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融合型自杀基因Fcy::Fur联合5-氟胞嘧啶对人卵巢癌细胞株HO-8910体外杀伤作用的初步研究
卵巢癌基因治疗的研究备受关注,而自杀基因疗法被认为是有希望的策略之一,其具有一个独特的杀伤机制,即"旁观者效应",转染了自杀基因的肿瘤细胞被杀死,且周围大量未被转染的肿瘤细胞也被杀死,此效应的意义在于只需少量的肿瘤细胞转染自杀基因,就可产生广泛的杀伤作用[1].
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逆转录病毒介导Fcy::Fur融合基因联合5-FC治疗裸鼠体内胶质瘤实验研究
目的:构建含融合自杀基因Fcy::Fur重组逆转录病毒,用自杀基因治疗系统Fcy::Fur/5-氟胞嘧啶(5-FC)对裸鼠胶质瘤进行体内抑瘤作用的实验研究.方法:扩增Fcy::Fur基因并构建Fcy::Fur基因重组逆转录病毒载体:载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;构建稞鼠荷胶质瘤动物模型,腹腔注射5-FC,观察裸鼠肿瘤重量变化及电镜、流式细胞仪(FCM)检测肿瘤的凋亡.结果:PCR法扩增出全长Fcy::Pur基因,经测序证实序列正确;构建了PLXSN-Fcy::Fur逆转录病毒载体,裁体转染包装细胞PT67,获得滴度为3.5×106 CFU/ml的逆转录病毒:转染C6获转基因阳性克隆C6-Fcy::Fur,检测C6-Fcy::Fur有Fcy::Fur基因的mRNA表达;裸鼠前肢背部接种转基因细胞,成瘤后腹腔注射5-FC,转基因肿瘤的生长较对照组明显抑制.FCM法检测到凋亡峰,电镜观察到转基因肿瘤细胞有凋亡小体.结论:AdE1CMVCD与5-FC联合在体内对胶质瘤有明显的抑制作用,为临床胶质瘤基因治疗提供了可靠的理论及应用依据.
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逆转录病毒介导Fcy::Fur融合基因联合5-FC治疗胶质瘤的体内试验研究
目的 构建含融合自杀基因Fcy::Fur重组逆转录病毒, 用自杀基因治疗系统Fcy::Fur/ 5-氟胞嘧啶(5-FC)对裸鼠胶质瘤进行体内抑瘤作用的实验研究.方法 扩增Fcy::Fur基因并构建Fcy::Fur基因重组逆转录病毒载体;载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染鼠胶质瘤细胞C6, 筛选并鉴定阳性转基因克隆;构建裸鼠荷胶质瘤动物模型,腹腔注射5-FC, 观察裸鼠肿瘤重量变化及电镜、流式细胞仪(FCM)检测肿瘤的凋亡.结果 PCR法扩增出全长Fcy::Fur基因, 经测序证实序列正确;构建了PLXSN-Fcy::Fur逆转录病毒载体, 载体转染包装细胞PT67,获得滴度为3.5×106 CFU/mL的逆转录病毒;转染C6获转基因阳性克隆C6-Fcy::Fur,检测C6-Fcy::Fur有Fcy::Fur基因的mRNA 表达;裸鼠前肢背部接种转基因细胞,成瘤后腹腔注射5-FC, 转基因肿瘤的生长较对照组明显抑制.FCM法检测到凋亡峰,电镜观察到转基因肿瘤细胞有凋亡小体.结论 AdE1CMVCD 与5-FC联合在体内对胶质瘤有明显的抑制作用,为临床胶质瘤基因治疗提供了可靠的理论及应用依据.
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逆转录病毒介导Fcy::Fur/5-FC基因治疗对脑胶质瘤杀伤作用的研究
目的:研究融合型自杀基因Fcy::Fur联合5-FC对胶质瘤细胞株C6的杀伤效果.方法:扩增Fcy::Fur基因并构建Fcv::Fur基因重组逆转录病毒载体PLXSN-Fcv::Fur;载体转染包装细胞PT67获得高滴度病毒再转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;以MTT法和FCM法检测5-FC对Fcy::Fur转基因细胞的杀伤效应.结果:PCR法扩增出全长Fcy::Fur基因,经测序证实序列正确;PLXSN-Fcy::Fur滴度为3×106CFU/ml;RT-PCR检测显示Fcy::Fur转基因阳性克隆的C6细胞有效表达目的基因的mRNA;应用5-FC后FCM法检测到显著的凋亡峰,MTT法检测细胞有明显的杀伤效应.结论:融合型自杀基因Fcy::Fur联合5-FC可对胶质瘤细胞C6产生明显的杀伤作用.
