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无胶筛分毛细管电泳分离相差单个碱基的脱氧寡核苷酸方法初探
目的:建立和优化分离不同碱基数目硫代脱氧寡核苷酸的有效方法.方法:用去离子水溶解硫代脱氧寡核苷酸样品并采用核酸蛋白分析仪定量.在无胶筛分毛细管电泳分离分析之前超声波和高速离心脱气.无胶筛分毛细管电泳以线性大分子ssDNA 100-R Gel作为分离介质.为得到佳效果,对毛细管温度、分离电压、进样方式和进样时间进行了优化.结果:灵敏度、迁移时间和重现性的佳实验条件为:毛细管温度25℃,电动进样10kV10s,DAD检测器波长为255 nm,18 kV恒压分离模式.在此条件下,成功分离了依次相差一个碱基的21种脱氧寡核苷酸[pd(A)40-60].结论:建立并优化了一种简单快速分离相差单个碱基的脱氧寡核苷酸的毛细管电泳方法.
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高分子材料在无胶筛分毛细管电泳中的应用
毛细管电泳在对核酸、多肽、蛋白质等生物大分子的分离分析上极具优越性,其中无胶筛分毛细管电泳应用尤为广泛.本文综述了近年来国内有关无胶筛分毛细管电泳中高分子材料的运用和进展.
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聚乙烯吡咯烷酮无胶筛分毛细管电泳法分离鉴定DNA片段
目的在非涂层无胶筛分毛细管电泳中探讨一种简便快捷的分离鉴定DNA片段的新方法,以期更好的用于基因诊断.方法在非涂层无胶筛分毛细管电泳中,以聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为筛分介质,用pUC19DNA/Mspl(HpaⅡ)标准DNA片段为实验对象,通过调节分离缓冲液中筛分介质的浓度、电泳缓冲液的pH值、运行电压及毛细管的温度,优化出分离26～501 bp DNA片段的适条件.在此条件下分离了Y染色体无精症因子(AZF)区域4个位点的多重聚合酶链反应(PCR)扩增产物.结果 PVP作为筛分介质在非涂层无胶筛分毛细管电泳中对于长度<501 bp的短链除了110和111 bp外均获得良好的分离效果,且迁移时间与碱基对数目呈良好线性关系.不但对多重PCR扩增产物实施了好的分离,而且依据碱基对数目与迁移时间之间的线性关系,对其大小也进行了精确的推断.结论 PVP是一种良好的筛分介质,运用其进行无胶筛分毛细管电泳对于遗传性疾病的诊断将更加快速、准确、简便、灵敏.
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无胶筛分毛细管电泳在蛋白质分离中的应用
目的:运用高效毛细管电泳(HPCE)分离6种蛋白质.方法:以线性高分子聚合物聚乙二醇(PEG20000)作为筛分介质,150 mmol/L Tris-100 mmol/L CHES(pH8.7)作为运行缓冲液,运行电压20 kV.结果: 磷酸化酶B、牛血清白蛋白、肌动蛋白、碳酸酐酶、烟草花叶病毒外壳蛋白和胰蛋白酶抑制剂达到基线分离.结论:高效毛细管电泳分离生物大分子具有快速、高效等优点.
