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放线菌素D对V79靶细胞和旁观者细胞凋亡的影响
目的 用放线菌素D( actinomycin D,ACTD)处理V79细胞后,获取处理后不同时段去细胞培养液( conditioned medium,CM)培养细胞,观察ACTD对靶细胞和旁观者细胞的细胞活力和凋亡的影响,研究ACTD能否诱导旁观者效应的发生,为研究化学物所致的旁观者效应及其机制提供实验依据.方法 用不同剂量ACTD(0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2和6.4 μmol/L)处理V79靶细胞1和4h；选择3.2 μmol/L ACTD作用1h开始计时,分别在4、8、12和24h取靶细胞去细胞培养液(CM),培养正常细胞24 h后,进行旁观者效应的观察.MTT法测定细胞活力；流式细胞仪检测细胞凋亡、坏死率.结果 随着ACTD剂量的增加,靶细胞的活力下降,存在明显的剂量-效应关系(P＜0.05).3.2 μmol/L作用1h细胞活力接近50％且稳定.凋亡率随剂量增加而增加,而作用4h各剂量组凋亡率下降坏死率升高,考虑到足够高的凋亡率又避免损失过多的旁观者因子,故选择3.2 μmol/L作用1h作为处理因素来获取CM.旁观者细胞存活率随着时段的延后增加而凋亡率逐渐下降(P＜0.05),在24 h时段均有一个反弹,但均以4hCM诱导的旁观者效应强.旁观者细胞主要死亡类型是凋亡.结论 ACTD可以诱导旁观者效应的发生,4h无细胞培养液(CM)诱导旁观者细胞损伤的作用强.旁观者细胞死亡以凋亡为主.
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放射诱导旁观者效应的研究进展
放射诱导的旁观者效应(RIBE)指未被直接辐射的细胞变现出与受照射细胞相类似的应答反应,这一现象的存在已经得到大量实验的证实.然而从发现该现象至今,其精确机制仍然不清楚.研究发现该现象的发生与多种机制相关,包括细胞缝隙连接(GJ)、可溶性因子的分泌、氧代谢等.现对放射诱导旁观者效应的研究方法和可能涉及的机制做一综述.
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TK／GCV系统对骨肉瘤MG-63细胞杀伤的体外实验研究
目的：探讨脂质体介导的TK/GCV系统对骨肉瘤MG-63细胞的杀伤作用以及所产生的旁观者效应。方法：脂质体介导TK基因体外转染骨肉瘤MG-63细胞，倒置荧光显微镜观察细胞转染是否成功，流式细胞仪检测转染细胞与未转染细胞的转染效率。将未转染的骨肉瘤MG-63细胞分为3组，实验1组用转染TK/GCV的细胞上清液与原培养液按1/10、1/7、1/5、1/2比例混和液培养；实验2组用0．22μm滤器过滤的转染后的细胞上清液与原培养液按1/10、1/7、1/5、1/2比例混和液培养；对照组用培养液培养，四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法分别测定各组细胞的生长抑制率及骨肉瘤细胞对TK/GCV系统的敏感性。结果：经TK基因转染的MG-63细胞，倒置荧光显微镜下有大量绿色荧光蛋白表达，流式细胞仪检测转染TK基因的细胞转染效率可达75．5％。6 d后MTT检测结果显示实验1组中各比例浓度的混合培养液对细胞的抑制率与对照组相比有统计学意义（P＜0．05）；实验2组中1/10、1/7比例浓度的混合培养液对细胞的抑制率与对照组相比差异无统计学意义（P＞0．05）。经TK基因转染的MG-63细胞随GCV浓度增加，细胞凋亡率增加。结论：脂质体介导的TK/GCV系统能够通过旁观者效应抑制骨肉瘤MG-63细胞的生长。
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超声微泡介导自杀基因对卵巢癌细胞的抗瘤效应
目的 探讨超声微泡介导自杀基因对卵巢癌SKOV3细胞抗瘤效应的机制.方法 采用适超声转染参数,以超声介导微泡转染pORF-HSV1 TK质粒,将SKOV3细胞分成6组:阴性对照组(C组)、超声辐照组(U组)、脂质体组(L组,阳性对照组)、脂质体+超声辐照组(L+U组)、脂质体+微泡+超声辐照组(L+M+U组)和微泡+超声辐照组(M+U组).以RT-PCR检测HSV1TK的表达,以MTT测定各组细胞增殖抑制率.光镜下观察各组转染细胞数量、形态变化,以流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率及细胞周期.结果 L+M+U组HSV1 TK基因表达强,细胞增殖抑制率明显高于其他组(P均＜0.05),且光镜下细胞数量减少多,形态明显异常；其细胞凋亡率为(49.13±0.82)％,且大多数细胞周期被阻断于G1期(P＜0.05).结论 超声介导微泡能增强HSV1TK/GCV系统抑制SKOV3增殖和诱导SKOV3凋亡的作用,且将SKOV3细胞周期阻断在G1期,从而发挥抗瘤效应.
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放射诱导旁观者效应研究进展及临床意义
本文回顾分析了放射诱导旁观者效应（RIBE）近年来体内外实验研究进展。体外实验分析表明RIBE的产生与放射性类型、氧化新陈代谢及细胞缝隙连接细胞间通讯密切相关；体内实验分析表明RIBE产生与远位放射效应所致的炎症应答、放射源改变等。临床放疗治疗过程中，直接受照射细胞和旁观者细胞DNA损伤效应是有差异的，并且RIBE在精确放疗过程中比常规放疗体现更为明显。
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大鼠肝癌细胞HSV-tk/GCV自杀基因系统的构建及其旁观者效应
目的:构建针对大鼠肝癌细胞的HSV-tk/GCV(以下简称tk/GCV系统)自杀基因治疗系统,建立比较tk/GCV系统作用效果及其旁观者效应大小的细胞模型和检测方法.方法:用包装细胞PT67/tk分泌的重组逆转录病毒的活性颗粒感染大鼠肝癌CBRH7919细胞,用G418筛选3 wk获得高耐药性的重组子CBRH7919/tk,扩大培养.提取CBRH7919(tk-),CBRH7919/tk(tk+)细胞的DNA,把HSV-tk基因片段用Dig标记为探针后,与2种DNA及阳性对照DNA进行点杂交,以检测tk+细胞的DNA是否整合有HSV-tk基因.用0.1、1、10、50、100mg/L的GCV体外作用于tk-、tk+细胞,MTT检测存活率.用GCV体外分别作用于含不同比例tk+细胞的tk+、tk-混合细胞,MTT检测存活率,比较分析各组旁观者效应大小,确定后续实验的合适tk+比例.结果:用G418筛选3wk后获到高耐药性的CBRH7919/tk(tk+)重组细胞HSV-tk基因片段用Dig标记为探针后进行点杂交,检测到tk+细胞DNA上已整合有HSV-tk基因,而tk-细胞DNA不合HSV-tk基因.GCV对tk+细胞生长抑制和细胞毒作用明显,而且有浓度、时间依赖性,而tk-细胞对GCV不敏感,说明HSV-tk基因已表达且表达产物具有生物学活性.GCV对含5%和10%tk+的混合细胞杀伤率分别为6.0%和25.2%,结果表明5-10%的tk+混合比例下自杀基因系统自身的旁观者效应较低,而且用MTT检测旁观者效应大小时灵敏度比较高,可作为后续研究中药活性成分对旁观者效应增效作用的tk+、tk-混合比例.结论:成功构建了针对大鼠肝癌的HSV1-tk/GCV自杀基因治疗系统,建立了体外快速筛选旁观者效应增效药物的稳定有效的细胞模型和检测方法.
关键词： HSV1-tk/GCV自杀基因系统 肝癌 大鼠 旁观者效应 -
丹参注射液和三七总皂甙对大鼠肝癌细胞及自杀基因旁观者效应的影响
目的:探讨丹参注射液和三七总皂甙对大鼠肝癌细胞及自杀基因旁观者效应影响.方法:丹参注射液和三七总皂甙以不同浓度与GCV分别或共同作用于大鼠肝癌CBRH7919的tk-细胞,以及含5-10%tk+细胞的tk+和tk-混合细胞,MTT检测各组存活率(n=3,6),两两比较分析各组存活率的差异,并用q值分析中药与自杀基因系统联合的相互作用是否具有协同性.q值为联合用药时实测药效与理论药效的比值,q≤0.85为拮抗作用,0.85≤q＜1.15为相加作用,q≥1.15为协同作用.结果:5,10,20,40 mL/L的丹参注射液作用于CBRH7919细胞,72 h存活率分别为81.0±17.3%,55.6±12.0%,14.6±4.4%,11.5±0.9%;IC50为11.4 mL/L.丹参注射液联合tk/G CV系统对肝癌细胞的作用:5%tk+/GCV组存活率为78.9±27.9%,GCV组为84.3±18.2%,前者比后者仅多了5% tk+细胞,相对抑制率7.6%;5 mL/L丹参联合5% tk+/GCV组存活率为47.8±14.5%(q=1.60),5 mL/L丹参+GCV组的存活率为72.8±4.5%,前者比后者唯一差异条件也是多了5% tk+细胞,相对抑制率34.3%(P=0.049);10 mL/L丹参联合5%tk+/GCV组的存活率为12.2±5.9%(q=1.46),10 mL/L丹参+GCV组的存活率为36.5±2.7%,前者比后者仅多了5%tk+细胞,相对抑制率66.6%(P=0.003).10,50,100,140 mg/L三七总皂甙作用72 h细胞存活率分别为104.1±3.7%,107.6±3.1%,69.7±8.5%,59.3±2.9%;IC50为220 mg/L.三七总皂甙联合tk/GCV系统对肝癌细胞的作用:10%tk+/GCV组比GCV组存活率下降了17.2%(P＜0.05),50 mg/L和100 mg/L三七总皂甙联合10% tk+/GCV组存活率(q=0.89,0.87)分别比相应的三七总皂甙+GCV组下降了17.7%和18.3%.结论:丹参注射液有明显抑制癌细胞生长作用,并能协同性增强tk/GCV系统对癌细胞的杀伤作用,增强自杀基因旁观者效应.三七总皂甙能一定程度抑制癌细胞生长,但对tk/GCV系统杀伤癌细胞只有加和作用,未发现有协同性作用.
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CD/5-FC自杀基因体系在正常免疫力动物体内的抑瘤及旁观者效应
目的:观察阳离子脂质体介导的CD/5-FC自杀基因体系协同γ-IFN在正常免疫力小型动物体内对肿瘤的抑制效应及远端旁观者效应.方法:采用阳离子脂质体介导CD基因质粒瞬时转染小鼠肝癌H22及空质粒转染的H22细胞,分别接种于KM鼠双侧前腋下皮下;向小鼠体内注射5-FC及γ-IFN,观察在γ-IFN协同作用下对转染CD基因瘤体的抑制作用和远距离空质粒转染瘤体的抑制即远端旁观者效应.结果:5-FC对转染CD基因侧瘤体抑制明显,抑制率为79.39%;在γ-IFN的协同下CD/5-FC的抑瘤作用得到了增强,抑制率为93.47%,与无γ-IFN协同作用相比,对癌细胞抑制率明显增强(t=3.49,P=0.0036);存在远端旁观者效应,远端未转染瘤体的抑制率为54.42%;在γ-IFN的协同下远端旁观者效应得到显著增强,抑制率达到88.43%,同无γ-IFN相比有差异有显著性(t=2.86,P=0.0212).结论:体内CD/5-FC自杀基因体系联合γ-IFN对肝癌细胞有更好的抑制效应,对肝癌的治疗有很好的应用前景.
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HSV-TK+GFP/GCV自杀基因系统对小鼠胰腺癌的治疗作用
目的: 探讨HSV-TK+GFP/GCV自杀基因系统对小鼠胰腺癌细胞系MPC体外及体内杀伤作用及其产生的旁观者效应.方法: 通过RT-PCR从基因组文库中扩增出HSV-TK基因全长CDS序列, 并将其与GFP基因定向克隆到质粒表达载体pcDNA3.1(+), 构建重组质粒pcDNA3.1+/HSV-TK+GFP. 脂质体法将重组质粒转染小鼠胰腺癌细胞株MPC细胞, 得到带有HSV-TK和GFP基因的MPC/HSV-TK+GFP细胞, 并将其分别用于体外和体结果: 重组质粒pcDNA3.1+/HSV-TK+GFP导入小鼠胰腺癌细胞株MPC细胞. 体外实验结果显示, 当MPC/HSV-TK+GFP细胞数占混合细胞10%时, 低浓度(20 mg/L)的GCV就可将50%左右的肿瘤细胞杀死. 体内实验结果显示GCV可明显抑制MPC /HSV-TK+GFP细胞在昆明小鼠体内的肿瘤形成.结论: HSV-TK和GFP基因转入小鼠胰腺癌细胞株MPC细胞并获得稳定表达, HSV-TK+GFP/GCV自杀基因系统在体内外对小鼠胰腺癌均有杀伤作用, 且存在明显的旁观者效应.
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KDR启动子驱动双自杀基因靶向杀伤人胃癌细胞的作用
目的:探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的双自杀基因体系对人胃癌细胞SCG7901的靶向杀伤作用.方法:应用重组腺病毒AdEasv-KDR-CDglyTK体外感染实验组SCG7901细胞株和对照组HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞杀伤效应及其旁观者效应.结果:携带双自杀基因和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达.已转染腺病毒的SCG7901和未转染SCG7901的细胞在细胞生长方面无显著性差异(t=0.224,P=0.823).已转染腺病毒的HepG2细胞和未转染HepG2的细胞在细胞生长方面也无显著性差异(t=0.120,P=0.904).在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性,SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性(F=109.43,P=0.000).融合基因的疗效优于单一自杀基因(F=162.22,P=0.000).将感染腺病毒细胞与未感染细胞以不同比例混和培养,观察到该体系明显的旁观者效应.结论:KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并存在旁观者效应.
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TK基因治疗胃肠道肿瘤的研究进展
胃癌是我国人群中发病率和死亡率均占第一位的恶性肿瘤,近年来大肠癌的发病率呈明显上升趋势.胃肠道肿瘤的治疗以手术治疗为主,同是辅以化疗,但化疗对肿瘤非特异性,敏感性低,全身副作用大,效果欠佳,5 a生存率在50%左右.肿瘤的基因治疗是近年来研究的热点,尤其是TK基因治疗胃肠道肿瘤的研究取得了令人瞩目的成就,本文收集国内外近期文献,就TK基因的作用机制、载体、靶向性表达、旁观者效应以及其在胃肠道肿瘤的应用进行了综述.
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腺病毒介导的KDR-CDglyTK系统在治疗胃癌中的旁观者效应机制
目的:探讨重组腺病毒介导KDR-CDglyTK系统杀伤胃癌SCG7901细胞时细胞缝隙连接与旁观者效应的关系.方法:感染复数(multiplicity of infection,MOI)=100时,将携带融合基因重组腺病毒体外感染SCG7901、HeLa细胞,检测细胞的感染效率以及转基因肿瘤细胞在mRNA水平上融合基因的表达;用荧光漂白恢复技术(fluorescence recovery after photobleaching,FRAP)检测SCG7901、HeLa细胞以及芹黄素作用上述两种细胞的细胞间通讯功能,将已转染细胞和未转染细胞分别按10％∶90％和5％∶95％两种比例混合,用含或不合芹黄素的培养基,培养24 h后,在不同组中分别加入GCV、5-FC两者的混合液,72 h后用MTT法检测细胞存活率.结果:受感染的SCG7901和HeLa细胞中均有绿色荧光蛋白的表达.图像中观察到在芹黄素作用下SCG7901细胞淬灭后荧光强度明显降低,随后随着时间的推移,被淬灭细胞的荧光强度逐渐恢复,在相同时间内其恢复强度较未应用上调剂的SCG7901细胞要强;而在芹黄素作用下的HeLa细胞被淬灭后荧光强度明显降低,随时间的推移荧光强度无明显恢复,在上调剂芹黄素作用下的SCG7901与HeLa细胞间的荧光恢复率有差异.同时,观察到双自杀基因系统在转基因细胞比例分别占5％、10％时,SCG7901细胞在空白组、前药组、芹黄素组、前药+芹黄素组间细胞生存率有差异(F=144.42,P=0.000)、(F=407.83,P=0.000),而HeLa细胞在各组间的细胞生存率无统计学意义(F=0.386,P=0.765)、(F=0.895,P=0.472).结论:FRAP技术证实SCG7901细胞间通讯功能与缝隙连接有一定关系,而HeLa细胞不存在细胞间通讯功能.双自杀基因系统治疗SCG7901细胞时存在旁观者效应而且上调剂可以扩大其旁杀效应;但HeLa细胞不存在旁观者效应.双自杀基因系统治疗胃癌细胞时旁观者效应与细胞间缝隙连接有关.
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双功能融合基因在肝癌细胞中的表达与作用
目的:构建含有融合基因FCUl的自杀基因系统,观察其对体外培养肝癌细胞的杀伤效应.方法:将FCUl基因亚克隆于pEGFP-C1载体,转化大肠杆菌DH5α,阳性重组子转染肝癌细胞HepG2,绿色荧光蛋白检测FCUl的表达,用G418筛选出阳性细胞克隆后,进行体外药物敏感实验,观察旁观者效应.结果:FCUl基因正确插入到pEGFP-C1中,pEGFP-FCUl转染成功的细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,在5-FC作用下细胞的生长抑制率明显高于未转染细胞,且旁观者效应显著.结论:本基因治疗体系具有很好的体外杀肿瘤效果,为肝癌的基因治疗提供了一个新的选择.
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CD/5-FC系统对结肠癌细胞的杀伤作用
目的:探讨组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosine deaminase,CD)/5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)系统对不同分泌癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的大肠癌细胞LoVo和SW480的靶向杀伤作用.方法:脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体GICEACDNa及非组织特异性逆转录病毒载体pCD2分别转导入大肠癌细胞LoVo和SW480,以G418筛选阳性克隆扩增后给予前药5-FC进行敏感试验.结果:LoVo-CEACD及LoVo-CD比LoVo对5-FC的敏感性明显提高(P＜0.01,t=5.688,n=9;P＜0.01,t=3.136,n=9),SW480-CEACD及SW480-CD比SW480对5-FC的敏感性明显提高(P＜0.01,t=3.437,n=9;P＜0.01,t=3.516,n=9),LoVo-CEACD比LoVo-CD对5-FC的敏感性明显增强(P＜0.05,t=2.183,n=9),而SW480-CEACD对5-FC的敏感性小于SW480-CD,SW480-CEACD对前药5-FC的敏感性低于LoVo-CEACD(P＜0.05,t=2.504,n=9),转CD基因之LoVo和SW480细胞体外实验均可观察到明显的旁观者效应.结论:组织特异性CD/5-FC系统对LoVo和SW480细胞均有明显的靶向杀伤效果,但对SW480细胞的杀伤作用小于LoVo细胞.
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TK基因转染骨肉瘤U-2细胞体外实验研究
目的 研究脂质体介导的TK/GCV系统对人骨肉瘤细胞的杀伤作用及其产生的旁观者效应.方法 构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,制备和转化感受态大肠杆菌BL21以及鉴定测序,提取、纯化重组质粒DNA,培养和转染人骨肉瘤细胞株U-2 OS,流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态,用转染后的培养液的上清加入TK (-) U-2 OS中观察旁观者效应.结果 成功地构建出包含有TK基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-tk,通过PCR等方法鉴定质粒大小和位点均符合实验设计.荧光显微镜下观察U-2 OS (TK+)呈现绿色荧光.U-2 OS TK/GCV培养上清液可明显诱导细胞凋亡.但将上清液用0.2μm的滤膜滤过后,诱导凋亡作用消失.结论成功构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,体外实验表明人骨肉瘤细胞系U-2 OS对脂质体介导的TK/GCV系统敏感,并且有明显的旁观者效应,可望成为骨肉瘤基因治疗的新途径.
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联合应用胸苷激酶基因和胞嘧啶脱氨酶基因对胆囊癌细胞的杀伤作用
目的研究双自杀基因的应用对胆囊癌细胞的杀伤作用和旁观者效应.方法脂质体法将CD和HSV-tk双自杀基因转染入PA317细胞,用其病毒上清转染胆囊癌细胞GBC-SD,G418筛选出阳性细胞GBC-SD/CD+tk,应用不同浓度的5-FC或(和)GCV,MTT法观察其杀伤作用;将不同比例的GBC-SD/CD+tk和GBC-SD细胞混合,联合应用5-FC和GCV杀伤,观察其旁观者效应.结果单独应用5-FC或GCV均能对转染阳性的GBC-SD/CD+tk细胞产生明显的杀伤效应,联合应用可以在较小的剂量下产生更大的杀伤作用;当阳性细胞比例达到20%时即可对半数细胞产生杀伤作用.结论双自杀基因的应用对胆囊癌细胞具有明显的杀伤作用,其旁观者效应明显.
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全反式维甲酸增强雄激素非依赖性前列腺癌自杀基因治疗旁观者效应的实验研究
目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶(AdTK)/丙氧鸟苷(GCV)治疗激素非依赖性前列腺癌旁观者效应的影响及其机理.方法 采用免疫细胞化学和Western blot方法检测ATRA作用前后前列腺癌细胞株PC-3表达连接蛋白(Cx)43的水平和位置,应用MTT法检测细胞存活率,观察ATRA处理前后Ad-TK/GCV系统治疗PC-3细胞旁观者效应的变化.结果 PC-3细胞弱表达Cx43,总体表达率为27.7%;在浓度＞1×10-6 mol/L的ATRA作用下,Cx43水平表达阳性率达75.7%,以胞膜表达为主,明显高于ATRA处理前(P＜0.05).在达到明显旁观者效应(细胞生存率50%)时,Ad-TK/GCV系统组需要TK+PC-3细胞数为50%,而ATRA联合Ad-TK/GCV系统组需要TK+PC-3细胞数仅为30%,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论前列腺癌Ad-TK/GCV治疗的旁观者效应与Cx43表达及定位有关,ATRA可以通过提高Cx43的表达增强旁观者效应.
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腺病毒介导的HSV-tk/GCV自杀基因系统体内外旁观者效应的观察
目的观察腺病毒介导的HSV-tk/GCV自杀基因系统的体外、体内接触及体内远端旁观者效应. 方法采用向体外培养的tk阴性人肝癌BEL-7402细胞中加入不同比例tk阳性同种细胞;向荷tk阴性BEL-7402瘤小鼠瘤体内注射不同数量tk阳性同种细胞;向双侧荷瘤小鼠一侧瘤体内注射重组腺病毒,GCV作用后用不同方法来观察不同情况下的旁观者效应. 结果体外组中观察到明显旁观者效应,当tk阳性细胞占10%时,混合细胞存活率为36.6%;体内接触组中也观察到旁观者效应,实验组瘤体生长明显受到抑制(P<0.05);体内远端组中,未观察到旁观者效应(P>0.05). 结论腺病毒介导的HSV-tk/GCV自杀基因系统在体外及体内接触时均存在旁观者效应.
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融合型自杀基因Fcy::Fur联合5-氟胞嘧啶对人卵巢癌细胞株HO-8910体外杀伤作用的初步研究
卵巢癌基因治疗的研究备受关注,而自杀基因疗法被认为是有希望的策略之一,其具有一个独特的杀伤机制,即"旁观者效应",转染了自杀基因的肿瘤细胞被杀死,且周围大量未被转染的肿瘤细胞也被杀死,此效应的意义在于只需少量的肿瘤细胞转染自杀基因,就可产生广泛的杀伤作用[1].
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转染HSV-tk骨髓基质干细胞旁观者效应机制的研究
目的:研究转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶(HSV-tk)基因的骨髓基质干细胞(BMSCs)旁观者效应的机制.方法:培养BMSCs,扩增Ad-CMY-tk后转染骨髓基质干细胞(BMSCs/tk);应用Transwell培养板使BMSCs/tk与C6细胞不相互接触,观察旁观者效应;观察0.22μm滤膜过滤后的条件培养液对C6细胞的作用.建立大鼠脑荷瘤模型,移植BMSCs/tk后,测定其血清中IFN-γ的变化;免疫组化观察荷瘤大鼠肿瘤内部淋巴细胞浸润及微血管密度.结果:在混合培养实验中,BMSCs/HSV-tk诱导BMSCs的凋亡率明显高于对C6的凋亡率,两者差异有统计学意义,q=8.214,P=0.032.应用Transwell培养板培养后,BMSCs/HSV-tk诱导BMSCs凋亡率明显降低.BMSCs/HSV-tk/G-CV培养上清液可明显诱导C6细胞凋亡,但将其用0.22μm的滤膜过滤后,诱导凋亡的作用消失.脑荷瘤大鼠移植BMSCs/HSV-tk后血清IFN-γ浓度明显增高,肿瘤组织内CD4+细胞数、CD8+细胞数明显增加,微血管密度降低.结论:BMSCs/HSV-tk通过诱导BMSCs细胞凋亡后释放的凋亡小体介导旁观者效应,并发挥免疫学调节机制,对C6细胞可产生明显的抑制作用.
