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从纯净水中检出铜绿假单胞菌
山东省卫生防疫站在常规检验过程中,发现某厂纯净水在菌落计数的营养琼脂平板上出现未曾见过的异常菌落,该菌落呈雪片状或花朵状,呈5~8个边不等的多边形,5 mm~7 mm大小,中心圆形,有与边数相等的轮状辐射线直达边缘中心,表面光滑湿润,灰色带有浅绿色荧光,闻之有僵蚕味,革兰氏染色为阴性短小杆菌,菌体中心染色稍浅.
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蓝谱Loopamp?结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂盒
结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂盒,是由盖茨基金会赞助,日本荣研与FIND基金会共同研制,WHO全球推荐的结核病诊断新方法。是适合于现场快速检测结核分枝杆菌复合群的重要分子诊断产品。该试剂盒产品将反应试剂干粉化处理,集中保存于反应管盖中,可在常温条件下保存与运输。配套PURE-LAMP前处理试剂,操作简便。检测结果通过仪器自带的荧光目视检测单元进行绿色荧光的判读。配套仪器包括PURE前处理模块,LAMP?反应扩增模块,荧光目视检测模块三部分,可在一小时之内完成检测。
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蓝谱Loopamp?结核病检测试剂盒
由盖茨基金主导,日本荣研研制的TB-LAMP?肺结核快速检测试剂盒已得到WHO认可,将于今年面向全球发展中国家政府进行推荐。TB-LAMP?采用干粉试剂,可常温运输,并配套简便前处理试剂,无需复杂仪器,1小时内即可完成现场检测,可通过绿色荧光进行结果判定,被WHO推荐为适合现场快速检测结核病防控的重要产品之一。
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流式细胞仪进行干细胞绝对计数的方法
干细胞移植对于白血病等多种疾病的治疗具有重要意义,而准确的干细胞绝对计数对于干细胞移植的成败又十分重要。流式细胞仪结合荧光单抗技术为干细胞绝对计数提供了一种快速、定量、重复性好的方法。本文介绍利用流式细胞仪进行干细胞绝对计数的原理、方法及意义。 1 流式细胞仪简介 流式细胞仪是对悬浮状态的细胞逐个计数并记录其有关参数的细胞分析仪器,因其测量速度快,在很短时间内可以分析大量细胞,并能测出多个参数,在临床上有广泛的应用。流式细胞仪能测量细胞的五个参数:前向角散射光(FSC)、侧向角散射光(SSC)、绿色荧光(FL-1)、黄色荧光(FL-2)和红色荧光(FL-3)。FSC和SSC是细胞对激发光的散射信号,分别反映了细胞的大小和细胞的粒度:细胞越大,胞内颗粒越多,则FSC和SSC越强。例如在外周血中,根据细胞大小及胞内所含颗粒性物质的多少,可区分出淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。粒细胞有较大的核或较多的颗粒,细胞直径也比淋巴细胞大,因而其FSC和SSC均比淋巴细胞强。
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锌指蛋白ZNF580定位在MGC803细胞核
新基因(AF184939)ZNF580是由本组克隆并于Genbank 注册的C2H2型锌指蛋白转录因子基因,其cDNA 748~1266 bp之间的碱基构成一个完整的开放阅读框,编码172个氨基酸.蛋白功能基序分析表明:其羧基端序列中含有3个重复串联的C2H2型锌指蛋白主构域:CX2CX3FX5LX2HX3H(X代表保守性差的氨基酸),富含脯氨酸残基的氨基端序列为转录激活结构域[1].利用绿色荧光(green fluorescence protein,GFP)在活细胞内的示踪作用[2],我们将GFP与ZNF580cDNA开读框融合,导入胃癌MGC803细胞株中,直观地观察到ZNF580基因在细胞内的表达及亚细胞定位,为阐明新基因ZNF580的功能奠定了基础.
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体外诱导的皮肤源性神经干细胞在大鼠受损伤脊髓内的存活和分化
为寻找新的神经干细胞来源用于治疗急性脊髓损伤的实验研究,本实验采用绿色荧光大鼠(GFP转基因鼠)有毛皮肤在体外经剪碎,胰酶消化,过滤细胞,无血清培养液培养分离细胞,用表皮生长因子和成纤维细胞生长因子促进细胞增殖,去除生长因子后用含血清培养液培养细胞等过程,采用神经上皮于细胞蛋白(nestin)、微管相关蛋白(MAP2)、神经丝蛋白(NF-200)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)抗体免疫细胞化学染色法对培养细胞的分化状况进行鉴定.
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紫外线照射对腺病毒气溶胶活力和粒级分布的影响
目的 研究紫外线照射对腺病毒气溶胶活力和粒级分布的影响.方法 在2000L的腔室中通过TK-3微生物气溶胶发生器将绿色荧光蛋白(GFP)标记的腺病毒形成气溶胶,暴露在预先设定波长的紫外线下,用多级撞击式空气微生物采样器进行采样.对采样样品进行实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测基因组拷贝数.通过在荧光显微镜下计数带绿色荧光的PK15细胞数可直观检测病毒的感染力及活力.结果 带有绿色荧光的PK15细胞数及FQ-PCR检测结果均提示所采集的病毒气溶胶主要分布在第6级.波长为254 nm的紫外线照射5 min时,在显微镜下观察到的荧光数明显减少.波长为254 nm紫外线照射30 min时,6个级别的细胞内均未见绿色荧光.波为365 nm紫外线照射30 min时,绿色荧光数仍较多.波长为254 nm的紫外线照射30 min时没有观察到有绿色荧光的细胞,但是FQ-PCR结果提示病毒基因组拷贝数仍较高.结论 波长为254 nm的紫外线比365 nm的紫外线照射灭活腺病毒气溶胶的效果更显著.两种波长的紫外线照射对腺病毒气溶胶的粒级分布没有显著影响.病毒基因组的存在并不能代表病毒有感染力.
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双功能融合基因在肝癌细胞中的表达与作用
目的:构建含有融合基因FCUl的自杀基因系统,观察其对体外培养肝癌细胞的杀伤效应.方法:将FCUl基因亚克隆于pEGFP-C1载体,转化大肠杆菌DH5α,阳性重组子转染肝癌细胞HepG2,绿色荧光蛋白检测FCUl的表达,用G418筛选出阳性细胞克隆后,进行体外药物敏感实验,观察旁观者效应.结果:FCUl基因正确插入到pEGFP-C1中,pEGFP-FCUl转染成功的细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,在5-FC作用下细胞的生长抑制率明显高于未转染细胞,且旁观者效应显著.结论:本基因治疗体系具有很好的体外杀肿瘤效果,为肝癌的基因治疗提供了一个新的选择.
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腺病毒增强转铁蛋白受体介导的针对突变型P53的大酶转染可促进肝癌细胞凋亡
目的:通过腺病毒增强的转铁蛋白受体介导法(AVET)将针对突变型p53(mtp53)的大酶(Maxizyme)基因转入肝癌细胞后篌对肝癌细胞凋亡的影响,探索AVET用于肝癌基因治疗的可行性,为肝癌的基因治疗探索一条新途径.方法:以带有mtp53基因的人肝癌细胞株MHCC97细胞为模型,用腺病毒增强转铁蛋白受体介导法将针对mtp53的pEGFP-Maxizyme基因和空载体pEGFP分别导入MHCC97细胞,荧光显微镜观察细胞转染情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mtp53 mRNA表达水平的变化,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测转染后对细胞凋亡的影响.结果:转染后48h荧光显微镜下可见呈细胞形态的绿色荧光.收集细胞检测,实验组mtp53 mRNA表达水平与空载体组和空白对照组相比,基因扩增条带亮度明显减弱,mRNA表达水平下降(P<0.05);DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型的凋亡梯带(DNA Ladder);流式细胞仪分析显示细胞凋亡水平增高,凋亡指数22.95%,显著高于对照组的2.37%(P<0.05).结论:腺病毒增强转铁蛋白受体介导的基因转移系统可将pEGFP-Maxizyme有效的转染到肝癌细胞株MHCC97中,Maxizyme在细胞内成功的切割了mtp53 mRNA,促进了肝癌细胞的凋亡,这为腺病毒增强转铁蛋白受体介导法在肝癌基因治疗中的应用提供了实验依据,也为肝癌的基因治疗提供了一条新途径.
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不同标记方法对大鼠骨髓间充质干细胞标记的研究
目的 观察Hoechest33342、BrdU、DAPI对大鼠BMSCs标记情况,比较其标记效果的差异性;培养转基因绿色荧光小鼠的BMSCs,观察细胞生长情况和其荧光持续时间,比较其与荧光标记后的干细胞之间的优越性.方法 贴壁筛选提取大鼠BMSCs,培养至第三代,流式细胞仪检测其表面抗原,成骨、成脂诱导后染色;Hoechest33342、BrdU、DAPI标记大鼠BMSCs,检测标记后的大鼠BMSCs增殖率,显微镜下观察其荧光持续时间;观察转基因绿色荧光小鼠BMSCs在培养的不同时间段的细胞形态、荧光持续时间以及同上边3种标记方法比较的优缺点.结果 Hoechest33342、BrdU、DAPI可用于对BMSCs的标记;BrdU标记过程较长,在前期不存在荧光猝灭缺点,标记后经过荧光免疫组化处理后可见阳性细胞,Hoechest33342、DAPI标记过程较短,荧光持续时间较长,但此过程中必须避光,对操作带来了一定的困难.3种方法标记后对细胞增殖率无影响;转基因小鼠BMSCs生长较大鼠干细胞生长较慢,其优点是不用标记且荧光持续时间较长,用于细胞追踪研究更为方便可行.结论 干细胞有多向分化的潜能,因此有很好的研究价值和应用价值,对干细胞进行标记,为干细胞迁移、归巢机制的研究提供更好的研究平台.
关键词: 绿色荧光 Hoechest33342 Brdu DAPI 细胞标记 -
胰腺星状细胞研究进展
1982年Watari等给予小鼠负载维生素A,第一次用免疫荧光和电子显微镜描述小鼠胰腺的维生素A储存细胞,在328nm紫外光下,胞浆内的维生素A发出特征的迅速减弱的蓝绿色荧光.1990年Ikejiri用电子显微镜在正常人和大鼠胰腺识别这种细胞.1998年Apte和Bachem等用密度梯度离心法分别从大鼠和人类胰腺组织中分离、培养出星状细胞[1,2].
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一种应用绿色荧光蛋白筛选小鼠原位膀胱癌模型的非侵入实验方法
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氯化钠注射液含量测定方法的改进
氯化钠注射液的含量测定,《中国药典》2000年版[1]采用吸附指示剂荧光黄的银量法.本品pH值为4.5~7.0.实验中发现,当本品或含量测定所加水的pH值较低时,待滴定溶液仅显淡黄色,不能呈现强烈的黄绿色荧光,滴定终点突跃不明显,不能够准确地反映出本品的真实含量.为此,笔者对其含量测定方法进行了改进,突跃十分明显,并做了对比实验,结果较为满意.
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绿色荧光蛋白在KM小鼠体内的表达
目的 探讨并建立KM小鼠胚胎的可视化研究平台.方法 采用GFP雄鼠附睾尾部精子与KM雌鼠的卵母细胞在培养液中进行体外受精和体外培养,通过荧光显微镜观察胚胎.结果 在荧光显微镜下观察GFP雄鼠的精子没有绿色荧光表达,当让其与KM雌鼠进行体外受精后,得到的受精卵有绿色荧光表达,并且荧光的表达有强有弱.结论 绿色荧光表达的强弱可以作为小鼠胚胎生活力的标志.
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铜绿假单胞菌污染矿泉水调查分析
博兴县银河源矿泉水厂是一家单一生产19 L桶装饮用天然矿泉水的小型矿泉水厂.1999年6~7月,对该厂矿泉水进行3次采样检测,现将检测结果报告如下:现场卫生学调查.主要了解工厂卫生防护状况、工艺流程、设备及从业人员基本情况,重点了解卫生设施和使用情况.采样方法.按工艺流程自水源水出井至仓库内存放成品分段常规采样.水样用无菌玻璃瓶装,瓶盖酒精火焰严格消毒后封口待检;随机抽取消毒空桶一只,加入300 mL无菌生理盐水反复振荡60次,将生理盐水回收至无菌玻璃瓶中封口待检.菌落总数、大肠菌群及水源水中污染指标检验按GB/T8538-1995<饮用天然矿泉水检验方法>.铜绿假单胞菌的鉴定按水质检验常规,在琼脂培养基上长出带有绿色荧光菌落,通过钢绿假单胞菌鉴定程序确定.
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化学发光数字成像系统敏感性及图像质量的比较分析
目的:比较五种成像系统对荧光和化学发光的敏感度及其图像质量.方法:运用标准板及绿色荧光鼠的图像采集比较五种成像系统对荧光的敏感度及图像质量.结果:ECL化学发光灵敏度测试及绿色荧光敏感性检测均发现Azure和GE较其他三种成像系统的检测时间短,图像质量优.结论:五种成像仪中,GE的光敏感性高,图像质量好.Azure的光敏感性次之,图像质量较好,但性价比较高.
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两种荧光素钠试敏方法的分析比较及护理
眼底荧光素钠血管照影是眼科临床诊治眼底病的常用检查方法.其基本原理是将某种能够发出荧光的物质如荧光素钠,快速注入被检查者静脉内循环至眼底血管中,受蓝光的激发而产生黄绿色荧光;利用眼底照相机观察并及时拍摄眼底血循环的动态过程,对眼底病的诊断、鉴别诊断指导治疗方面有极大的帮助.
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大剂量急性白磷中毒抢救成功1例
患者男性,15岁.因服白磷后头痛、腹痛、呕吐36 h于2002年6月27日步行住院.患者于2002年6月25日10:30pm口服白磷先后6次,每次约1~2 g,总量约10 g,即服即吐,呕吐物可见淡绿色荧光,为黏液混有少许咖啡样物,呕吐约20次/d.同时出现上腹部持续性灼痛,伴阵发性绞痛,解黑色黏液便1次,量中等,第2天大便正常.自觉头痛头晕,面部麻木,四肢无力,体力不支.心悸、胸闷.患者未进晚餐,饮水较多.入院体检:T 36.7℃,P 48次/min,R 20次/min,BP 100/60 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa).心界不大,早搏0~1/min,心率48次/min,未闻及病理性杂音.腹平软,上腹部明显压痛,无反跳痛,肝肋下1 cm,质软,明显触痛,肝区、双肾区明显叩击痛.入院诊断:急性白磷中毒.
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眼底荧光素血管造影的护理体会
眼底荧光素血管造影(FFA),是将具有荧光特色的造影剂快速注入受检者静脉内,经血循环至眼底的血管中,在特定的波长光(蓝光)的激发下而产生的黄绿色荧光.同时,用高速眼底摄影机,连续拍摄眼底血循环的动态过程.以及荧光素在组织中扩散的形态和部位,为临床诊断提供有价值的客观依据[1].一般机体对荧光素有较好的耐受性,少数有轻微的恶心、呕吐等不良反应,个别病例会发生休克死亡的严重并发症.我院自2012年1月至2012年6月间,共进行眼底荧光素血管造影234例.现将护理体会报告如下.
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间接荧光抗体试验在主要寄生虫病监测中的应用进展
间接荧光抗体试验(IFAT)是通过将荧光素与抗人免疫球蛋白或其他第二抗体在不影响抗体免疫特性的情况下,用化学方法结合起来,制备成荧光抗体.当作为检测用的未标记的抗原(或抗体)与待测标本中相应的抗体(或抗原)结合成抗原-抗体复合物时,加入荧光抗体与之结合形成免疫荧光复合物,即可在荧光显微镜下显示亮绿色荧光,从而间接地显示出待测标本中存在着相应抗体(或抗原).IFAT早用于寄生虫病的血清学检测始于上世纪60年代,随着寄生虫抗原制备方法的不断完善和荧光标记技术的成熟以及荧光显微镜的普及,IFAT的用途不断拓展.限于篇幅,本文仅对IFAT在血吸虫病、疟疾和丝虫病监测中的应用进展进行综述.