江苏省1995-2000年伤寒噬菌体分型与耐药性监测

为掌握伤寒流行规律、为防治提供依据,江苏省设立监测点开展对伤寒Vi-Ⅱ型噬菌体分型和耐药监测.结果显示:448株菌分型率83.71%,共分出22个噬菌体型,主要流行有D型,占38.67%,该型中D1、D2型,分别占57.79%、40.00%,E型占15.20%,其中E1型占77.19%.M1型占14.93%,J1型占11.20%.E4型、K3型和32型分别在国内和省内首次报道.181株菌对12种药物耐药率,磺胺甲基异(口恶)唑95.03%、复方新诺明88.95%、红霉素85.08%,其中12株M1型菌对卡那霉素、氯霉素、庆大霉素耐药株明显减少,卡那霉素耐药率8.33%、氯霉素和庆大霉素耐药率16.66%.监测分析认为:疫情强度与优势流行株以及优势株耐药情况有关.伤寒沙门氏菌对多粘菌素B、丁胺卡那、庆大霉素、氯霉素、诺氟沙星药物敏感,其结果可供临床治疗、现场防治用药参考.

贝类水产中副溶血性弧菌菌型分布研究

目的 了解贝类水产中副溶血性弧菌(VP)的菌型构成及其特点.方法 按照GB/T 4789.7标准处理贝类标本,每份VP阳性标本挑取10个克隆,并对其进行血清分型,以PCR法检测tdh、trh、GS-PCR和f237噬菌体的携带情况,并据此对阳性标本中的VP进行菌型区分,分析各菌型在相应标本中的构成.结果 75份贝类水产中18份(24.0％)检出VP,5.6％携带trh阳性VP(O4∶ KUT),未检出tdh阳性菌株.18份VP阳性标本共获得180株VP克隆,共可分为42种菌型.检出3株O3∶K6和1株O1∶K33 GS-PCR阳性菌株,均为非流行株.不同标本中菌型数不完全相同,多可检出9种,平均每份VP阳性标本含6.1种菌型.检出47个(26.1％)克隆株携带f237的orf8完全缺失变种.结论 f237 orf8完全缺失变种噬菌体在贝类中具有广泛的分布.贝类中VP种群构成复杂,常携带多个菌型.临床常见菌型在贝类中不具优势,食品中VP的检测应充分考虑血清分型、基因分型的作用.

噬菌体分子分型技术研究进展

噬菌体是细菌(包括放线菌、蓝绿藻、螺旋体和支原体等)的寄生病毒,在自然界广泛分布.基于细菌噬菌体核酸或蛋白的分子分型研究对认识噬菌体多态性及种群结构,推论宿主菌和噬菌体系统进化,明晰噬菌体和宿主菌相互作用具有重要意义.本研究介绍了噬菌体分子分型技术和应用的研究进展,重点从噬菌体全基因组测序、限制性片段长度多态性分析、随机扩增多态性DNA分析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、保守基因多位点序列分型等方面阐述新近分子分型技术在噬菌体分型和种群关系研究中的应用.

细菌抗噬菌体感染分子机制

细菌与噬菌体间是一种寄生关系,一方面细菌抵抗噬菌体感染,另一方面噬菌体也产生抗宿主菌防御的改变.本文从细菌的被动免疫、主动防御方面综述了多种细菌抵抗噬菌体的分子机制.这其中既包括细菌生物膜的物理阻隔作用,也包括吸附抑制、注入阻滞、限制修饰系统、流产感染等机制,还包括新近发现的细菌的适应性免疫-CRISPR-Cas系统以及噬菌体排除系统.细菌与噬菌体间的竞争,不仅是自身选择压力的结果,也是彼此共进化的动力.

规律成簇的间隔短回文重复序列中间隔序列的噬菌体来源研究

目的 发现在现有的全基因组测序完成的原核生物中规律成簇的间隔短回文重复序列(CRISPR)系统中间隔序列分布规律以及间隔序列中噬菌体来源情况.方法 整理现有CRISPR数据库中2762株细菌基因组中的CRISPR系统和其中的间隔序列数据,整理GenBank数据库中发表的1444个噬菌体基因组数据.利用BLASTN软件对间隔序列数据与噬菌体基因组进行相似性比较,计数资料比较使用x2检验.结果 在2762个细菌基因组中整理出1940个基因组存在确定或可能的CRISPR结构和90 096条间隔序列,多数基因组具有1～ 50条间隔序列(1414/1940,72.9％),间隔序列数量＞250条的仅有58个基因组(58/1940,3.0％).其中古细菌13株(13/150,8.6％),真细菌45株(45/2612,1.7％),差异有统计学意义(x2=29.98,P＜0.01).相似性比较结果共发现245个细菌基因组的1055条间隔序列,成功比对上363个噬菌体,比对成功率仅为0.12％.结论 细菌基因组中的CRISPR系统中间隔序列数量存在较大差异,古细菌基因组中CRISPR系统存在更多的间隔序列.相似性比较中噬菌体来源的间隔序列所占比例低,提示与细菌和噬菌体基因组发现较少相关,进一步深入研究可以大幅度提高成功率.

噬菌体对2-酮基-L-古龙酸生产的影响

研究了噬菌体对2-酮基-L-古龙酸混菌发酵的影响,在混菌培养12小时后分别接种2×105 pfu/ml巨大芽孢杆菌的两种噬菌体BS601和BS801,发现:(1)噬菌体BS601虽能裂解B.megaterium,但能通过释放胞内活性物质促进K.vulgare生长,从而促进2-KLG的合成并缩短发酵周期；(2)添加噬菌体BS801能同时裂解B.megaterium和K.vulgar,导致代谢停止,无法合成2-KLG.基于上述研究结果,通过在不同发酵周期添加一定浓度的噬菌体BS601,显著提高了2-KLG的产量和生产强度.

酸奶生产中噬菌体的危害及控制

噬菌体生物扩增法与改良罗氏比例法在结核杆菌药敏检测中的比较

目的采用噬菌体生物扩增法(PhaB法)与传统比例法对结核分枝杆菌临床株进行利福平、异烟肼药物敏感试验,建立一种快速、敏感、特异、价廉的结核杆菌药敏试验方法.方法分别采用噬菌体生物扩增法和改良罗氏比例法检测52株结核分枝杆菌临床株对利福平、异烟肼的敏感性,将二者结果进行比较.结果比例法检测结果为利福平耐药株的34株中,噬菌体生物扩增法检测结果为32株耐药,2株敏感;18株敏感株中噬菌体方法检测结果为17株敏感,1株耐药.噬菌体方法检测结核菌对利福平的灵敏度为94.1%(32/34),特异度为94.4%(17/18),符合率为94.2%(49/52).比例法检测为异烟肼耐药的38株菌中,噬菌体方法检测35株耐药,3株敏感;14株异烟肼敏感株中,噬菌体方法检测11株敏感,3株耐药.噬菌体方法检测异烟肼敏感性的灵敏度为92.1%(35/38),特异度为78.6%(11/14),符合率为88.5%(46/52).结论用噬菌体生物扩增法可快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平的敏感性,灵敏度高,与WHO推荐使用的比例法符合率高,可在48h得到结果.异烟肼耐药性检测用噬菌体方法的特异度不如利福平,有待进一步探讨其原因.

初治肺结核合并糖尿病患者噬菌体检测法一线抗结核药物耐药分析

2007-2008年全国结核病耐药性基线调查报告显示,涂阳肺结核患者总耐药率为37.79％,其中初治肺结核患者耐药率为35.16％,结果表明我国耐药结核病疫情严重[1].肺结核合并糖尿病发病率呈上升趋势,有报道10％～30％的肺结核患者患有糖尿病[2],两病互相影响,具有进展快、疗效差、耐药率高等临床特点,肺结核合并糖尿病患者的耐药率明显高于非糖尿病肺结核患者[3].在结核病患者中进行常规、定期的耐药检测,对制定结核病控制规划和化疗方案具有重大意义,传统的结核分枝杆菌耐药性测定方法需时太久,不能满足临床治疗的需要,噬菌体检测法(PhaB)检测结核分枝杆菌的耐药性,具有快速、简便、价廉等特点,而且又有较高的敏感度和特异度[4-5].本研究利用PhaB法检测初治肺结核合并糖尿病患者对一线抗结核药物异烟肼、链霉素、利福平和乙胺丁醇的耐药性,并对结果进行比较,分析肺结核合并糖尿病患者耐药情况,为临床治疗提供参考,现将结果报道如下.

利用噬菌体扩增技术快速检测结核分枝杆菌

结核病是当今全球范围内一个严重的公共卫生问题. 结核病人的细菌学检查,是发现传染源的主要途径和手段.目前常规细菌学检查存在灵敏度低,不易标准化等缺点[1].因此发展特异、敏感、快速、简便的检查方法是大家共同期盼的.FASTplaque TB噬菌体扩增技术就是这样一种方法[2].现报道如下.

噬菌体生物扩增法在分支杆菌鉴定和药敏试验中的应用

噬菌体生物扩增法可用于分支杆菌的快速鉴定及药敏试验.我们应用分支杆菌噬菌体D29进行检测,取得了满足结果.现报道如下.

应用微孔噬菌体扩增法检测结核分支杆菌利福平的敏感性研究

目的:评价应用微孔噬菌体扩增法快速检测临床结核分支杆菌分离株的利福平敏感性.

噬菌体扩增法快速筛选结核分支杆菌对抗结核药物敏感性的研究

目的:利用噬菌体扩增技术对结核分支杆菌临床分离株进行异烟肼和氧氟沙星药物敏感性分析,评价该表型鉴定法的应用价值.

生物制品的分类及使用中的注意事项

应用微生物(细菌、噬菌体、立克次体、病毒等)、微生物代谢产物、寄生虫和动物的毒素、人或动物的血液或组织等,直接制成或用现代生物技术、化学方法制成,作为预防、治疗、诊断特定传染病或其它有关疾病的制剂,统称生物制品.

高守一永不言弃的科学攀登者

高守一是我国著名微生物学及传染病防治专家,他在历史上首次证实埃尔托霍乱在我国的存在,所建立的针对○1群E1 Tor型霍乱弧菌分型的噬菌体一生物分型方案,以及"两类菌株"理论,开创了霍乱防治的先河.

饮水缓释消毒片的制备及灭活水中噬菌体f2的效果评价

目的 研究饮水缓释消毒片制备工艺及其灭活水中噬菌体f2的效果.方法 以高分子载体作为控释剂、有效成分二氯海因与辅剂制粒和压片成型,采用悬液定量噬斑法评价噬菌体灭活效果.结果 硬脂酸镁和聚乙烯醇用量对饮水缓释消毒片的缓释效果和崩解时间有影响.制备的饮水缓释消毒片的缓释时间可达5周以上,有效成分可维持在有效浓度范围.将该缓释片投入水体中,使有效氯浓度维持在0.3 mg/L,作用30 min可完全灭活水中噬菌体f2.水体中pH、水温、色度对缓释消毒片灭活水中噬菌体f2的效果没有显著影响.结论 本研究工艺条件制备的饮水缓释消毒片持续释放时间长,可有效灭活水中的噬菌体f2.

评价防护手套对血传性病毒抗渗透性能

目的 以噬菌体为模型,观察防护手套对经血液传播的病毒抗渗透性能.方法用改良ASTM F 1671 -07标准方法,对一种丁腈检查手套防血液中病毒渗透的性能进行了观察.结果经检测实验组3份手套样品,在试验条件下试验后检测到的噬斑数均＜1 pfu/ml,各对照结果符合试验要求.根据ASTM F 1671 -07标准试验方法要求,证明所试验的防护手套具有良好的抗血液传播病毒的渗透的功能.本试验所采用的方法操作简单,出结果快,可重复性好.结论以φ- X174噬菌体为检测防护材料抗血液穿透能力的检测方法监测结果可信,所检测的防护手套对噬菌体悬液具有良好的抗穿透能力.

纳米银水溶液对噬菌体和细菌杀灭效果的观察

目的 观察纳米银水溶液分别对两种噬菌体和细菌杀灭效果,探讨噬菌体作为病毒指示物的可能性.方法 采用悬液定量杀灭试验方法进行了实验室研究.结果 用含100mg/L纳米银水溶液对大肠杆菌噬菌体MS<,2作用60min,平均灭活对数值均4.00.用1000mg/L纳米银水溶液对大肠杆菌噬菌体T<,4作用24h,平均灭活对数值均<2.00.用含10mg/L纳米银水溶液作用20min即可使大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀灭对数值5.00.结论 纳米银水溶液可有效杀灭大肠杆菌和金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌噬菌体MS<,2和T<,4,此两种噬菌体对纳米银水溶液的抵抗力明显比两种细菌强.

噬菌体对外环境抗力的研究

为了解噬菌体对外环境的抵抗力,采用悬液和载体定量试验方法,对F2噬菌体、T4噬菌体和T7噬菌体在干燥环境和潮湿环境中的抗力进行了观察,并与脊髓灰质炎病毒作平行比较.结果,在温度20℃相对湿度8%～14%的干燥环境中,布片上F2、T4、T7噬菌体下降对数值依次为2.04、3.44、2.83,脊髓灰质炎病毒下降对数值为5.0;在室温下水中,F2、T4、T7噬菌体下降对数值依次为3.75、0.44、0.05,脊髓灰质炎病毒下降对数值为1.72.结论,3种噬菌体和脊髓灰质炎病毒在干燥或潮湿条件下均呈现随时间延长其滴度逐渐下降;在干燥环境中滴度下降速度明显快于潮湿环境;以T7噬菌体对干燥和潮湿环境耐受力强.

流感病毒对消毒处理抗力的比较研究

比较了甲型流感病毒、脊髓灰质炎病毒(PV-1)、F2噬菌体、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌,对巴氏消毒、过氧乙酸、次氯酸钠、二氧化氯、乙醇、碘伏的抗力大小.结果,甲型流感病毒的抗力,明显低于脊髓灰质炎病毒与F2噬菌体的抗力.在相同的试验条件下,甲型流感病毒对消毒处理的抵抗力,与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌接近.由此推论:可以选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌,作为流感病毒消毒处理时的指示微生物,从而达到缩短实验室评价的时间之目的.