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不同因素对非甲基化CpG ODN佐剂活性的影响
CpG ODN即含有胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸的寡脱氧核苷酸,研究发现,非甲基化的CpG ODN能够显著促进机体的特异性及非特异性免疫应答,是一种高效的TH1型疫苗佐剂,它的佐剂活性与其结构有着密切的关系.我们综合考虑了可能影响CpG ODN佐剂活性的6个因素,即骨架是否进行了硫代修饰、是否具有回文结构、CpG基序侧翼序列的种类、CpG基序数量的差异、是否含有5′-poly(A) 结构以及免疫时间的长短,利用正交试验设计合成了10种不同序列的CpG ODN(表1).
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c-myc反义寡核苷酸对鼠脑胶质瘤生长及VEGF表达的影响
一、材料与方穈1.c-myc寡核苷酸的设计、合成:根据c-myc cDNA序列AUG后的15个碱基,设计出相应的正义(SON)、反义(ASON)和错配寡核苷酸.正义5'ATGCCCCTCAACGTG3'反义5'CACGTTGAGGGGCAT3',错配5'CACGGTGAGGTGCAT3'(15对碱基全硫代修饰).
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无胶筛分毛细管电泳分离相差单个碱基的脱氧寡核苷酸方法初探
目的:建立和优化分离不同碱基数目硫代脱氧寡核苷酸的有效方法.方法:用去离子水溶解硫代脱氧寡核苷酸样品并采用核酸蛋白分析仪定量.在无胶筛分毛细管电泳分离分析之前超声波和高速离心脱气.无胶筛分毛细管电泳以线性大分子ssDNA 100-R Gel作为分离介质.为得到佳效果,对毛细管温度、分离电压、进样方式和进样时间进行了优化.结果:灵敏度、迁移时间和重现性的佳实验条件为:毛细管温度25℃,电动进样10kV10s,DAD检测器波长为255 nm,18 kV恒压分离模式.在此条件下,成功分离了依次相差一个碱基的21种脱氧寡核苷酸[pd(A)40-60].结论:建立并优化了一种简单快速分离相差单个碱基的脱氧寡核苷酸的毛细管电泳方法.
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脂肪细胞特异性核酸适体对肥胖小鼠脂肪代谢的影响
目的 通过研究体外筛选的脂肪细胞特异性核酸适体adipo 8在肥胖小鼠体内是否可以与脂肪组织特异性结合,初步探讨adipo 8在肥胖小鼠体内对脂肪组织成脂的影响作用.方法 ①高脂喂养雄性C57BL/6小鼠60只复制肥胖小鼠模型;②取小鼠4只,腹腔注射cy 3荧光标记并硫代碱基修饰,结合聚乙二醇的adipo 8,注射后1h取肝脏、肾脏、肌肉及附睾脂肪组织于冷冻切片机制成冰冻切片2块,荧光显微镜下观察各组织荧光信号和HE染色;③取小鼠24只分为未修饰adipo 8组和修饰adipo 8组,每组12只.Cy 3荧光标记的未修饰和修饰adipo 8分别腹腔注射入两组小鼠体内,注射后30 min、1h、2h、4h、8h、24h分别取附睾脂肪组织制成冷冻切片,荧光显微镜下显像;④32只小鼠分为随机序列组和adipo 8组,每组16只.微型渗透压泵埋入小鼠腹腔,分别连续腹腔输注随机序列和修饰adipo 8,于连续腹腔输注第1、2、3、4周,分别取附睾脂肪组织制成冷冻切片,HE染色观察分析脂肪细胞大小改变.结果 ①腹腔注射cy 3荧光标记并修饰的adipo 8,1h荧光显微镜下观察显示:脂肪组织可见非常强的荧光信号,而其余组织仅可见微弱信号;②未修饰adipo 8与脂肪组织结合弱且作用时间短,修饰adipo 8与脂肪组织结合强且时间长.修饰adipo 8组中,脂肪组织的荧光信号呈先增后减,1h强,30 min和24 h信号弱;③光学显微镜相同放大倍数单个视野内,第1周,adipo 8组脂肪细胞大小较随机序列组无明显差异(P>0.05),第2、3、4周,adipo 8组脂肪细胞小于随机序列组(P<0.05).结论 ①核酸适体adipo 8在肥胖小鼠体内可与白色脂肪组织高度特异性结合;②Adipo 8经硫代碱基修饰、结合聚乙二醇,增强了其与脂肪组织结合的强度及延长结合时间;③)Adipo 8在肥胖小鼠体内可以抑制脂肪组织成脂,并且该作用随着时间的延长而加强,即adipo 8在体内抑制成脂的作用呈时间依赖性.
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端粒酶反义寡核苷酸抗肿瘤的实验研究
一、材料与方法 1. 肝癌细胞株SMMC-7721引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库。 2. 试剂:端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(ASODN-t)及无关寡聚核苷酸(N-ODN)由上海生工生物工程公司合成,全硫代修饰。 3. 对细胞抑制作用的观察:取2×107/L肝癌细胞接种于96孔的细胞培养板中,每孔100μl,设3个复孔。分别加入ASODN-t,调节浓度使ASODN-t终浓度分别为1、2、3、4、5μmol/L,N-ODN的终浓度为3μmol/L,培养24、48、72、96h,于结束前4h加入5g/L MTT 20μl,继续培养4h,再加入SDS溶液100μl,终止反应。用酶联免疫检测仪检测各孔在波长570nm的吸光度A值。
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B2同源盒基因反义寡核苷酸对原代脐静脉内皮细胞增殖及细胞周期的影响
血管内皮细胞损伤在烧伤后脏器损害的发生、发展中具有极其重要的作用,而且是导致缺血再灌注损伤、终引起全身多脏器功能损害的重要原因[1].内皮细胞作为创面修复的主要细胞,其分化、增殖在血管形成、创面愈合中起重要作用.既往研究表明,同源盒基因是胚胎发育、细胞分化和增殖的主控基因,B簇同源盒基因与造血祖细胞增殖的关系已早被人们所证实[2].但与造血祖细胞起源相同的内皮细胞与B簇同源盒基因(HoxB)的关系尚未见报道.笔者用3H-TdR及流式细胞仪测定脂质体包裹并经硫代修饰的HoxB2反义寡核苷酸对内皮细胞DNA合成及细胞周期的影响,探讨HoxB2在创面修复中的作用.