生奶中小肠结肠炎耶尔森菌和嗜水气单胞菌的复合和半巢穴PCR检测方法

天津市蓟县小肠结肠炎耶尔森菌的带菌动物调查

目的 了解天津市蓟县动物宿主小肠结肠炎耶尔森菌的带菌情况,做好小肠结肠炎耶尔森菌感染的预防与控制工作.方法 2006年5～6月份在全县范围内开展易携带病原菌的猪、牛、羊、鸡等家禽家畜的监测工作.用冷增菌培养法进行分离培养.结果 从猪粪便中检出4株小肠结肠炎耶尔森菌,经聚合酶链反应(PCR)鉴定,其中3株菌株带有ail、ystA、yadA、virF 4种毒力基因,同时还具有O:3血清型特异性的rfbC基因,1株菌株带有ystB一种毒力基因.结论 猪为天津市该菌的动物宿主之一,猪粪可能成为食品污染的来源.

2004-2005年江苏省海安县小肠结肠炎耶尔森菌病监测分析

目的 了解2004-2005年江苏省海安县小肠结肠炎耶尔森菌人群带菌情况以及家禽、家畜肉污染情况.方法 采集动物和腹泻患者粪便及冷藏的禽、畜肉和苍蝇等样本进行小肠结肠炎耶尔森菌增菌培养,并对阳性菌株进行血清学分型和毒力基因检测.结果 所有样本中,仅160份动物粪便样本检测阳性,阳性率达17.19%(160/931),其中猪的带菌率较高.151株小肠结肠炎耶尔森菌共有29个血清型,其中血清型以O:16,29、O:6,30、O:5、O:7,8、O:12,26、O:4,33、O:8等为主,除61株ystB阳性外,其余毒力基因均为阴性.结论 小肠结肠炎耶尔森菌江苏省海安县家畜家禽中普遍携带菌,但这些菌株大多属于非致病菌株,对人群威胁不大.

云南部分鼠疫疫源地中小肠结肠炎耶尔森菌的分离及鉴定

目的 了解云南部分鼠疫疫源地中小肠结肠炎耶尔森菌的分布及病原学特征.方法 2012年5月至2014年4月采集剑川、梁河两县鼠类盲肠,对其进行培养,通过菌落聚合酶链反应初筛小肠结肠炎耶尔森菌,通过生化鉴定确定菌株并作毒力基因检测.结果 915份标本中分离到小肠结肠炎耶尔森菌35株,总检出率为3.83％,分离株包含1株致病株、34株非致病株.35株小肠结肠炎耶尔森菌全部为生物1A型,1株致病株为1A/O∶9生物血清型,毒力基因为(ail+、ystA-、ystB-、yadA-、virF-、rbfc-),非致病株血清为O∶5、O∶8及未分型,毒力基因为(ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-、rbfc-).结论 小肠结肠炎耶尔森菌在剑川野鼠鼠疫疫源地鼠间流行,分离菌株血清型别较为多样,分离到的致病株缺乏典型毒力基因;小肠结肠炎耶尔森菌在梁河家鼠鼠疫疫源地尚未发现鼠间的流行.

2013-2014年云南省剑川县野鼠鼠疫疫源地小肠结肠炎耶尔森菌的调查分析

目的 对剑川县野鼠鼠疫疫源地小肠结肠炎耶尔森菌分布情况调查分析.方法 从剑川采集鼠盲结肠标本进行小肠结肠炎耶尔森菌分离培养、表型鉴定和特异基因分析.结果 从采集的645份鼠类标本中,分离到34株小肠结肠炎耶尔森菌,分离率为5.27％ (34/645);其中致病株1株、非致病株33株.鼠类标本分别是大绒鼠、贝氏树嗣、褐家鼠、齐氏姬鼠、小林姬鼠等,其中大绒鼠采集率和检出率高(2.79％),其次为齐氏姬鼠(1.55％).结论 剑川县野鼠鼠疫疫源地中,小肠结肠炎耶尔森菌的主要宿主与鼠疫菌主要宿主基本一致,推测小肠结肠炎耶尔森菌的存在与鼠疫的相对静息相关.

聚合酶链反应法和分离培养法筛检小肠结肠炎耶尔森菌方法的比较研究

目的 比较针对小肠结肠炎耶尔森菌的两种不同检测方法,即ail基因联合foxA基因的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测和分离培养法的差异.方法 从生猪咽拭子和回盲部肠内容物标本中提取细菌基因组DNA并进行小肠结肠炎耶尔森菌保守基因foxA和粘附侵袭位点基因ail的PCR检测；菌株分离培养按常规方法进行.将两种方法的检出结果进行统计分析,以判定哪种更有优势.结果 700份标本中,小肠结肠炎耶尔森菌特异性基因PCR检测阳性402份,阳性率57.43％；小肠结肠炎耶尔森菌分离培养阳性278份,阳性率39.71％.在PCR检测阳性的402份标本中,分离小肠结肠炎耶尔森菌271株,分离阳性率为67.41％；PCR检测阴性的298份标本中,分离小肠结肠炎耶尔森菌7株,分离阳性率仅为2.35％.结论 本次实验证实,检测来源于生猪标本中的小肠结肠炎耶尔森菌,采用foxA和ail基因联合的PCR检测法,检出率明显高于小肠结肠炎耶尔森菌分离培养法(P＜0.05).

小肠结肠炎耶尔森菌感染性疾病

耶尔森菌属对人类致病的包括三个种:鼠疫耶尔森菌、假结核耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌,其中小肠结肠炎耶尔森菌是一种很重要的人类肠道致病菌,世界各大洲均有发现,近年来逐渐受到全球重视.它引起的临床症状十分广泛,从中度腹泻到肠系膜淋巴结炎,对一些免疫功能异常的病人则会出现严重的并发症(败血症),在某些国家和地区(如芬兰),小肠结肠炎耶尔森菌是一种引起慢性无菌性关节炎的常见因子.

2011年江苏省东台市小肠结肠炎耶尔森菌监测分析

目的 了解江苏省东台市腹泻患者和不同宿主粪便小肠结肠炎耶尔森菌感染及其毒力基因携带情况.方法 从所检标本中分离小肠结肠炎耶尔森菌,同时用聚合酶链反应方法检测分离菌株5种毒力基因携带状况.结果 15种样品795份标本中,小肠结肠炎耶尔森菌检出率为3.77％,猪粪中的检出率高,达22.50％；犬粪次之,为8.05％.猪粪中携带ail、ystA、yadA和virF4种毒力基因的致病菌株检出率高,均达12.50％；犬粪次之,分别为4.60％、4.60％、4.60％和4.60％.结论 猪、犬是东台市小肠结肠炎耶尔森菌的重要携带者.

自腹泻病例和家用冰箱分离的小肠结肠炎耶尔森菌病原特征分析

目的 研究自腹泻病例和家用冰箱中分离的小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica,Ye)的病原学特征,为科学防控Ye的污染提供依据.方法 采集2017年北京市顺义区2家哨点医院肠道门诊腹泻患者病例粪便标本和顺义区83户家用冰箱中的涂抹拭子样品,对分离的Ye进行毒力基因、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型检测和耐药试验.结果 腹泻病例粪便标本中Ye阳性率为0.27％(1/372),家用冰箱中Ye阳性率为6.02％ (5/83);冰箱分离株仅携带ystB基因,腹泻病例分离株携带ail、ystA、virF、yadA基因;腹泻病例和冰箱分离株PFGE带型亲缘关系较远.全部Ye对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢唑林均耐药,腹泻病例分离株对萘啶酸耐药.结论 Ye在北京市顺义区腹泻病例中流行强度不高,家用冰箱受Ye污染较为严重,腹泻病例和冰箱中分离的Ye病原学特征具有一定差异.

小肠结肠炎耶尔森菌环介导管温扩增技术检测方法的建立

目的 将一种新颖的核酸扩增技术--环介导等温扩增技术(LAMP)应用于小肠结肠炎耶尔森菌的快速检测.方法 针对小肠结肠炎耶尔森氏菌毒素基因yruI/yruR设计5条特异性引物,进行LAMP扩增,对扩增反应进行优化.并考核方法的敏感性和特异性.结果 佳反应时间为60 min,反应温度为60℃.对8种相关肠道细菌进行LAMP扩增,仅小肠结肠炎耶尔森菌得到阳性扩增结果,证明引物具有很高的特异性.小肠结肠炎耶尔森菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别约为74 fg和43 cfu/ml.对模拟食品样品进行直接检测,检测限为76 cfu/g.结论 本方法检测小肠结肠炎耶尔森菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低,1.5 h即可完成,有望发展成为快速检测小肠结肠炎耶尔森菌的有效手段.

中国六省致病小肠结肠炎耶尔森菌的脉冲场凝胶电泳分析

目的 对中国致病小肠结肠炎耶尔森菌分离株进行脉冲场凝胶电泳分析.方法 参照美国疾病预防控制中心PulseNet实验方法对中国6省165株致病小肠结肠炎耶尔森菌进行脉冲场凝胶电泳分析,使用BioNumerics软件进行聚类分析,并按照PulseNet命名原则对带型进行命名.结果 将114株O:3血清型小肠结肠炎耶尔森菌分成25个带型;K6GN11C30012(50株)、K6GN11C30015(19株)及K6GN11C30016(10株)是其主要带型,三个主要带型之间聚类相似性很高.将51株O:9血清型小肠结肠炎耶尔森菌分为14个带型;其中K6GN11C90004(22株)与K6GN11C90010(13株)是其主要带型,K6GN11C90004与K6GN11C90010带型之间有一定的差异.O:3与O:9血清型的主要带型之间有明显的差异.结论 O:3血清型的小肠结肠炎耶尔森菌可能起源于一个克隆系,且在不同地区和年代变异很小;O:9血清型的小肠结肠炎耶尔森菌可能起源于两个不同的克隆系,且各自有一定的变异.O:3与O:9血清型的小肠结肠炎耶尔森菌亲缘关系较远.

乌鲁木齐市腹泻病患者和家畜家禽中携带小肠结肠炎耶尔森菌毒力岛大肠埃希菌的调查

为了解乌鲁木齐市(乌市)腹泻患者及家畜家禽中小肠结肠炎耶尔森菌毒力岛(HPI)的携带情况和腹泻病患者的临床特征,我们于1997年6～10月对乌市510名腹泻病患者进行了相关的流行病学调查和主要腹泻病原分析.

江苏省徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌病原学特征分析

小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica,Ye)病是引起国际社会广泛关注的一种新发肠道传染病,近来国际上多次报道"非致病性Ye"引起的人群感染,甚至是暴发,受到相关学者的关注[1].徐州地区先后进行了两次相隔22年的调查和相关研究,现将Ye病原学特征分析如下.

徐州地区2004-2006年腹泻病患者和家畜家禽及食品中小肠结肠炎耶尔森菌分布调查

了解2004-2006年徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌的分布特征.1.材料与方法:2004-2006年采集腹泻病患者(480份)、猪(360份)、牛(288份)、羊(384份)、鸡(137份)、犬(282份)粪便标本和生肉(200份)与熟肉(200份)涂抹标本,共2331份.

江苏省南通地区小肠结肠炎耶尔森菌分布特征初步研究

目的了解江苏省南通地区小肠结肠炎耶尔森菌的分布特点和毒力特征.方法用常规方法从家畜家禽粪便标本中分离小肠结肠炎耶尔森菌,PCR法检测其五种毒力相关基因,同时对国内分离到的O:8血清型菌株进行脉冲场凝胶电泳分析.结果从该地区293份家畜家禽粪便标本中分离到91株小肠结肠炎耶尔森菌,分离率为31.06%.未分离到国内主要流行血清型O:3和O:9,其中有39.57%菌株毒力基因分布特征为:ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-,有60.43%菌株为ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-,两株国外引进的强毒菌株具有相同的脉冲图形,与国内分离到的O:8血清型菌株存在显著的差异.结论致病性小肠结肠炎耶尔森菌的分布具有局限性,江苏省南通地区小肠结肠炎耶尔森菌的分布可能以非致病菌为主.

噬菌体phiYe-F10的裂解谱的测定以及裂解能力与宿主毒力基因间关系分析

目的 为测定小肠结肠炎耶尔森菌噬菌体phiYe-F10的裂解谱,分析噬菌体phiYe-F10裂解能力与宿主毒力基因间的关系.方法 采用双层平板法观察噬菌体phiYe-F10对213株小肠结肠炎耶尔森菌,36株假结核耶尔森菌和1株鼠疫耶尔森菌的裂解能力;同时对不同来源不同地区的小肠耶尔森菌进行黏附侵袭位点基因(ail)、肠毒素基因(ystA、ystB)、黏附素基因A(yadA)、毒力因子基因F(virF)、O∶3血清型特异性基因(rfbc)检测和血清型别鉴定.结果表明 213株小肠结肠炎耶尔森菌包括O∶3血清型84株(其中rfbc+ 78株),O∶5血清型10株,O∶8血清型13株,O∶9血清型34株,其它及未分型的共72株.携带毒力质粒的典型致病性小肠耶尔森菌(ail+,ystA+,ystB-,yadA+,virF+)77株,毒力质粒丢失的致病性小肠结肠炎耶尔森菌(ail+、ystA+、ystB、yadA、virF)15株,其它非致病基因型121株.噬菌体phiYe-F10裂解71株O∶3小肠结肠炎耶尔森氏菌,其中致病性小肠结肠炎耶尔森菌52株,非致病性小肠结肠炎耶尔森菌19株.对O∶5,O∶9血清型和其它菌株均不裂解,对O∶3的裂解率高达84.5％(71/84).噬菌体phiYe-F10对假结核耶尔森菌和鼠疫耶尔森氏菌均不裂解.结论:phiYe F10噬菌体是一株小肠结肠炎耶尔森菌的裂性噬菌体,在25℃时表现出一个典型的窄裂解谱,高度专一性裂解O∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌.phiYe-F10对典型致病性小肠结肠炎耶尔森菌的裂解能力明显高于非致病性的小肠结肠炎耶尔森菌.

西宁市猪小肠结肠炎耶尔森菌病原学研究

目的 了解西宁市屠宰场生猪小肠结肠炎耶尔森菌分布及病原学特征. 方法 从猪咽拭子和回盲部肠内容物标本中提取细菌基因组DNA,进行小肠结肠炎耶尔森菌保守基因foxA的PCR检测,对阳性标本进行细菌分离,阳性菌株进行血清学分型、生物分型和毒力基因检测. 结果 400份标本PCR扩增foxA基因阳性72份,其中49份培养分离出小肠结肠炎耶尔森菌,检出率为12.25％(49/400);49株小肠结肠炎耶尔森菌经生化鉴定主要为3个生物型:1A型(占16.33％)、3型(占79.59％)和4型(占4.08％);血清型以O∶3、O∶5、O∶8、O∶9为主,其中O∶3血清型39株(占79.59％),O∶5血清型5株(占10.20％),O∶8血清型2株(占4.08％),O∶9血清型1株(占2.04％),血清不确定型2株(占4.08％).毒力基因分布特征为ail+、ystA+、ystB-、yadA+、virF+占73.46％(36/49),ail+、ystA+、ystB-、yadA-、virF-占10.20％(5/49),其他毒力基因型占16.33％(8/49). 结论 西宁市生猪携带的小肠结肠炎耶尔森菌主要为致病性菌株,应加强对本地生猪小肠结肠炎耶尔森菌的监测.

小肠结肠炎耶尔森菌在中国家畜家禽间分布的研究

目的：为了解中国小肠结肠炎耶尔森菌在不同家畜、家禽中的分布规律，对不同地区家畜、家禽进行带菌状况调查。方法采集中国不同地区家畜、家禽咽拭子，肛拭子和粪便标本进行小肠结肠炎耶尔森菌分离培养，并对分离到的菌株进行血清分型、生物分型及毒力相关基因检测。结果猪中小肠结肠炎耶尔森菌携带率高为12.91%，其次为犬，携带率为9.80%，两者分离的致病性菌株所占比例分别为73.50%和59.44%。而其他动物中小肠结肠炎耶尔森菌携带率较低，鸡、牛和羊分别为4.50%、2.78%和0.89%，且主要以非致病性菌株为主，分别占100%、94.44%和93.33%。结论首次在中国进行大规模家畜、家禽中小肠结肠炎耶尔森菌分布调查。动物中小肠结肠炎耶尔森菌感染率存在较大物种差异和地域性分布特征，猪、犬是小肠结肠炎耶尔森菌的主要储存宿主和传染源，而牛、羊、鸡、鸭等主要携带非致病性小肠结肠炎耶尔森菌，属于偶然宿主。

内蒙古阿鲁科尔沁旗鼠疫疫区小肠结肠炎耶尔森菌调查研究

目的 了解赤峰市阿鲁科尔沁旗达乌尔黄鼠鼠疫疫源地内鼠类、家畜家禽携带小肠结肠炎耶尔森菌情况,为疾病防治工作和研究鼠疫疫源地提供科学依据.方法 在达乌尔黄鼠鼠疫疫源地内,选择以村庄为中心,向外依次为农田、草原的同心圆样地,分别采集鼠类、家畜家禽粪便、舌根、咽拭子及肠道内容物等样品,进行小肠结肠炎耶尔森菌分离、培养、鉴定、生物血清分型,并用PCR方法进行毒力因子测定.统计学分析采用x2检验.结果 2009-2012年共检验各类样品3837份,检出小肠结肠炎耶尔森菌17株,总检出率为0.44％.2011年检出的16株小肠结肠炎耶尔森菌中13株源自猪粪,3株来自鼠肠;1株O∶3血清型,生物3型,携带ail、ystA、rfbC毒力基因的致病性菌株检自猪粪.结论 阿鲁科尔沁旗绍根地区的猪、鼠体内携带小肠结肠炎耶尔森菌,猪是致病性小肠结肠炎耶尔森菌的重要携带者.进一步调查分析小肠结肠炎耶尔森菌在该地区人和宿主动物间的分布规律十分必要.

2004-2005年我国部分地区小肠结肠炎耶尔森菌宿主分布调查

目的 了解2004-2005年小肠结肠炎耶尔森菌宿主分布情况.方法 对从不同宿主样品中分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行生物化学鉴定、血清学分型、毒力基因PCR检测.结果 2004-2005年从8种常见动物宿主及食品中共分离到230株小肠结肠炎耶尔森菌,35.65%分离自猪,致病性菌株中51.52%来自猪,所占比例高,而分离自腹泻病人、兔的菌株均为致病性菌株.结论 我国小肠结肠炎耶尔森菌宿主分布广泛,猪是主要的宿主动物.