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探索重组干扰素市场营销新模式
重组干扰素是运用基因工程技术生产的低分子量蛋白质,属重组细胞因子类药物,是一种广谱抗病毒和抗肿瘤药物,国际上已广泛应用于慢性病毒性肝炎、尖锐湿疣、疱疹、宫颈炎和结膜炎等病毒性疾病的治疗.
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小鼠骨髓树突状细胞改良培养及体外生物学特性的比较
目的:探讨小鼠骨髓树突状细胞体外生物学特性及用自体腹膜培养基代替细胞因子刺激树突状细胞体外生长的可能性.方法:无菌取小鼠的骨髓分离、培养DC前体,分别以小鼠腹膜分泌液和重组细胞因子mGM-CSF,mIL-4刺激培养使DC前体转化为DC,再用混合淋巴细胞增生反应(MLR)、细胞免疫组织化学染色及光镜、扫描电镜观察二种DC生物特性及免疫活性的差异.结果:培养6-8 d,二种方法培养的骨髓DC(BM-DC)均有大量细胞从集落中释放,并呈成熟状态,重组mGM-CSF,mIL-4刺激培养的DC得率稍高(6×106)于腹膜培养组(3×106),但无显著性差异;培养7 d BM-DC的B7-2表达较高,呈强阳性,混合淋巴细胞反应(MLR)中均表现出有强烈刺激同种T细胞增生的能力;尤以重组mGM-CSF,mIL-4组明显高于腹膜培养组,未加任何处理的空白对照组中DC前体具有非成熟DC的形态及功能特征,且无刺激同种T细胞增生的能力.结论:实验结果提示用自体腹膜培养基代替细胞因子刺激树突状细胞体外生长可获得一定数量的树突状细胞并具有相应的生物学特性及功能,基本能满足实验研究的需要,为基层单位开展树突状细胞的研究提供了可能性.
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重组细胞因子引起的皮肤型药物不良反应
重组人细胞因子引起的皮肤型药物不良反应主要有红斑皮炎样药疹、血清病样药疹、严重型药,和由他加重的原发皮肤损害.和其他化学合成类药物不同的是,大多数细胞因子引起的药物不良反应和其本身的生物学活性有关.随着基因工程研究的广泛开展和重组细胞因子在临床的大量应用,临床上还会遇到许多不可预测的不良反应,尚需临床医师的长期观察和总结.
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诱导成骨的局部基因治疗
骨缺损严重或伴严重软组织创伤时,骨折端多有供血不良,骨折不愈合的机率很大[1].临床上治疗这类复杂骨折主要是针对骨折不愈合,通常要进行植骨,而植骨具有明显的缺点[2,3].骨髓细胞移植有诱导成骨作用,但易从注射部位扩散[4].细胞因子如骨形成蛋白(BMP-2)、生长转化因子(TGF)具有骨诱导能力,重组BMP-2植入骨缺损区能促进骨折愈合[5,6],但重组细胞因子不能耐受37℃的体内环境,30min左右即被代谢,骨诱导时间短[7].
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应用ELISA测定重组细胞因子中残余大肠杆菌菌体蛋白含量
目的建立灵敏度高,重复性好的残余宿主菌E.coli菌体蛋白含量的测定方法.方法电泳显示5株大肠杆菌DH52、JM103、JM105、N8430和HB101的蛋白质组分各不相同,但均可被免疫印迹显色,说明免抗E.coli.K12,C600抗体包括了其主要菌体蛋白的抗体,因此,用ELISA检测相应的菌体蛋白含量.结果优化后的ELISA对DHa、JM103、JM105和HB101检测灵敏度均达到10ng/ml.用混合菌体蛋白作为E.coli菌体蛋白通用标准,其灵敏度达到7.8ng/ml,含量在7.8~250ng/ml范围内,一次方程(y=a+bx)线性良好(r>0.990);在7.8~1 000ng/ml范围内,二次方程(y=a+bx+c2)线性良好(r>0.990).变异系数小于14%(n=4).应用该法对国内外重组产品进行测定,发现不同厂家不同产品其菌体蛋白含量各不相同.8种细胞因子共57批,菌体蛋白含量大于1%的3批,占5.3%;大于0.1%的9批,占15.8%;大于0.01%的28批占49.1%.说明还有不少厂家其重组产品纯化工艺有待进一步提高.结论本方法灵敏度高,重复性好,可用于重组产品中大肠杆菌残余菌体蛋白的测定.
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010 以减毒沙门菌将重组细胞因子导向免疫系统的新免疫疗法
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细胞因子制剂相关的皮肤不良反应
细胞因子(cytokine)是细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物质的统称.在很多情况下,各种免疫细胞之间的相互作用是由细胞因子介导的,它们在机体免疫反应中的作用相当广泛而复杂.近10年来随着重组细胞因子技术的发展,重组细胞因子已经成功用于临床,成为生物应答调节剂(biological response modifier,BRM)中的一类重要的治疗制剂[1].目前已经上市、应用于临床的产品有红细胞生成素(EPO)、干扰素(IFN)、粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)、粒细胞-单核细胞集落刺激因子(granulocytemacrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、白介素(interleukin,IL)2、IL-1等.而更多的产品正在进行临床前的应用研究(表1).
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BMP基因治疗与骨修复
长期以来,在骨科领域存在众多的难题中,骨修复一直困扰着人们,这突出表现在骨不愈合、骨缺损等疾患的治疗上.具有成骨作用的细胞因子的发现和研究为骨修复提供了一种有效的治疗方法,并成为有希望的治疗方法之一.但是目前使用的细胞因子加入载体的方法存在一定的失败率,其主要原因为细胞因子生物周期短,重组细胞因子生物活性差及缺乏适合的载体引起.因此,人们开始研究细胞因子其它使用途径以促进骨修复的效果.其中骨形态发生蛋白(BMP)族是研究比较多的一类细胞因子.
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创面持续负压引流+重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用溶液冲管在慢性溃疡创面修复中的应用研究
目的 研究创面持续负压引流(NPWT)+重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用溶液(rb-bFGF)冲管在慢性溃疡创面修复中的应用价值.方法 选取我院2014年2月至2016年2月慢性溃疡创面患者60例,根据治疗措施的差异,将患者随机抽签分为NPWT组和NPWT+rb-bFGF组,每组30例.比较两组患者不同治疗阶段创面肉芽成熟度及创面修复时间、II期手术处理时间、治疗后创面面积、换药次数、总住院时间等临床指标.结果 治疗第9 d和第15 d时NPWT+rb-bFGF组肉芽(++)(+++)成熟率分别为50%、73.33%,较NPWT组26.67%、36.67%显著较高(P<0.05);NPWT+rb-bFGF组患者创面修复时间、II期手术处理时间、治疗后创面面积、换药次数、总住院时间较NPWT组显著较短(P<0.05).结论 NPWT+rb-bFGF治疗慢性溃疡创面修复疗效显著,可有效促进肉芽生长,明显缩短创面愈合时间,值得临床应用推广.
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细胞因子在皮肤病治疗中的现状和展望
细胞因子(CK)是由活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的、介导和调节免疫、炎症反应的小分子多肽.它包括由淋巴细胞产生的淋巴因子和由单核/巨噬细胞产生的单核因子等.细胞因子种类繁多,生物学作用各异,按功效大致可分为6类:白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、转化生长因子(TGF)和趋化性细胞因子.很多细胞间的相互作用是通过细胞因子介导的,细胞因子广泛参与免疫调节和炎症反应,在多种疾病发病机制中起重要作用.因此,临床上应用细胞因子治疗多种疾病具有可行性,尤其近年来重组细胞因子和相关制剂的问世,更使细胞因子疗法得到很大的发展.
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IL2/IL2R系统介导重组IL2-毒素融合蛋白靶向杀伤高表达IL2R的恶性血液病细胞
恶性血液病的靶向杀伤治疗已成为必然的发展趋势,利用细胞因子与其受体的特异性结合来导向传递重组细胞因子-毒素融合蛋白,以达到特异性杀伤高表达相应细胞因子受体恶性血液病细胞的新策略标志着肿瘤导向杀伤研究的新进展之一.
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我国生物技术与现代生物医药产业
生物技术在新药研发领域为瞩目我国自1986年实施"863"计划以来,生物技术药物的研究、开发和产业化获得了飞速发展.生物技术药物(以下简称生物药)包括了细胞因子、重组蛋白质药物、抗体、疫苗和寡核苷酸药物等,主要用于防治肿瘤、心血管疾病、传染病、哮喘、糖尿病、遗传病、心脑血管病和类风湿性关节炎等疑难杂症.这些生物技术药物具体包括:重组激素类药物(胰岛素、生长激素)、重组细胞因子药物(干扰素、生长因子、白细胞介素)、重组溶血栓药物(纤溶酶原、链激酶)、人血液代用品、治疗性抗体(多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体)、重组可溶性受体和粘附分子药物、反义寡核苷酸药物、基因药物、基因工程病毒疫苗、基因工程菌苗、基因工程寄生虫疫苗及治疗性疫苗.
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细胞因子疗法在肺癌治疗中的应用
肺癌是对人类健康与生命危害大的恶性肿瘤之一。目前其治疗方法主要是手术、化疗、放疗相结合的综合治疗,但治疗效果并不令人满意。随着肿瘤免疫学,分子生物学和基因工程技术的飞速发展,细胞因子疗法作为抗肿瘤的分子治疗学手段受到国内外学者的广泛关注,在肿瘤的治疗领域中具有良好的前景。本文就干扰素、白介素Ⅱ、肿瘤坏死因子和集落刺激因子在肺癌治疗中的应用分别作一综述,供临床参考。 细胞因子是一大类具有多种生物效应的小分子多肽类物质,在调节缩主抗肿瘤免疫机制中发挥了重要作用。现已有二十余种重组细胞因子进入实验研究和临床试用阶段,其中,干扰素、白介素Ⅱ、肿瘤坏死因子的抗肿瘤作用较明确,而集落刺激因子在肿瘤患者支持治疗中发挥了重要作用[1]。
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应用荧光法测定重组细胞因子中残余DNA含量
目的:建立荧光微量DNA含量测定方法,用于重组细胞因子的质量控制.方法:应用PicoGreen荧光试剂与DNA结合能产生可激发荧光的复合物、再用荧光酶标仪对复合物进行检测并用SOFTmaxPRO分析软件进行分析.结果:该荧光法DNA检测灵敏度达到312pg·mL-1,DNA含量在0.31~80ng·mL-1范围内线性良好,r≥0.996.应用该法对7种重组细胞因子共13批制品的外源DNA含量进行测定,结果表明:除重组人BMP和IL~11以外,其它重组细胞因子DNA含量均小于10ng·剂量-1,与地高辛标记的DNA杂交试验结果基本一致.结论:该方法具有简便、快速、自动化程度高等特点,可用于重组细胞因子残余外源DNA含量的常规检定.