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不同因素对非甲基化CpG ODN佐剂活性的影响
CpG ODN即含有胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸的寡脱氧核苷酸,研究发现,非甲基化的CpG ODN能够显著促进机体的特异性及非特异性免疫应答,是一种高效的TH1型疫苗佐剂,它的佐剂活性与其结构有着密切的关系.我们综合考虑了可能影响CpG ODN佐剂活性的6个因素,即骨架是否进行了硫代修饰、是否具有回文结构、CpG基序侧翼序列的种类、CpG基序数量的差异、是否含有5′-poly(A) 结构以及免疫时间的长短,利用正交试验设计合成了10种不同序列的CpG ODN(表1).
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大肠杆菌重组LTKA63突变体和LTB黏膜免疫佐剂活性的研究
目的构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位(heat-labile enterotoxin subunit A,LTA)突变体LTKA63及B亚单位(heat-labile enterotoxin subunit B,LTB)基因原核表达系统,确定rLTKA63和rLTB黏膜免疫佐剂活性.方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA和LTB基因,采用定位突变技术构建LTKA63突变体,T-A克隆后测序.构建LTKA63和LTB原核表达载体,采用SDS-PAGE鉴定表达产物.采用三色流式细胞术确定rLTKA63激活T细胞途径,以GM1-ELISA检测rLTB结合牛GM1的能力.建立幽门螺杆菌SS1株小鼠感染模型,分别以幽门螺杆菌(Hp)重组尿素酶B亚单位(rUreB)和黏附素(rHpaA)为抗原,分别检测rLTKA63和rLTB对rUreB和rHpaA的免疫保护增强作用.结果从大肠杆菌44815株DNA模板中扩增获得预期大小的LTA和LTB基因条带.LTA基因定位突变后获得序列正确的LTKA63突变体.rLTKA63和rLTB表达量分别占细菌总蛋白的30%和20%左右.LTKA63作用后TH1和TH2细胞较阴性对照组分别增加19.9%和42.3%,GM1-ELISA结果证实rLTB能与牛GM1结合.33.3%(4/12)rUreB和41.7%(5/12)rHpaA免疫小鼠胃黏膜标本中分离出幽门螺杆菌,且rUreB和rHpaA特异性S-IgA检测结果均为阴性.rUreB或rHpaA加用rLTKA63或rLTB免疫后,小鼠胃黏膜标本中幽门螺杆菌分离阳性率下降为16.7%~25.0%(P>0.05),rUreB和rHpaA特异性S-IgA阳性率可达41.6%~58.3%(P<0.01).结论成功地构建了LTKA63和LTB原核表达系统,所表达的rLTKA63和rLTB均具有较强的黏膜免疫佐剂活性.
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磷酸钙纳米颗粒在疫苗佐剂中的研究进展
佐剂作为疫苗的关键成分,能增强疫苗抗原特异的免疫原性、改变免疫应答类型、减少抗原用量从而以备疾病大流行之需,并降低疫苗价格.随着纳米技术的快速发展,纳米材料应用于开发有效、安全的疫苗佐剂方面的研究,也逐渐获得进展.磷酸钙纳米颗粒凭借其良好的生物学性质:颗粒均一性和稳定性、生物相容性、生物可降解性、刺激机体产生体液免疫/细胞免疫等,并易于开展商业化规模制备,有潜力被开发成为疫苗佐剂.本文阐述了磷酸钙纳米颗粒作为一种新型佐剂在疫苗中的效应及其表面修饰的研究进展,为研发高效、安全的疫苗佐剂提供新的思路.
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铝佐剂机制及其纳米化前景
铝佐剂是得到公认的疫苗佐剂,但其具体作用机制不甚明了.随着新型疫苗和人工合成多肽疫苗的出现,常规铝佐剂暴露出一些缺点,其应用受到了限制.人们不得不寻找新型的疫苗佐剂或对现有佐剂予以改良.若将铝佐剂纳米化,因其比表面积大、黏附力强,在增强佐剂活性的同时,可提高抗原的靶向投递、大大降低副作用,不失为一个崭新而有前景的研究方向.还有可能进一步提高黏附和刺激抗原提呈细胞(APC)细胞吞噬的能力,以此为新型的疫苗佐剂将是可行的.本文在对铝佐剂机制进行分析探讨的基础上,联系其应用现状、发展趋势以及化学特性,展望纳米铝佐剂的可能性及应用前景.
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福氏佐剂的替代物和抗体生产
以抗原免疫动物获得抗血清是制备抗体的经典方法.为了提高免疫效果,在免疫的时候,常辅以佐剂以改变抗原的物理状态而延长其在体内的滞留时间,使抗原缓慢释放,同时非特异性的促进局部吞噬细胞反应来增强动物的免疫效果.佐剂的类型较多,目前常用的还是福氏佐剂(Freund's Adjuvant,FA).它是一种对大多数抗原都有效的佐剂,但由于它的一些副作用限制了它在实验动物上的使用.因此,福氏佐剂只能在确实需要的情况下(如使用的抗原为小分子可溶性抗原或半抗原)和强佐剂活性时使用.
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防御素在免疫中的作用
哺乳动物的防御素是在体内形成的一种小分子抗菌性阳离子肽,是天然免疫中的一种类似抗生素的效应物质.防御素利用树突细胞和T细胞上的趋化因子受体,在微生物侵入后的获得性免疫调节上起重要作用.它也有一定的免疫佐剂活性.本文叙述了各种具有抗菌活性的防御素或抗菌肽的各项免疫活性.
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新型疫苗佐剂Ov-ASP-1佐剂活性功能区的设计、表达及生物学特性研究
目的 获得保留Ov-ASP-1佐剂活性的功能区.方法 用前期制备的Ov-ASP-1单克隆抗体对Ov-ASP-1的9个肽进行特异性结合,根据肽的结合情况设计功能区ASPPRM,并进行密码子优化、构建原核表达载体后在大肠杆菌中表达.表达产物经Western印迹鉴定后的用镍柱纯化蛋白,复性完全后对获得的ASPPRM活性蛋白进行生物学特性分析.结果 ASPPRM以包涵体形式表达,分子量为17 kD.将其和OVA共同免疫小鼠后ASPPRM组抗OVA的IgG抗体显著高于OVA组.结论 本研究获得了保留佐剂活性的ASPPRM蛋白,为后续ASPPRM体内的免疫增效作用及Ov-ASP-1佐剂活性功能域的探索奠定基础.
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因改建及其表达产物粘膜免疫佐剂活性的研究
目的改建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因序列以提高重组LTB(rLTB)原核表达量,确定重组改建LTB(rrLTB)粘膜免疫佐剂活性.方法按大肠杆菌偏爱密码子合成全长LTB基因的核苷酸序列.构建pET32a-rLTB原核重组表达质粒及pET32a-rLTB-E.coliBL21DE3表达系统,提取重组质粒并测定其插入的rLTB基因序列.采用SDS-PAGE和BioRad凝胶成像分析系统鉴定rrLTB表达产量,并与未改建的重组LTB(roLTB)比较.采用GM1-ELISA确定rrLTB和roLTB结合牛GM1的能力.分别以幽门螺杆菌重组尿素酶B亚单位(rUreB),检测rrLTB和roLTB对rUreB对幽门螺杆菌SS1株感染BALB/c小鼠保护作用及产生特异性S-IgA的增强效应.结果pET32a-rLTB-E.coliBL21DE3经1 mmol/LIPTG诱导后,rrLTB表达量约占细菌总蛋白的35.4%,为roLTB(2.8%)的12.6倍.GM1-ELISA结果证实rrLTB和roLTB均能与牛GMi结合.单一rUreB对感染小鼠的免疫保护率为66.7%,但与rrLTB或roLTB合用时,保护率可至91.6%,并可提高感染小鼠特异性S-IgA产生量(P<0.01).结论改建的LTB基因能明显提高表达量,所表达的rrLTB仍保持较强的粘膜免疫佐剂活性.