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胆酸对胎儿脐静脉内皮细胞增殖及分泌功能的影响
血管内皮细胞损伤正成为许多疾病发生、发展的基本病理过程.妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic choliestasis of pregnancy,ICP)是妊娠期特发的疾病,由于该病对母婴威胁极大,可致早产、胎儿窘迫及不可预测的胎死宫内等[1],近年越来越受到产科工作者的重视.
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妊娠高血压综合征孕妇血清对培养的内皮细胞的影响
近年来,内皮细胞损伤是妊娠高血压综合征(妊高征)发病中心环节的学说[1]已被公认,但造成内皮细胞损伤的原因目前仍不清楚。本研究通过观察妊高征患者血清对培养的脐静脉内皮细胞增殖、细胞凋亡和细胞间粘附分子1(ICAM-1)表达的影响,探讨妊高征发病的机理。 一、资料与方法 1.孕妇血清来源:选取正常晚孕妇女4例及妊高征患者13例,其中轻、中、重度妊高征患者各6、2、5例,按全国统编教材《妇产科学》(第4版)[2]中的标准进行诊断和分类。平均孕周为38周,正常晚孕妇女及妊高征患者的年龄、孕龄均无统计学差异。所有孕妇均无心、肝、肾及内分泌病史。未临产时采静脉血,无菌条件下分离血清,-20℃保存待用。 2.细胞培养及分组:脐血管内皮细胞株购自武汉大学典型培养物保藏中心。将细胞加入含10%新生小牛血清的依格尔培养液进行传代培养。实验共分5组,1组加入等量依格尔培养液;2组培养液加入正常晚孕妇女血清;3、4、5组培养液分别加入轻、中、重度妊高征患者血清。2~5组所加孕妇血清体积分数为30%,其他成分与1组相同。 3.观察指标:(1)生长曲线:连续观察7 d,以天数为横轴,以每天所得细胞数为纵轴绘制成图。(2)ICAM-1免疫组织化学染色:免疫组化鼠抗人ICAM-1单克隆抗体购于武汉博士德公司,二氨基联苯胺染色试剂盒购于北京中山生物技术公司。细胞取材后以丙酮固定,依次加入一抗、生物素标记的二抗及辣根酶标记的链霉卵白素,二氨基联苯胺显色封片后镜检。结果按细胞膜或细胞浆染色的深浅来判断:淡棕色为阳性(+)、棕色为中度阳性(+ +)、深棕色为强阳性(+ + +)、无着色的为阴性(-)。(3)内皮细胞凋亡:2、3、4、5组各取培养瓶8个,细胞融合后,换无血清的改良依格尔/F12混合培养基,分别加入各组孕妇血清培养后取材,用碘化丙啶(50 μg/ml,为美国Sigma公司产品)作细胞DNA染色,用流式细胞仪(Facsort,为美国B.D公司产品)检测。分析细胞凋亡:低于G1期DNA含量主峰的记数峰为凋亡峰,以百分比(%)代表细胞凋亡率。 4.统计学方法:采用两样本均数的t检验。
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B2同源盒基因反义寡核苷酸对原代脐静脉内皮细胞增殖及细胞周期的影响
血管内皮细胞损伤在烧伤后脏器损害的发生、发展中具有极其重要的作用,而且是导致缺血再灌注损伤、终引起全身多脏器功能损害的重要原因[1].内皮细胞作为创面修复的主要细胞,其分化、增殖在血管形成、创面愈合中起重要作用.既往研究表明,同源盒基因是胚胎发育、细胞分化和增殖的主控基因,B簇同源盒基因与造血祖细胞增殖的关系已早被人们所证实[2].但与造血祖细胞起源相同的内皮细胞与B簇同源盒基因(HoxB)的关系尚未见报道.笔者用3H-TdR及流式细胞仪测定脂质体包裹并经硫代修饰的HoxB2反义寡核苷酸对内皮细胞DNA合成及细胞周期的影响,探讨HoxB2在创面修复中的作用.