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比例法测定结核菌药敏试验中菌液浓度的研究
为了探讨比例法测定结核菌药敏试验中结核菌悬液的佳实验浓度,采用国际推行的比例法,用10-2 mg/ml、10-3 mg/ml、10-4 mg/ml、10-5 mg/ml、10-6 mg/ml,5个浓度进行试验,并与国际推行的比例法进行比较.结果用10-2 mg/ml、10-4 mg/ml、接种培养基,其药敏试验结果成功率高;基础培养基上结核菌生长良好,便于结果判断;结果报告及时;与国际推行的比例法进行相比较,药敏试验结果差异性不显著(P>0.05).试验结果表明,比例法测定结核菌药敏试验时,佳菌液浓度是10-2 mg/ml、10-4 mg/ml.
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四种抗菌洗液杀菌效果的比较
目的 了解市售含中草药类抗菌洗液杀菌效果.方法 采用悬液定量杀菌试验方法进行了随机抽样检测.结果 醋酸氯己定含量为125 mg/L和702 mg/L分别与中草药组成的肤阴洁抗菌洗液和洁阴舒洗液对大肠杆菌作用2 min,杀灭率达到100%;对金黄色葡萄球菌需要作用5和10 min,杀灭率可达到100%.舒敛爽抗菌洗液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和淋病球菌作用5 min,杀灭率均可达到100%.妇阴康洗液对4种试验菌杀菌效果均比较差.结论 4种含中草药的抗菌洗液均具有一定的杀菌作用,但其杀菌作用与含氯己定及其浓度没有直接关系.
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pH对强化酸性戊二醛杀灭细菌芽胞效果影响的试验观察
用碳酸氢钠调节LJ-强化酸性戊二醛(pH 4.5)溶液pH值,观察其在不同pH条件下对枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽胞的杀灭效果.试验时,将0.5 ml芽胞悬液与4.5 ml消毒液(对照为磷酸盐缓冲液)混匀.作用后取0.5 ml菌药混合液,加入盛有4.5 ml中和剂(含1%甘氨酸、0.5%吐温80的磷酸盐缓冲液)的试管中.中和作用10 min,作活菌计数.样本于37℃培养48 h,计数菌落数,计算杀灭率.
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氯化磷酸三钠对布片上与悬液中细菌的杀灭效果
将氯化磷酸三钠(有效氯含量为3.44%)溶于无菌蒸馏水中制成消毒液.用其对悬液中或染于脱脂布片(10 mm×10 mm)上的金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)作用后(阳性对照以无菌蒸馏水代替消毒液),经中和剂(含0.2%卵磷脂、2.0%吐温80和0.3%硫代硫酸钠的溶液)中和残余消毒剂.随后作活菌计数,计算杀灭率.
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CMOF烟雾剂对细菌气溶胶消毒效果的实验观察
CMOF烟雾剂是以混合甲酚为主要杀菌成分的棕黄色油液(酸值为2.8×10-3),经6HY-25型烟雾机喷出的烟雾.对其消毒空气的效果进行了实验观察.试验时,用超低容量电动喷雾器向约4m3气雾室内喷金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)或大肠杆菌(8099)菌悬液5min,形成雾粒质量中值直径约为10μm的气溶胶.
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次氯酸钠对乙型肝炎表面抗原的破坏作用
用双博XD-150型消毒水雾发生器电解含5 g食盐的400 ml水,生成次氯酸钠溶液(有效氯含量为810 mg/L,pH值为8.68).用含5%小牛血清的0.01 mol/LPBS,将纯化HBsAg(北京北方生物技术研究所提供)稀释至含量为50 000 ng/ml的HBsAg悬液.
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臭氧水溶液杀菌效果的试验观察
向臭氧水发生器注入自来水,通电5min,可产生水温24~26℃、含臭氧3.0~5.0 mg/L的臭氧水溶液。将其稀释为含臭氧0.4 mg/L的溶液用于试验。试验时,将大肠杆菌(8099)和含1%蛋白胨的金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)悬液0.5 ml与消毒液(阳性对照为磷酸盐缓冲液)4.5 ml混匀。作用至预定时间,取0.5 ml菌药混合液,加入4.5 ml中和剂(含0.5%硫代硫酸钠的磷酸盐缓冲液)中,混匀。中和作用10 min,作活菌计数,计算杀灭率。
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中纺AB抗菌防臭纤维布抑菌作用试验观察
中纺AB抗菌防臭纤维为聚丙烯晴的一种改性纤维,是在聚丙烯晴高分子链上接以2个带正电荷的抗菌基团而成.该抗菌基团将带负电荷的细菌包围而起到抑菌作用.检测其抑菌效果时,将大肠杆菌(ATCC25922)或金黄色葡萄球菌(ATCC 1844)悬液100μl滴加在置于平皿中该抗菌纤维布片(1.0 cm×3.0 cm,对照为不含抗菌基团的同类布片)上.作用一定时间,用磷酸盐缓冲液5 ml洗脱布片上的菌.取洗脱液作活菌计数,计算抑菌率.
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武汉市售餐具消毒柜现状调查
对武汉三镇十大商场销售的餐具消毒柜查验卫生许可证,选择不同品牌餐具消毒柜进行对HBsAg抗原性破坏效果的试验观察.试验用染HBsAg载体进行,于1.0 cm×1.0 cm玻璃片上,滴染含量为50 μg/mlHBsAg悬液0.02 ml.
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臭氧对水中细菌杀灭效果的试验观察
在实验室,用臭氧水发生器(万瑞电子仪器厂产)进行了臭氧对水中细菌杀灭效果的试验观察.试验时,将大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)或枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽胞的悬液0.5ml加入盛有4.5ml臭氧水(对照为含1% 蛋白胨的磷酸盐缓冲液)的试管中,混匀.
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三种消毒剂的杀菌效果及适用性比较
对本院常用的消毒剂2%(即20g/L)碱性复方戊二醛(含亚硝酸钠)、过氧乙酸及金星消毒剂(含次氯酸钠,十二烷基苯磺酸钠,含有效氯60 000 mg/L)进行了比较.采用悬液定量杀菌试验检测其杀灭微生物效果.将含10 g/L蛋白胨的枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽胞悬液0.5ml与4.5 ml消毒液混匀(阳性对照为磷酸盐缓冲液).作用到预定时间,取0.5 ml菌药混合液,加入4.5 ml中和剂(复方戊二醛用含10 g/L甘氨酸的磷酸盐缓冲液,过氧乙酸、金星消毒剂用含10 g/L硫代硫酸钠的磷酸盐缓冲液)中,混匀.中和作用10 min,进行活菌计数,计算杀灭率.对乙型肝炎表面抗原(HBsAg),取其含量为10μg/ml并含体积分数6%小牛血清的悬液0.1 ml,与0.4 ml消毒液混匀.作用到规定时间,再加0.5 ml中和剂.
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人用狂犬病疫苗的过去、现在和未来
早在1885年,路易*巴斯德证明狂犬病毒能通过兔神经系统重复传代而减毒,并制备出有效的疫苗首次用于人体免疫,从而开创了人用狂犬病疫苗的发展史。人用狂犬病疫苗的发展经历了从传统的神经组织疫苗到现行的以组织培养疫苗为主的过程,并且正在应用现代生物技术不断改进和发展。 一、早期使用的传统疫苗[1-3] 1885年巴斯德尝试用感染狂犬病毒固定毒的兔脊髓干燥后制成减毒活病毒,给一名9岁男孩进行13次连续、毒力剂量逐渐增加的暴露后处理获得了成功。1908年Fermi通过在室温下用1%酚处理脑组织改进了巴斯德的方法,但悬液中仍有高达100 MLD50的残余毒力。1911年Semple在此基础上作了进一步改进,将脑组织悬液于37℃用酚固定、灭活,制备了无毒性的Semple疫苗。1925年Hempt通过补加乙醚处理,进一步确保了疫苗的无毒性。使用Semple疫苗后严重的神经麻痹事故的发生率在1/500~1/2 000间,这种疫苗目前在发展中国家仍在广泛使用。我国自1949年起,一直使用由羊脑制备的Semple疫苗,直至1980年停止使用,由原代地鼠肾细胞疫苗取代。
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感染与精子膜WGA受体的相关性
精子膜WGA受体与受精、获能和胚胎发育密切相关,其含量的下降可影响男性生育能力.解脲脲原体感染是导致男性不育的因素之一.研究发现解脲脲原子核体感染引起的精子变化与将WGA加入精子悬液后精子的形态改变及凝集十分相似.
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接种流行性感冒灭活疫苗引起过敏性紫癜1例
某女,13岁,非常住人口儿童,2003年2月14日10时30分,由和田县疾病预防控制中心(CDC)预防接种门诊专业护士,在左上臂三角肌肌内注射剂量为0.5ml的流行性感冒(流感)灭活疫苗(全病毒颗粒悬液制品,由地区CDC购进,长春生物制品研究所生产,批号:20020601,有效期:2003-09-02).
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国内外狂犬病毒实验室检测与诊断技术的研究及进展
1 狂犬病诊断实验室的安全措施在一般的实验室条件,技术人员有暴露于以下传染的危险:--野生狂犬病毒(即街毒),当实验室对接收到的动物标本进行尸体解剖或对标本进行加工(悬液制备,离心)等,这一类操作是非常危险的,必须在P3以上条件的专业实验室中进行.
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干酵母悬液对肺炎链球菌荚膜恢复的影响
荚膜是某些细菌合成并分泌于菌体外周围堆积甚厚的黏液性多糖或多肽物质.具有黏附作用、抗吞噬、抗溶菌酶、抗补体、抗干燥及在营养缺乏时还可作为营养物质而被吸收等多种功能.其抗原性可用于细菌鉴别和分型.肺炎链球菌在机体内易形成荚膜,而在普通人工培养基上荚膜容易丢失.因环境因素丢失的肺炎链球菌荚膜,可通过对宿主动物接种或用高营养培养基传代使之恢复.为有效的促使肺炎链球菌丢失荚膜恢复,以利于保证实验教学和科研工作的开展,我们用2%干酵母菌悬液1ml于小鼠腹腔注射2 h后,再对该鼠进行丢失荚膜菌接种,发现接种的小鼠均在4 d后死亡,将死亡小鼠肝脏涂片镜检,可见其肺炎链球菌丢失的荚膜得到有效恢复.
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产孢丝状真菌NCCLS药敏试验方法的应用
美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)于1997年推出了关于酵母菌的液体培养基稀释(多量法与微量法)抗真菌药敏试验方案M27-A,建立了被众多实验室认同的重复性好、准确性较高的标准化体外药敏试验方法。但由于丝状真菌本身的诸多特点如产孢条件难以控制、接种量难以精确量化、孵育时间长等,使其试验方法标准化具有一定难度。近年来NCCLS分会成员以M27-A的微量法为基础进行了多中心广泛深入研究[1,2],于1998年提出了《产孢丝状真菌的液基稀释抗真菌药敏试验参考方案》(M38-P)。该方案在提出了一些建设性意见的同时,重申了多量法与微量法的一致性。现将其方法简介如下。 一、材料和方法 1.抗真菌药物:测试用药物包括氟康唑(FCZ),5-氟胞啶(5-FC)、酮康唑(KCZ)、伊曲康唑(ICZ)和两性霉素B(AmB)。药物来源、贮备液的制备等同M-27方案[3]。 2.被检测的真菌:本方案主要针对常见侵袭性真菌感染的菌种:曲霉、镰刀霉、根霉,波氏假阿利什霉及申克孢子丝菌的菌丝相。不包括其他非产孢丝状真菌,也不适应于双相真菌的酵母相。 3.培养基:建议应用RPMI-1640培养基,配制方法要求同M27-A方案。 4.真菌接种液的制备:(1)为保证受试菌的纯度及活性,需在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上35℃培养7 d或35℃培养48~72 h后,转至25~28℃至7 d(镰刀菌)。(2)取1 ml无菌0.85%盐水加入培养7 d的培养皿中,用巴氏吸管轻轻抽吸,制备菌悬液(加入1滴吐温20将有利于曲霉的接种),将菌悬液吸至无菌试管中,静置3~5 min后,取上部匀质液体(含孢子或孢子囊孢子和菌丝片断),在振荡器上振荡15 s。(3)用分光光度计调整菌悬液浓度,波长530 nm,A值曲霉、申克孢子丝菌0.09~0.11,镰刀霉、波氏假阿利什霉及根霉0.15~0.17。(4)将上述菌悬液用RPMI-1640稀释50倍得2倍终浓度(0.4~5×104)的菌悬液备用。(5)为保证试验准确性应做菌落计数,取0.01 ml终浓度菌悬液接种于改良的沙氏萄葡糖琼脂培养基的平皿中(28~30℃),每天观察并计数肉眼可见的真菌菌落(尤其是对于镰刀菌),孵育时间为24 h以内(镰刀菌)至5 d(波氏霉)。 5.液体培养基的接种:在96孔板的1~10列孔中每孔加入0.1 ml的2倍终浓度的菌悬液。每次试验均应包括质控、参考菌株。 6.培养:35℃条件下(不要摇动)大多数菌需46~60 h判定低抑菌浓度(MIC)结果,根霉则需21~26 h,波氏假阿利什霉则需70~74h。
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生物被膜克雷伯杆菌β-内酰胺酶活性的检测
近年来研究证明克雷伯杆菌易形成生物被膜(BF)[1],关于生物被膜克雷伯杆菌产β-内酰胺酶活性的研究国内外尚未见到报道。本实验检测浮游克雷伯杆菌、生物被膜克雷伯杆菌及亚胺培南诱导后生物被膜克雷伯杆菌产β-内酰胺酶的能力,探讨生物被膜中克雷伯杆菌的耐药机制。 材料与方法材料:抗菌药物:亚胺培南(美国默沙东公司)。试剂:2.5%戊二醛、1%锇酸、枸橼酸铅等,均为国产分析醇。菌株:选取产β-内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌30株(中国医科大学附属第二临床学院细菌室分离)。培养基:胰酶大豆肉汤(TSB,法国BioMerieux公司)。Nitrocefin (英国Oxiod公司)。器材:医用硅胶膜(北京医用硅胶研究所);扫描电镜(S-800 日本Hitachi公司);低温超速离心机(上海安亭公司);可见紫外分光光度计:日本岛津制作所MIB-2000型外接岛津超级恒温水浴槽。方法:(1) 生物被膜的建立:取30株肺炎克雷伯杆菌,经37 ℃孵育24 h,配制成0.5 mol/L菌悬液,将每株菌菌悬液3等份分为3组,A组为浮游克雷伯杆菌,B组及C组菌以硅胶膜为载体,用改进的平板培养法[2]建立生物被膜,标本经固定、脱水、置换、干燥、枸橼酸铅染色等处理后通过扫描电镜观察鉴定[3]。(2) 诱导β-内酰胺酶产生:亚胺培南低抑菌浓度(MIC)的测定,采用标准微量稀释法,其MIC值介于0.07~0.5 mg/L,将1/2 MIC亚胺培南加入C组菌悬液中孵育。(3) β-内酰胺酶粗酶提取液的制备:A、B、C 3组菌孵育至第3天,将细菌硅胶膜及胰酶大豆肉汤在超声水浴震荡(120 W,15 min)。提取的菌悬液于4 ℃ 6 000 r/min离心30 min,弃去上清液,以0.05 mol/L,pH 7.0磷酸钾缓冲液洗涤两次后,将收获的菌体悬浮在同样适量的缓冲液中,用冻融法[4]使细菌菌体破坏,然后以低温2 000 r/min离心60 min,上清液即为粗酶提取液。(4) β-内酰胺酶定性:用Nitrocefin纸片测定。(5) β-内酰胺酶活性测定:以Nitrocefin为底物,在紫外分光光度计波长482 nm处进行时间扫描测定酶活性。(6) 统计分析:对A组和B组、A组和C组、B组和C组数据进行配对t检验,分析差异的显著性。
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骨髓悬液对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用
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脂肪源性干细胞的研究进展
2001年Zuk和Zhu[1]首次从人抽脂术中抽取的脂肪组织悬液中分离获得了多向分化干细胞,自此,众多学者致力于脂肪源性干细胞(Adipose-derived stem cells)的研究并取得了重大进展.脂肪源性干细胞不仅与骨髓间充质干细胞形态相似,而且和骨髓间充质干细胞同样具有强大的体外增殖力和多向分化潜能.尤其令人鼓舞的是脂肪组织容易获得,对供区的损伤也小,抽取后残留于供区的脂肪组织仍可扩增.这些特点使脂肪源性干细胞从众多种子细胞中脱颖而出,有望成为理想的种子细胞来源.