜观察等考察了软骨的构建情况,结果显示壳聚糖/明胶支架的平均孔径为(118.25±19.51)μm,孔隙率为(82.60±2.34)%,溶胀率为(361.28±0.47)%,弹性模量为(61.2±0.16)kPa,具有良好生物相容性。动态载支架-转瓶内水凝胶支架中细胞蛋白多糖的表达更显著,细胞生长分布更加均匀,分泌细胞外基质基本填满整个支架,可促进人源脂肪干细胞的软骨分化和体外软骨的构建。
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银染法鉴定细菌生物被膜
细菌生物被膜的主要成分是多糖蛋白复合物,Costerton等人[1]在70年代通过扫描电镜观察到了细菌生物被膜的存在,但是通过钌红等染色后进行电镜观察,操作复杂,周期长,不易推广.近年来,临床微生物学研究工作者开始探索采用染料对细菌胞外糖进行染色,观察细菌生物被膜[2].本实验是通过银染色的方法鉴定细菌生物被膜的存在,该方法简单、可靠,现将报道如下.
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考尔-爱克斯诺小体在卵泡发育中的分布
考尔-爱克斯诺小体(Call-Exner body)存在于一定物种范围的卵巢卵泡中,包括人和兔,牛的腔前卵泡和小腔卵泡中也有类似结构[1].研究显示考尔-爱克斯诺小体出现于卵泡正常发育的早期阶段,卵泡发育越晚,考尔-爱克斯诺小体越多[2].其也存在于人的卵巢肿瘤中[3-4],认为卵巢颗粒细胞肿瘤与考尔-爱克斯诺小体的分化有关,同时,考尔-爱克斯诺小体也是检测颗粒细胞肿瘤的发展,估计预后的因素之一[5].狗的颗粒细胞肿瘤中也可见考尔-爱克斯诺小体[6].小鼠腔前卵泡常被用作体外成熟的模型,但在其发育过程中对考尔-爱克斯诺小体的观察较少,扫描电镜观察未见报道.
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扫描电镜观察大鼠舌乳头结缔组织芯的形态
随着科学技术的发展,对舌的研究已从临床的肉眼观察进入到运用组织学、组织化学、血流动力学、分子生物学、免疫学等多种实验技术进行细胞、亚细胞水平的研究[1-2],但对舌乳头结缔组织芯(connective tissue cores, CTC)的研究很少,只有少数国外学者进行过报道,本研究用扫描电镜观察舌乳头结缔组织芯.
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紫外线照射后日本血吸虫尾蚴的扫描电镜观察
从超微结构水平观察紫外线照射对尾蚴的影响,尚未见报道.本实验使用扫描电镜旨在探讨日本血吸虫尾蚴经紫外线照射后发生的形态变化,进一步探讨减毒尾蚴活疫苗的免疫机制.
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非甾体抗炎药相关性肠损伤扫描电镜观察与肠源性内毒素血症的关系
近年发现,非甾体抗炎药(non-steroidal antiinflammatory drug,NSAID)常可致小肠溃疡、穿孔、狭窄、隔膜样改变、小肠绒毛缩短、黏膜变薄,但其机制仍不明确[1-2].本研究采用扫描电镜观察黏膜超微结构变化,结合黏膜通透性改变,旨在阐明肠黏膜物理屏障完整性在肠源性内毒素血症发生中的作用.
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热水致大鼠萎缩性胃炎胃黏膜扫描电镜观察
慢性萎缩性胃炎(CAG)与胃癌的发生密切相关,世界卫生组织(WHO)将CAG定为癌前状态[1],患有CAG者发生胃癌的危险性明显增加.本研究以热水为单一因素,通过对胃黏膜进行光镜及扫描电镜观察,证实热水可致黏膜损伤并形成CAG.