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"胰岛代理细胞"的构建:在HepG2细胞中获得胰岛素分泌
目的:利用转基因技术将HepG2细胞改建为具有生理性胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞".方法:以携葡萄糖激酶(glucokinase,gk)基因的逆转录病毒及携人胰岛素原基因突变体(mutant proinsulin gene,mpin)的逆转录病毒共同感染肝母细胞瘤细胞系HepG2,G418选择培养基挑选抗性细胞集落,放免法、SDSPAGE、Western-blot及反转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定HepG2细胞中两个目的基因的转录及表达;选取联合表达葡萄糖激酶及成熟胰岛素的HepG2细胞进行葡萄糖反应性胰岛素分泌的检测,以单独表达成熟胰岛素的HepG2细胞作对照.结果:在G418选择培养基中3 wk获阳性细胞克隆,采用放免法、SDS-PAGE、Western-blot从20个细胞克隆中挑选出联合表达葡萄糖激酶及成熟胰岛素的HepG2细胞4株,其中1株2个目的基因表达均较强,命名为细胞克隆"β";经RT-PCR检测证实细胞"β"中已有两个目的基因的转录.在细胞"β"中,葡萄糖浓度为0.5 mmol/L和0.75 mmol/L时,胰岛素的分泌无显著性差异(P>0.05);葡萄糖浓度为2.0 mmol/L,3.0 mmol/L,4.0 mmol/L,5.0 mmol/L,及6.0 mmol/L时,胰岛素的分泌无显著性差异(P>0.05);其余葡萄糖浓度条件下,胰岛素的分泌差异均有显著性意义(P<0.05).在单独表达胰岛素的HepG2细胞中,各葡萄糖浓度条件下,胰岛素的分泌均无显著性差异(P>0.05).说明在细胞"β"中获得了葡萄糖反应性胰岛素分泌,葡萄糖浓度约1.75-2 mmol/L时出现胰岛素分泌高峰.结论:成功构建了具有生理性胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"系.
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老年根面龋患者菌斑致病菌分析
根面龋是老年人的口腔常见病,是老年口腔疾病防治的重要内容之一。关于根面龋致病菌国内外尚有争议。我们于1999年12月~2000年2月对临床患根面龋老年人的局部菌斑进行分离、培养、鉴定,找出优势菌,旨在为根面龋防治提供参考。 一、材料和方法 1.材料:试验组:年龄60~77岁、患根面龋无牙髓及根尖炎症者15例;对照组;根外露,无根面龋者10例。 2.方法:从试验组患者根面龋洞内或对照组根邻面取菌斑后送实验室。标本经振荡稀释后分别接种于CDC非选择培养基、轻唾培养基、乳酸杆菌和放线菌选择培养基上。CDC培养基和放线菌选择培养基厌氧37℃,培养5 d,其他培养基需氧37℃,培养5 d。培养后根据菌落形态、革兰染色、常规生化反应鉴定菌群属,对每种培养皿进行菌落计数,统计每种菌的菌落形成数目。
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金黄色葡萄球菌选择培养基成份筛选以及优化
目的 探讨研究金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林)选择性培养基的成份,并进行选择性成份的筛选以及优化,以提高分离培养菌株的效率.方法 在对常规分离培养金黄色葡萄球菌的培养基基础上添加不同浓度的苯唑西林和头孢西丁抗生素,观察分离培养效率并进行比较.结果 在常规分离培养基中加入4μg/ml的头孢西丁具有较高的分离培养效率,其灵敏度和特异性均较好;并且加入头孢西丁的培养基总体分离效果要高于加入苯唑西林的培养基,差异具有统计学差异(P<0.05).结论 在常规金黄色葡萄球菌分离培养基中加入4μg/ml的头孢西丁,能够较好的分离到耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌菌株,提高食品微生物检验效率.
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选择培养基分离鼠疫菌的实验研究
开展鼠疫监测以来一直使用营养琼脂培养基、赫氏培养基和龙胆紫血液培养基分离培养鼠疫菌,这些培养基的缺点是选择性差,所有营养条件要求不高的细菌均可生长,鼠疫菌菌落特征不典型,常常与一些杂菌菌落难以辨认.为此,我们选择国际上认可的耶氏菌选择培养基(Yersinia selective agar)进行鼠疫菌与多种细菌的生长状况研究,与赫氏培养基,营养琼脂培养基进行了效果比较,结果如下.
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两种培养基分离鼠疫耶尔森氏菌的效果比较
上世纪80年代,美国、芬兰、日本相继报道小肠结肠炎耶尔森氏菌病的暴发流行而引起国内外医学界高度关注,各种耶尔森氏菌培养基纷纷问世,使用耶尔森氏菌选择培养基即Yersinia selective agar检验小肠结肠炎和假结核耶尔森氏菌已在国际上得到普遍认可,但分离鼠疫菌效果尚不清楚.
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348例女性阴道分泌物异常的病原体分析
为了了解我市女性阴道分泌物异常的病原体感染情况,我们对近期来我院妇科、皮肤性病科门诊就诊的女性进行病原体检测,结果报告如下.1 材料和方法1.1 一般资料:随机选择就诊女性病人348例,其中已婚301例,未婚47例.其中年龄20~30岁279例,31~40岁45例,40岁以上24例.1.2 材料:淋球菌选择培养基:WHO推荐用淋球菌培养基,Thayer-Martin(T-M)培养基(英国OXOIN公司生产).支原体培养基:由广东江门市众诚公司提供."立明"衣原体快速免疫法(Clearview Chlamyd,简称C-C快速法),试剂由UNIPATH公司提供.1.3 取材和方法:1.3.1 淋球菌检查:取宫颈分泌物行直接涂片,革兰氏染色,镜检和分离培养.
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双歧杆菌基因组DNA提取几种方法的比较
双歧杆菌的保健功能现已为人们广泛认可,随着双歧制品微生态制剂普及,人们对相关产品内在质量投诉也相应增多,因此快速鉴定产品中双歧杆菌是当务之急,由于双歧杆菌目前检测缺乏有效的选择培养基和鉴别培养基,依据其形态和生理特性进行鉴别程序复杂,结果不稳定,因此双歧杆菌的分子生物学检测一直是近年研究热点,目前报道较多的有PCR法,RAPD法,RFLP法,而在PCR和RAPD扩增中,都对DNA纯度有较高要求,特别是干扰PCR扩增的多糖和蛋白质要清除掉,由于双歧杆菌细胞壁有类似真菌的特性,因此其DNA提取不同于革兰氏阴性菌(溶菌酶-煮沸法),据文献报到目前双歧杆菌DNA提取有几种方法,溶菌酶-SDS-醋酸钾法[1],溶菌酶-SDS-酚/氯仿法[2],溶菌酶-煮沸法,改良氯化苄法[3].本实验对该四种方法做了比较,认为醋酸钾法和氯化苄法提取DNA效果较好.
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061从人体未消毒部位分离MRSA的新型选择培养基——PANO-DNA琼脂
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庆大霉素ELB选择培养基分离肠道肠球菌
肠球菌是寄生于人体肠道中的正常菌群,肠球菌作为条件致病菌可引起泌尿系感染、肺部感染、心内膜炎、腹膜炎等多种疾病.ELB培养基可用于肠球菌纯培养,但不适用于从粪便中分离肠球菌.目前临床上分离肠球菌的血培养[1]基多用于尿、痰、血液、胆汁、腹水等临床标本的肠球菌的分离,很少用于粪便标本中的肠球菌,且血培养基制备较繁琐,分离率不高,故用庆大霉素ELB选择培养基选择分离肠道肠球菌,分离率较高,效果好.