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蜂胶酊在抑制腹泻仔猪大肠杆菌的作用研究
本研究对猪场腹泻情况进行调研,对腹泻仔猪粪便进行采样,用麦康凯琼脂培养基(MacC)和伊红美蓝琼脂培养基(EMB)多次实验分离出大肠杆菌,用普通LB液体培养基扩大培养后,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)确定本研究分离菌种的类型,同时进行菌种保存,并利用蜂胶酊对所分离的大肠杆菌进行抑菌实验,结果表明20%浓度的蜂胶酊对大肠杆菌的抑制效果较好.
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培养基反浇法和贴膜法计数结果差异
仪器和材料:菌种
金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉、缺陷假单胞菌
试剂和培养基
胰酪胨大豆肉汤培养基、营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、生理盐水。 -
产深红色素粘质沙雷菌致足外伤感染一例
1.病情男,患者,35岁,右手及双足电击伤后皮肤不愈合2周,在当地医院给予局部换药,抗生素感染等治疗,双足皮肤坏死,为进一步治疗转入我院.右足皮瓣远端内侧有血性渗出约5mL,取渗出物做细菌培养及药敏实验.2.微生物学检查(1)培养:取血性渗出物接种绵羊血培养基,中国蓝玫瑰酸琼脂培养基,培养37℃24小时后血培养基上长出红色菌落,中国蓝上长出红色菌落,48小时后菌落颜色变深变红,显微镜涂片革兰氏阴性杆菌,菌体甚小.(2)生化鉴定及药敏试验仪器:法国梅里埃VITEK32全自动微生物分析仪.
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从HIV阳性者痰液中分离出一株胞内分枝杆菌
近,我们从13例HIV阳性患者痰液中分离出胞内分枝杆菌(Mycobactreium, intracellulare)一株,现报告如下。 一般资料:患者男性,38岁,因吸毒而发现HIV阳性,后到我院就诊并作痰液结核分枝杆菌培养与鉴定和药物敏感性试验,结果培养出胞内分枝杆菌。 细菌培养:痰液用4% NaOH前处理、以pH 6.8 PBS洗涤后接种于BACTEC 12B培养基[1],37℃培养第11天显示阳性,抗酸染色,显微镜下菌体呈分散且长短不一的短杆状。后转种改良罗氏培养基、对硝基苯甲酸培养基(PNB,下同)、噻吩—2—羧酸肼培养基(TCH,下同)和盐酸羟胺培养基(HA,下同),以便按照防痨协会制订的有关规程作进一步生化鉴定[2] 生物状况:菌株为不产色性,能在28~42℃生长,对PNB、TCH和HA(125μg/ml)耐受,能在谷氨酸钠葡萄糖琼脂培养基上生长,在改良罗氏培养基上菌落光滑、湿润、小而扁平、蔓延呈乳酪样。生化反应:耐热触酶、烟酰胺酶、亚硝酸盐还原试验(3天)和芳香硫酸酯酶阳性。烟酸、硝酸盐还原、吐温80水解、尿素酶和β—半乳糖苷酶阴性。根据以上生化反应分析,该菌株应鉴定为:胞内分枝杆菌。为进一步核实,我们以北京市结核病胸部肿瘤研究所提供的标准株胞内分枝杆菌(ATCC 13950)和鸟分枝杆菌(ATCC 25291)作了平行性的生化反应试验,结果胞内分枝杆菌在谷氨酸钠葡萄糖琼脂基上有菌落形成而鸟分枝杆菌未见有生长,其他生物特性和培养条件与我们从患体分离出的菌株生化反应结果一致,从而验证了实验的可靠性。 药物敏感性试验:采用BACTEC法[1],结果显示本菌对异烟肼、链霉素、利福平和乙胺丁醇均耐药,对卡那霉素敏感。 讨论:文献报道[3],自80年代初全球进入HIV/AIDS流行时代以来,人类新老的两大传染病AIDS与结核病相互影响,至90年代前者的流行已成为全球结核病呈上升趋势的主要原因。在HIV/AIDS的分枝杆菌机会感染中,非结核分枝杆菌感染仅次于结核分枝杆菌;在非结核分枝杆菌感染中,又以鸟复合型分枝杆菌为多见,我们从13例HIV阳性标本中分离出一株胞内分枝杆菌就是明证。此外,药敏试验结果显示,非结核分枝杆菌对大多数抗结核药物呈现原始耐受性,给临床治疗带来了极大的困难。因此,对于HIV/AIDS者,分枝杆菌培养、鉴定和药物敏感性试验,是一项必不可少的实验室工作。
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霍乱弧菌噬菌体VP4受体成分的分析
侵袭细菌的噬菌体可以被该菌株的细胞壁提取物所抑制,既细菌的提取物与噬菌体颗粒混合培育后,如果噬菌体与有受体活性的细菌提取物发生不可逆作用,就不能再感染细菌.本项研究选育鞭毛发育良好的霍乱弧菌菌株,利用有鞭毛的细菌在含有0.1%石炭酸琼脂培养基上培养可以失去鞭毛的特性,选育鞭毛发育不良的菌株.提取上述两种菌株的脂多糖和外膜蛋白,并分别与噬菌体VP4钝化作用.通过噬斑计数测定,比较钝化作用的差异,分析VP4的受体成分.
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骨肉瘤干细胞的研究进展
肿瘤干细胞( tumor/cancer stem cells )理论认为是肿瘤组织中存在数量极少、具有干细胞特征的细胞亚群,该细胞亚群具有自我更新和分化潜能,可能是肿瘤启动、生长、转移和复发的根源。肿瘤干细胞可以自我克隆形成子代致瘤性干细胞,同时分化出具有不同表型、非致瘤性的肿瘤细胞,后者经过短暂分化终死亡[1]。40多年前,有学者提出组织特异性干细胞是肿瘤发生的起源细胞[2]。20世纪60年代,人们从体外克隆培养获得的具有不同筛选标志的骨髓瘤细胞中发现仅0.01%~1.00%的肿瘤细胞可以形成克隆集落[3]。1971年,Park 等[4]在体内利用脾脏进行骨髓瘤细胞培养时,其克隆集落形成概率也与之相当。20世纪70年代后期,Humburger等[5]发现只有0.02%~0.10%的肺肿瘤、卵巢肿瘤与神经母细胞瘤细胞具有在体外软琼脂培养基上形成克隆集落的能力,由此提出了“肿瘤干细胞”的概念。
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产孢丝状真菌NCCLS药敏试验方法的应用
美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)于1997年推出了关于酵母菌的液体培养基稀释(多量法与微量法)抗真菌药敏试验方案M27-A,建立了被众多实验室认同的重复性好、准确性较高的标准化体外药敏试验方法。但由于丝状真菌本身的诸多特点如产孢条件难以控制、接种量难以精确量化、孵育时间长等,使其试验方法标准化具有一定难度。近年来NCCLS分会成员以M27-A的微量法为基础进行了多中心广泛深入研究[1,2],于1998年提出了《产孢丝状真菌的液基稀释抗真菌药敏试验参考方案》(M38-P)。该方案在提出了一些建设性意见的同时,重申了多量法与微量法的一致性。现将其方法简介如下。 一、材料和方法 1.抗真菌药物:测试用药物包括氟康唑(FCZ),5-氟胞啶(5-FC)、酮康唑(KCZ)、伊曲康唑(ICZ)和两性霉素B(AmB)。药物来源、贮备液的制备等同M-27方案[3]。 2.被检测的真菌:本方案主要针对常见侵袭性真菌感染的菌种:曲霉、镰刀霉、根霉,波氏假阿利什霉及申克孢子丝菌的菌丝相。不包括其他非产孢丝状真菌,也不适应于双相真菌的酵母相。 3.培养基:建议应用RPMI-1640培养基,配制方法要求同M27-A方案。 4.真菌接种液的制备:(1)为保证受试菌的纯度及活性,需在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上35℃培养7 d或35℃培养48~72 h后,转至25~28℃至7 d(镰刀菌)。(2)取1 ml无菌0.85%盐水加入培养7 d的培养皿中,用巴氏吸管轻轻抽吸,制备菌悬液(加入1滴吐温20将有利于曲霉的接种),将菌悬液吸至无菌试管中,静置3~5 min后,取上部匀质液体(含孢子或孢子囊孢子和菌丝片断),在振荡器上振荡15 s。(3)用分光光度计调整菌悬液浓度,波长530 nm,A值曲霉、申克孢子丝菌0.09~0.11,镰刀霉、波氏假阿利什霉及根霉0.15~0.17。(4)将上述菌悬液用RPMI-1640稀释50倍得2倍终浓度(0.4~5×104)的菌悬液备用。(5)为保证试验准确性应做菌落计数,取0.01 ml终浓度菌悬液接种于改良的沙氏萄葡糖琼脂培养基的平皿中(28~30℃),每天观察并计数肉眼可见的真菌菌落(尤其是对于镰刀菌),孵育时间为24 h以内(镰刀菌)至5 d(波氏霉)。 5.液体培养基的接种:在96孔板的1~10列孔中每孔加入0.1 ml的2倍终浓度的菌悬液。每次试验均应包括质控、参考菌株。 6.培养:35℃条件下(不要摇动)大多数菌需46~60 h判定低抑菌浓度(MIC)结果,根霉则需21~26 h,波氏假阿利什霉则需70~74h。
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ipaH基因扩增诊断志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌
我们应用聚合酶链反应(PCR) 直接检测189份腹泻患者粪便标本的ipaH基因。 一、材料和方法 1.菌株来源:取自我院腹泻患者的粪便标本189份。标准菌株:福氏志贺菌(卫生部质控菌株),大肠埃希菌(EICE),小肠结肠炎耶尔森菌(中国药品生物制品检定所);阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌、伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、不凝集弧菌、绿脓假单胞菌为本室保存菌株。 2.培养基及诊断血清:中国蓝蔷薇色酸琼脂培养基;志贺菌属诊断血清,肠侵袭性大肠埃希菌诊断血清(11种)。
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两种培养基对结核分枝杆菌分离鉴定的比较
与世界总体水平相比,目前我国的结核病发病率仍然较高.为了选择检测效果好、成本低的培养基对结核分枝杆菌进行分离与鉴定,我们采用匡铁吉[1]琼脂培养基与L(o)wenstein[2]培养基对痰标本中的结核分枝杆菌进行分离、鉴定,结果显示匡铁吉琼脂培养基临床效果较优.
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国内外SS琼脂培养基的质量比较
细菌学监测采用的方法一般为病原学方法,即从人体内分离的病原菌,根据不同致病菌的特性,采取不同的培养基进行分离鉴定.因此培养基的质量直接关系到细菌学检测结果的准确性.临床检验常用的SS琼脂培养基是一种强选择性肠道培养基,主要用于沙门氏菌、志贺氏菌的分离,选择性地使这两种菌较好的生长,而对大肠杆菌及其它非肠道致病菌有一定的抑制作用.在<中国药典>上SS属于微生物限度检查法中规定的培养基.为了了解目前国内厂家生产的SS琼脂培养基质量,我们将国内主要4个生产厂家的SS培养基与Difco同类培养基进行了比较,现将结果报告如下.
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皮科门诊浅部真菌病致病性真菌菌种分析
于1996年1月至1997年1月,对在我院皮科门诊真菌镜检阳性的327例患者的皮损予以真菌培养.采用含氯霉素的改良沙堡弱葡萄糖蛋白胨琼脂培养基,置25~27 ℃孵箱培养,4周不生长者为阴性.
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临汾市1997~1999年个体医疗机构消毒监测结果分析
为了解临汾市个体医疗机构消毒工作现状,对我市的个体医疗机构进行消毒监测工作。 用紫外线强度计测定紫外线灯照射强度,以开灯5 min,距灯管中心1 m处,≥70 uW/cm2者为合格。 空气污染监测采用平板暴露法。设东、西、南、北、中5个采样点,将普通琼脂培养基置于距地面1.5 m处,沉降采样5min,37℃培养24 h,计算菌落总数。人流室、产房等空气含菌量<200 CFU/m3,病房、门诊室等<500 CFU/m3者为合格。 使用中的消毒液监测:用无菌吸管吸取0.5 mL消毒液加入4.5 mL中和液内,中和10 min,取1 mL混合液接种于普通琼脂平板,37℃培养3天,计算菌落数,细菌总数不超过100CFU/mL为合格。
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铜绿假单胞菌污染矿泉水调查分析
博兴县银河源矿泉水厂是一家单一生产19 L桶装饮用天然矿泉水的小型矿泉水厂.1999年6~7月,对该厂矿泉水进行3次采样检测,现将检测结果报告如下:现场卫生学调查.主要了解工厂卫生防护状况、工艺流程、设备及从业人员基本情况,重点了解卫生设施和使用情况.采样方法.按工艺流程自水源水出井至仓库内存放成品分段常规采样.水样用无菌玻璃瓶装,瓶盖酒精火焰严格消毒后封口待检;随机抽取消毒空桶一只,加入300 mL无菌生理盐水反复振荡60次,将生理盐水回收至无菌玻璃瓶中封口待检.菌落总数、大肠菌群及水源水中污染指标检验按GB/T8538-1995<饮用天然矿泉水检验方法>.铜绿假单胞菌的鉴定按水质检验常规,在琼脂培养基上长出带有绿色荧光菌落,通过钢绿假单胞菌鉴定程序确定.
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应用0.5%碘伏手术部位皮肤消毒效果监测
为了掌握手术部位皮肤消毒效果,提高手术医师无菌操作水平,增加无菌观念,笔者对140例手术部位皮肤应用0.5%碘伏消毒效果进行监测,现报道如下.1材料与方法1.1材料:浸有无菌稀释液的棉拭子、普通营养琼脂培养基.
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2002-2011年某院四种革兰阳性球菌的耐药性监测
在引起临床感染的病原菌中,革兰阳性菌是一类重要的致病菌,该类细菌分布广、传播快、耐药率高,一经感染,将给临床治疗带来很大困难.因此,笔者对2002-2011年我院临床分离的4种主要革兰阳性球菌的耐药性进行监测与分析,为临床一线经验性初始治疗方案的建立提供理论指导.1资料与方法1.1菌株来源:收集我院2002年1月至2011年12月临床送检的各类标本中分离得到的9870株革兰阳性菌(剔除同一患者相同部位的重复菌株).1.2培养基、药敏纸片及仪器:药敏纸片购自OXOID公司、M-H琼脂培养基和VITEK2 COMPACT微生物鉴定仪均购自法国生物梅里埃公司.
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含消毒剂健康杀菌皂杀菌效果观察
为了解健康杀菌皂的杀菌效果,进行了杀菌效果的观察.该健康杀菌皂(以下简称杀菌皂)含2,4,4-三氯-2-羟基二苯醚、天然油脂、表面活性剂、香料等成分.其观察结果如下.1 方法1.1 菌悬液的制备1.1.1 细菌繁殖体悬液的制备[1] (1)取冻干菌种管,在无菌操作下打开,以毛细吸管吸加适量营养肉汤培养基,反复吹吸,使菌种融化分散.取含5.0ml营养肉汤培养基试管,滴入少许菌种悬液,置37℃培养18~24h.用接种环取第1代培养的菌悬液,划线接种于营养琼脂培养基平板上,于37℃培养18~24h.挑取上述第2代培养物中典型菌落,接种于营养琼脂斜面,于37℃培养18~24h,即为第3代培养物.(2)取菌种第3~14代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物(18~24h),用5.0ml吸管吸取5.0ml PBS加入斜面试管内,反复吹吸,洗下菌苔.
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头状葡萄球菌引起顽固性痈1例报告
患者,男,22岁.面部及全身生痈八年.经多种药物治疗无效,为查清其致病原因,特取病变外脓汁性分泌物作病原菌的分离.分离方法:选择患者身上化脓比较明显的病灶,将其周围进行严格的消毒后,用无菌针刺破病灶,使脓汁外溢,用无菌棉拭子沾取患处脓汁分泌物,立刻接种于普通营养琼脂培养基与血液培养基进行分离,置37℃恒温培养至72h可见两种培养基均有淡黄色,圆形、凸起、边缘整齐、光滑、湿润的不透明菌落生长,在血琼脂平板上的菌落大于普通平板,有溶血环,菌落直径1.2mm.
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选择培养基分离鼠疫菌的实验研究
开展鼠疫监测以来一直使用营养琼脂培养基、赫氏培养基和龙胆紫血液培养基分离培养鼠疫菌,这些培养基的缺点是选择性差,所有营养条件要求不高的细菌均可生长,鼠疫菌菌落特征不典型,常常与一些杂菌菌落难以辨认.为此,我们选择国际上认可的耶氏菌选择培养基(Yersinia selective agar)进行鼠疫菌与多种细菌的生长状况研究,与赫氏培养基,营养琼脂培养基进行了效果比较,结果如下.
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一株在普龙亚培养基上菌落形态变异鼠疫菌的发现与研究
自从1929年Бесонова·А·А首先发现鼠疫菌的变异现象以来,在这方面积累了不少资料.特别是菌落形态方面的变异早已被人们所认识.本文报道的菌落形态变异菌株只在普龙亚培养基(龙胆紫、亚硫酸钠琼脂培养基)上生长时菌落形态明显变异,而在普通琼脂培养基上生长时仍呈现典型的鼠疫菌落形态.这在以往材料中尚未见到类似报道.通过对其报道说明普龙亚培养基对特殊变异菌株培养出的菌落形态不具有典型鼠疫菌落的特征,在鼠疫监测中必须引起足够的重视.这对鼠疫监测工作中培养基的选择和应用可能提供有益的资料.
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人血白蛋白琼脂培养基在A、 C、 Y、 W135群脑膜炎球菌培养中的应用
目的 比较A、C、Y、W135群脑膜炎球菌冻干菌种在羊血琼脂培养基和人血白蛋白琼脂培养基中的复苏培养效果,为人血白蛋白琼脂培养基代替羊血琼脂培养基进行复苏培养提供依据.方法 将A、C、Y、W135群脑膜炎球菌冻干菌种分别接种至羊血琼脂培养基和人血白蛋白琼脂培养基中,待长满琼脂培养基后转至相同体积、相同成分的基础培养基中,培养过程中取样测定A600.结果 A、C群脑膜炎球菌在人血白蛋白琼脂培养基中复苏培养效果优于羊血琼脂培养基,而Y、W135群脑膜炎球菌在人血白蛋白琼脂培养基与羊血琼脂培养基复苏培养中效果相当.结论 人血白蛋白琼脂培养基能够很好地应用于A、C、Y、W135群脑膜炎球菌的复苏培养.