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在BACTEC TB 460测定仪上对有关药物药敏试验浓度的初步探索
Bactec 460法能快速报告分支杆菌药物敏感试验结果,通常报告时间为5.2~7.1天,平均为5.7天,比传统的分支杆菌药敏试验方法缩短了22.3天,可以尽快地为临床提供药物敏感试验的结果,及时正确地为病人治疗.但目前实验室在Bactec TB 460测定仪上能够进行药物敏感试验的只限于常用的4种抗结核药物,即链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇,远远不能满足临床需要.为此,本实验室在Bactec TB 460测定仪上对吡嗪酰胺、乙硫异烟胺、对氨基水杨酸钠,丁氨卡那霉素药敏试验浓度进行探索.
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应用PCR-寡核苷酸探针快速检测结核分支杆菌耐药基因突变
目的:结核分支杆菌耐药是结核病治疗中的棘手问题,由于传统的药敏试验方法烦琐而费时,因此,本研究通过快速检测结核分支杆菌耐药基因突变,以期建立一种敏感、特异、简便、快速的分子药敏试验方法,指导临床化疗.
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替加环素体外药敏试验方法学评价及抗菌活性分析
替加环素是甘氨酰四环素类中首个应用于临床的药物,其对肠球菌、葡萄球菌、链球菌以及绝大部分革兰阴性杆菌都有较强的抗菌活性,由于其抗菌谱广、抗菌作用强,已经成为治疗多重耐药菌株的重要选择。但是由于该药物理化特性不稳定(如见光易分解),因此进行体外药敏试验对环境的要求比较高,且目前美国临床和实验室标准协会( CLSI )标准中尚无替加环素体外药敏检测的操作指南和结果判定标准,本研究旨在评价各种体外药敏试验方法检测替加环素药敏结果的可靠性并了解其对临床主要革兰阴性杆菌的耐药特性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。
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embB基因突变与结核分支杆菌耐乙胺丁醇的关系
对embB基因突变与结核分支杆菌耐乙胺丁醇之间的关系进行研究,以期建立敏感、特异、简便、快速地检测结核分支杆菌耐乙胺丁醇基因型的分子药敏试验方法.
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E test测定酵母样真菌药物敏感试验初步应用
酵母样真菌已成为医院内感染的主要病原之一,体外药敏试验对合理筛选抗真菌药物、发现耐药菌株等有重要意义[1].NCCLS的"M27-T"酵母样真菌大量稀释法药敏试验方法比较繁琐[2].近,瑞典的AB.Biodisk公司推出了酵母样真菌药敏试验E test试纸条.我们以"M27-T"为参比方法,对标准菌株和临床菌株进行MIC测定,比较E test 与"M27-T"所测结果的符合程度,并对E test方法学特点和MIC检测的临床意义作了初步评价.
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临床厌氧菌体外药敏试验
随着抗厌氧菌药物长期广泛的应用,厌氧菌对某些药物的耐药性也呈上升趋势,出现部分脆弱类杆菌对甲硝唑产生耐药性如小抑菌浓度(MIC)>128 μg/ml,克林霉素耐药菌株明显增加.绝大多数脆弱类杆菌,部分普雷沃菌和梭杆菌,对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药.对头孢菌素类和头霉素类抗生素耐药率有所增加.由于厌氧菌分离、培养和药敏试验所需要的时间较长,因此怀疑有厌氧菌感染时应在经验给药的同时做药敏试验,只纯粹依赖经验用药有可能导致治疗失败.依据药敏结果合理选药可以减少经验治疗的盲目性.厌氧菌药敏试验的结果可因地区、医院不同而各有差异,一个实验室的药敏结果不能适用于所有医院,这就需要广大实验室依据不同病人情况,各自开展厌氧菌药敏试验,使厌氧菌感染治疗个体化.我们参照美国临床实验室标准委员会(NCCLS)2001 年第五版推荐的厌氧菌药敏试验方法并结合我们在做厌氧菌药敏试验过程中的体会简介厌氧菌体外药敏试验方法及值得注意的问题.
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抗菌药物敏感试验中需注意的问题
细菌耐药性已成为一个日益严重的全球性公共卫生问题,突出表现在产生耐药的速度越来越快,耐药的程度越来越重,耐药的细菌越来越多,耐药的频率越来越高,耐药造成的后果越来越棘手,耐药造成的负担越来越沉重.因此,药敏试验的作用显得愈加重要.由于细菌耐药的机理和程度各不相同,选择正确的药敏试验方法和指征,了解有关知识,控制各种影响因素,对做好抗菌药物敏感试验,获得正确结果至关重要.本文就抗菌药物敏感试验中需注意的问题做一简要论述.
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微量显色酵母菌药敏试验方法初步应用
临床酵母菌目前已成为医院感染的主要菌群之一,体外药敏试验对于合理筛选抗真菌药物,发现耐药菌株等有重要意义[1].为此,我们参照文献[2]介绍一种"YeastOne微量稀释显色法酵母菌药敏试验"方法,并以美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的"M27-A"方法为参考,对其方法学特点作初步评价.
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产孢丝状真菌NCCLS药敏试验方法的应用
美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)于1997年推出了关于酵母菌的液体培养基稀释(多量法与微量法)抗真菌药敏试验方案M27-A,建立了被众多实验室认同的重复性好、准确性较高的标准化体外药敏试验方法。但由于丝状真菌本身的诸多特点如产孢条件难以控制、接种量难以精确量化、孵育时间长等,使其试验方法标准化具有一定难度。近年来NCCLS分会成员以M27-A的微量法为基础进行了多中心广泛深入研究[1,2],于1998年提出了《产孢丝状真菌的液基稀释抗真菌药敏试验参考方案》(M38-P)。该方案在提出了一些建设性意见的同时,重申了多量法与微量法的一致性。现将其方法简介如下。 一、材料和方法 1.抗真菌药物:测试用药物包括氟康唑(FCZ),5-氟胞啶(5-FC)、酮康唑(KCZ)、伊曲康唑(ICZ)和两性霉素B(AmB)。药物来源、贮备液的制备等同M-27方案[3]。 2.被检测的真菌:本方案主要针对常见侵袭性真菌感染的菌种:曲霉、镰刀霉、根霉,波氏假阿利什霉及申克孢子丝菌的菌丝相。不包括其他非产孢丝状真菌,也不适应于双相真菌的酵母相。 3.培养基:建议应用RPMI-1640培养基,配制方法要求同M27-A方案。 4.真菌接种液的制备:(1)为保证受试菌的纯度及活性,需在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上35℃培养7 d或35℃培养48~72 h后,转至25~28℃至7 d(镰刀菌)。(2)取1 ml无菌0.85%盐水加入培养7 d的培养皿中,用巴氏吸管轻轻抽吸,制备菌悬液(加入1滴吐温20将有利于曲霉的接种),将菌悬液吸至无菌试管中,静置3~5 min后,取上部匀质液体(含孢子或孢子囊孢子和菌丝片断),在振荡器上振荡15 s。(3)用分光光度计调整菌悬液浓度,波长530 nm,A值曲霉、申克孢子丝菌0.09~0.11,镰刀霉、波氏假阿利什霉及根霉0.15~0.17。(4)将上述菌悬液用RPMI-1640稀释50倍得2倍终浓度(0.4~5×104)的菌悬液备用。(5)为保证试验准确性应做菌落计数,取0.01 ml终浓度菌悬液接种于改良的沙氏萄葡糖琼脂培养基的平皿中(28~30℃),每天观察并计数肉眼可见的真菌菌落(尤其是对于镰刀菌),孵育时间为24 h以内(镰刀菌)至5 d(波氏霉)。 5.液体培养基的接种:在96孔板的1~10列孔中每孔加入0.1 ml的2倍终浓度的菌悬液。每次试验均应包括质控、参考菌株。 6.培养:35℃条件下(不要摇动)大多数菌需46~60 h判定低抑菌浓度(MIC)结果,根霉则需21~26 h,波氏假阿利什霉则需70~74h。
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何谓MIC?分枝杆菌药敏试验为什么要测定MIC?
答: MIC是在一定培养时间内可抑制99%以上的菌生长的低药物浓度.目前,由于临床上耐多药结核分枝杆菌(结核菌)和非结核菌感染的增多,常规抗结核药敏试验方法已不适用于它们,而且一些新的抗结核药物也无药物是否敏感的判断标准,在采用某一药物治疗前,好先进行此药物MIC测定,以便于临床用药.
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葡萄球菌诱导型克林霉素耐药的检测
许多临床微生物实验室采用仪器或肉汤微量稀释法进行抗生素敏感试验.这两种方法能检测大多数抗生素耐药机制,但是不断增加的葡萄球菌诱导型克林霉素耐药(MLSBi)用标准的药敏试验方法不能检测.
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肠球菌的耐药特点及药敏试验方法
肠球菌是临床较常见的一类细菌.据近些年的报道,肠球菌已成为医院感染中重要的病原菌,危害性越来越大.肠球菌往往对抗生素耐药或高度耐药,实验室能否准确检出耐药菌株对抗感染治疗的成败十分重要.针对肠球菌的药敏试验方法,国外进行了相当多的研究,确定了一整套科学的方案.以下将有关问题作简要介绍.
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简介美国临床实验室标准化委员会新推荐厌氧菌药敏试验方法及评价
由于厌氧菌的分离、鉴定和药敏试验技术较复杂, 并受试验成本高等条件限制[1],国内很多实验室不能开展厌氧菌鉴定和药敏试验工作[2-7].即使是国外,多数临床医生治疗的依据,也是凭经验和文献资料.然而,近10年来,厌氧菌的耐药率不断增高.本讲将探讨常见厌氧菌对常用于治疗厌氧菌抗生素的耐药机制;简要介绍美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)2001年新推荐的药敏试验方法,以及对2种适合常规使用的药敏方法的评价, 供临床和实验室参考.
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药敏试验的再认识
抗生素广泛使用,甚至滥用,造成耐药的细菌越来越多,药敏试验的作用显得愈加重要.由于各种细菌耐药的机理和程度互不相同,不同的药敏试验方法,检测结果会存在一定差异.对于药敏试验的理解和使用中应注意的问题,概括如下几点.
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浅谈药敏试验方法及影响试验结果因素
本文探讨细菌药敏试验方法及影响试验结果因素。做好药敏试验质量控制。避免用药不当,产生耐药菌株或原有耐药菌株耐药性的增高。细菌药敏试验方法包括:试管稀释法(全量法)、微量稀释法、琼脂稀释法、纸片琼脂扩散法、β-内酰胺酶(青霉素酶)试验、筛选耐甲氧苯青霉素葡萄球菌的方法。并探讨影响试验结果因素。做好药敏试验质量控制。避免用药不当,产生耐药菌株或原有耐药菌株耐药性的增高。
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腐生葡萄球菌所致婴儿剥脱性皮炎1例
患儿女,8个月。无明显诱因出现全身皮肤发红,头枕部出现大小不等的疱疹,伴阵发性哭闹;疱疹逐渐增多,延至颈、面部,且渐增大,融合成片,有清亮液体渗出;双眼发红,眼分泌物增多,疱疹延至躯干、臂部,经当地医院医治无效,于1999年5月12日转入我院。诊断为剥脱性皮炎。体检:体温37.5℃,一般情况差,热性病容,咽充血。全身皮肤红肿,大腿、胸背部及上臂部可见水疱,颜面、头颈、会阴、肛周大片脱皮有液体渗出,局部破溃糜烂,口周皮损呈放射状分布,口唇粘膜形成硬壳。实验室检查:白细胞12.2×109/L,N 0.57,L 0.43。从患儿颈部疱疹、眼及阜部分泌物取样培养,均检出腐生葡萄球菌,细菌鉴定程序及药敏试验方法均依照卫生部统一的《全国临床检验操作规程》进行。
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恶性肿瘤体外药敏试验方法
化学治疗仍然是治疗恶性肿瘤的重要手段之一,近二十年来,虽然某些恶性肿瘤的治疗获明显的改善,但效果不理想,同一组织类型,分化程度相同的肿瘤,对同一药物的敏感性不同,因此在化疗前进行药敏测定十分必要.本文对一些常用恶性肿瘤体外药敏试验方法作一综述.
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利拉萘酯对常见病原性丝状真菌的体外抗菌活性观察
利拉萘酯(liranaftate)为新一代硫代氨基甲酸类药物,主要用于治疗皮肤浅部真菌感染.近年来,真菌体外药敏试验方法不断增多[1-3],但对丝状真菌而言,目前仍以2002年美国国家实验室标准委员会(NCCLS)颁布的M38-A方案[4]为标准.本文参照此方案,以微量稀释法对251株皮肤癣菌、孢子丝菌、暗色真菌等作了体外敏感试验,观察利拉萘酯对上述菌种的抑制作用.
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普外科感染致病菌分布及抗菌药物使用情况分析
由于手术创伤、导管植入等多种感染的高危因素[1],导致普外科抗菌药物广泛使用,现已成为医院进行抗菌药物监测的重点科室之一.我科根据2009年~2010年检出的感染致病菌的分布特点及耐药情况,并结合同期普外科抗菌药物的使用情况进行统计分析,现报道如下.资料与方法1.标本来源我院2009年~2010年普外科送检标本,包括痰、血、尿及其他体液.2.药敏试验方法 按《全国临床检验操作规程》(第3版)进行规范化操作,结合自动微生物分析仪(VITEK- AMS)完成菌株鉴定;采用K-B法进行药敏试验,按照美国临床实验室标准化研究所(CLSI)标准进行判读.
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白色念珠菌的药敏试验及分析
近年来我们对从临床标本分离培养的68株白色念珠菌,根据美国临床实验室标准化委员会确定的抗真菌药敏试验方法,应用法国梅里埃公司生产的试剂,进行了药敏试验,以供临床诊治真菌感染时参考,报道如下.