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鼠衣原体感染L929细胞致宿主死亡方式的研究
目的 对鼠衣原体感染L929细胞48 h后细胞发生死亡的方式(凋亡、自噬、坏死)进行初步探讨.方法 以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.85的鼠衣原体感染小鼠成纤维细胞L929,48 h后利用荧光显微镜观察DAPI染色情况;应用Propidium Iodide(PI)与Annexin V染色后流式细胞术分析细胞的凋亡-坏死情况;转染GFP-LC3质粒后荧光显微镜观察LC3表达,Western blot检测LC3蛋白分析细胞自噬情况.结果 鼠衣原体感染L929细胞48 h后,表现为DAPI染色无凋亡时细胞核碎裂特征,PI与Annexin V染色后流式分析表明细胞坏死增多,转染GFP-LC3后,与未感染对照相比,鼠衣原体感染组可见荧光弥散状变为点状分布;Western blot分析可发现鼠衣原体感染的L929细胞LC3Ⅰ蛋白向LC3Ⅱ蛋白转化增强.结论 鼠衣原体感染48 h后L929细胞主要发生细胞坏死而非细胞凋亡,并伴有细胞自噬现象.
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小鼠Tim-2基因在L929细胞表达后促进铁蛋白的内吞
目的 获取BALB/c小鼠T细胞免疫球蛋白域-黏蛋白域蛋白-2(T cell immunoglobulin and mucin domain containing molecules-2,Tim-2)基因,构建真核表达载体在L929细胞中表达并研究其功能.方法 RT-PCR获取BALB/c小鼠Tim-2基因,T-A克隆后经测序鉴定后酶切,插入pEGFP-N1真核表达载体,脂质体转染L929细胞,荧光显微镜观察外源基因的表达,然后加入铁蛋白与转染细胞作用.结果 外源基因在L929细胞中得到高效表达,荧光显微镜的结果显示,外源基因定位于细胞膜上,并能促进细胞对铁蛋白的内吞.结论 Tim-2基因在真核细胞中表达后定位于细胞膜上,并促进细胞对铁蛋白的内吞.
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注射用磷酸川芎嗪及注射用盐酸川芎嗪体外细胞毒性研究
目的 采用L929细胞体外培养方法研究国家评价性抽验品种注射用磷酸川芎嗪和注射用盐酸川芎嗪及其中的杂质、原料、辅料的细胞毒性.方法 选取L929细胞,将注射用磷酸川芎嗪和注射用盐酸川芎嗪及其杂质、原料、辅料,分别与L929细胞孵育48 h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT Assay)测得各各样品的细胞存活率.结果 乳糖和1.3.5-三甲基吡嗪对L929细胞无明显毒性;盐酸川芎嗪原料的细胞毒性低于磷酸川芎嗪原料;注射用盐酸川芎嗪的细胞毒性低于注射用磷酸川芎嗪.结论 细胞毒性试验方法结果表明该方法具有较高的可靠性和灵敏度,可用该方法对川芎嗪注射剂进行安全性评价.
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羧甲基壳聚糖温敏凝胶对小鼠L929细胞增殖的影响
目的:研究自制羧甲基壳聚糖温敏凝胶对小鼠肺成纤维细胞(L929)增殖的影响及其组织相容性.方法:用羧甲基壳聚糖(CMCS)与甘油磷酸盐(GP)互配,制备羧甲基壳聚糖温敏凝胶,22只小鼠分为正常对照组1只、空白对照组3只,2％凝胶组和5％凝胶组各9只.采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)分别测定质量浓度为50、10、2、0.4、0.08倍的羧甲基壳聚糖温敏凝胶浸提液对体外培养的L929细胞的增殖情况；分别将2％和5％的温敏凝胶植入小鼠皮下,于3、7、14d处死,常规组织切片,HE染色观察凝胶周围组织的炎症反应.结果:培养24 h～96 h,0.4倍及0.08倍浸提液组与阴性和阳性对照组的OD值差异有统计学意义(P＜0.05)；培养48、72、96 h后,除50倍浸提液组外其余各实验组与阴性和阳性对照组的OD值差异有统计学意义(P＜0.05),其中0.4倍浸提液促细胞增殖作用为明显；凝胶植入后前3d,实验组以急性炎症为主,随着时间的延长各实验组炎症细胞逐渐减少至消失.结论:羧甲基壳聚糖温敏凝胶对L929细胞有明显的促进作用,且具有良好的组织相容性,在牙周病治疗中具有潜在的应用价值.
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抗钙调素抗体对细胞增殖作用的影响
目的研究抗钙调素抗体对细胞增殖作用的影响. 方法将L929细胞接种于96孔培养板, 加入不同浓度的抗钙调素抗体, 培养48 h后, 用MTT法检测细胞增殖情况. 结果无抗钙调素抗体的细胞对照组不显示细胞增殖效应, 与细胞对照组比较, 不同浓度的抗牛脑钙调素抗体均可抑制L929细胞的增殖. 结论抗钙调素抗体可抑制细胞增殖.
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硫酸铟对L929细胞周期及细胞凋亡的影响
目的 探讨硫酸铟对小鼠成纤维细胞(L929)细胞周期和细胞凋亡的影响.方法 用四氮唑蓝比色法(MTT),检测L929的存活情况；采用流式细胞仪检测硫酸铟对L929细胞周期、细胞凋亡(染毒浓度分别为1.5、3.0、4.5 mmol/L,染毒时间为24 h)的影响.结果 硫酸铟可改变L929细胞周期及细胞凋亡率.细胞周期表现为S期细胞增多,而处于Gl期的细胞减少,提示硫酸铟可能具有影响L929细胞周期的作用,进而抑制细胞增殖；硫酸铟可增加细胞凋亡率.结论 硫酸铟可引起L929细胞毒性,细胞存活率呈浓度-时间依赖性下降；硫酸铟可影响细胞周期和诱导细胞凋亡.
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肠上皮内淋巴细胞促L929细胞增殖活性的研究
目的:了解应激性溃疡模型中肠上皮内淋巴细胞(iIEL)培养上清促L929细胞增殖活性的变化.方法:采用水浸限制刺激法制备小鼠应激性溃疡模型.分别提取iIEL和脾T淋巴细胞,在含ConA的培养液中培养.采用MTT法检测iIEL和脾T淋巴细胞培养上清的促L929细胞增殖活性.结果:正常鼠iIEL培养上清促L929细胞增殖活性显著高于脾T细胞培养上清(P＜0.05).应激性溃疡发生后,iIEL培养上清促L929细胞增殖活性显著下降,于第4天降至低(P＜0.05),1周后恢复正常.结论:iIEL培养上清中可能含有高水平的促进L929细胞增殖的因子,这种因子的活性在应激性溃疡中可能发生变化.
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负性刺激分子PD-L对T细胞介导小鼠L929肿瘤细胞免疫效应的影响
目的:探讨负性刺激分子在肿瘤细胞逃避免疫效应中的作用.方法:以L929细胞为靶细胞,体内致敏C57BL/6小鼠,注入PD-L1、PD-L2抗体阻断,并设立未致敏对照组.分离小鼠脾细胞,体外采用3H-TdR掺入法、荧光标记双染色FCM以及PI染色FCM法分别检测淋巴细胞增殖反应、活化诱导的细胞凋亡以及脾细胞及其培养上清对肿瘤细胞的杀伤效应.结果:L929细胞表达PD-L1,而不表达PD-L2.体内与体外联合应用PD-L1抗体,能显著增强L929肿瘤细胞诱导的致敏组小鼠脾细胞的增殖活性和特异性杀伤效应,并可抑制活化诱导的T细胞凋亡;PD-L1抗体亦可增加L929细胞诱导的未致敏组小鼠脾细胞的增殖活性和促进其脾细胞培养上清对L929细胞的杀伤效应.结论:PD-L1抗体可通过阻断PD1/PDL途径促进初始T细胞和致敏T细胞介导的抗瘤效应.
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激活素A对L929细胞活性的调节作用
目的 探讨激活素A对小鼠纤维母细胞L929活性的调节作用.方法 用不同剂量的激活素A刺激L929细胞,应用还原酶法分析细胞分泌一氧化氮(NO)的水平,RT-PCR法检测细胞诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、纤维连接蛋白(FN)和金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)mRNA的表达,应用中性红检测细胞的吞饮活性,MTT法检测细胞的增殖活性.结果 L929细胞经激活素A刺激后,与对照组细胞比较,分泌NO的水平明显升高,iNOS mRNA及FN mRNA的表达水平也升高,而TIMP mRNA的表达水平无明显改变.激活素A可以促进L929细胞的吞饮活性.但对L929细胞的增殖活性无影响.结论 激活素A具有促进L929细胞分泌炎性介质和形成细胞外基质的作用,这可能是其促进炎症发展、诱导组织纤维化的原因.
关键词： 激活素A L929细胞 一氧化氮 诱导型一氧化氮合成酶 纤维连接蛋白 金属蛋白酶组织抑制物 -
齿科合金活化线粒体途径诱导L929细胞凋亡的观察
目的:探讨齿科合金通过线粒体途径诱导L929细胞凋亡的作用机制.方法:选用临床常用齿科合金和中科院金属研究所研发的三种低镍合金的浸提液处理小鼠L929细胞,用MTT法检测细胞增殖:用荧光染料罗丹明123检测细胞线粒体跨膜电位;Western-Blot检测线粒体凋亡通路相关蛋白的表达.结果:齿科合金作用L929细胞48h后,细胞线粒体跨膜电位降低,伴有细胞色素C从线粒体到胞浆的释放.结论:齿科合金通过活化线粒体信号转导途径引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放可能是合金诱导L929细胞凋亡途径之一.
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硫酸铟对小鼠成纤维细胞毒性作用的研究
[目的]了解硫酸铟对小鼠成纤维细胞( L929)的细胞毒性、DNA损伤及活性氧含量的影响. [方法]以体外培养的L929细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色分析法(MTT法)观察不同染毒浓度(1、2、4、8mmol/L硫酸铟)在不同时间段(2、24、48h)染毒对L929细胞的毒性作用；采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测在2h作用下,不同浓度(1、2、4 mmol/L硫酸铟)染毒致DNA损伤的情况及活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量的变化. [结果]硫酸铟对L929细胞生长具有抑制作用,在各个浓度及时间段内光密度值随染毒浓度增加及染毒时间延长而降低,阴性组与染毒组差异有统计学意义(P＜O.05).单细胞凝胶电泳结果显示,彗星拖尾率、彗尾DNA％、尾长、Olive尾矩随染毒浓度增加而增加,阴性组与染毒组之间的差异有统计学意义(P＜0.05),且ROS含量随染毒浓度增加表现递增. [结论]本实验条件下,硫酸铟能够明显抑制L929细胞增殖,存在明显的剂量-效应关系和时间-效应关系,并在短时间内能够引起DNA单链断裂及ROS含量增多.
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去甲斑蝥素诱导小鼠肺纤维瘤L929细胞凋亡
目的:研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)抑制小鼠肺纤维瘤(L929)细胞的作用机制.方法:用MTT法测定细胞生长抑制率.采用Hoechst 33258染色、DNA凝胶电泳和乳酸脱氢酶(LDH)活力检测细胞凋亡.用免疫印迹法(Western blot)分析了细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和磷酸化ERK、c-Jun N-末端激酶(C-Jun N-terminal kinase,JNK)和磷酸化JNK蛋白表达的变化.结果:NCTD诱导L929细胞凋亡.JNK抑制剂(SP600125)与ERK抑制剂(PD98059),可明显抑制NCTD对细胞的杀伤作用.同时磷酸化ERK和磷酸化JNK表达增加.结论:NCTD对L929细胞的细胞毒作用是通过诱导其凋亡而发生的,且呈时间剂量依赖性.这种作用可能与JNK,ERK通路激活有关.
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钴铬钼合金对L929细胞生物学行为的影响
目的:研究牙科用钴铬钼合金对L929细胞生物学行为的影响.方法:制备医用纯钛、钴铬钼合金、钴铬合金、镍铬合金的浸提液,在浸提液与L929细胞作用24 、48、72 h后,用倒置相差显微镜观察细胞的生长情况,并通过CCK-8实验评定4种材料的细胞毒性；采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法评价材料对细胞凋亡的影响；应用吖啶橙染色法检测L929细胞在材料表面的黏附情况；采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:倒置相差显微镜下观察,各时间点除镍铬合金组可见少量细胞核固缩,呈现轻微中毒状态外,其余3组细胞生长情况良好；钴铬钼合金组在各时间点的OD值、细胞凋亡率、细胞黏附数量均显著低于医用纯钛组(P＜0.05),而高于钴铬合金组(P＜0.05)和镍铬合金组(P＜0.05)；观察期内,医用纯钛组、钴铬钼合金组、钴铬合金组细胞毒性均为1级,镍铬合金组为2级,表现为轻微毒性.结论:钴铬钼合金对L929细胞的生物学行为无明显不良影响,符合口腔生物材料的临床应用要求,具有良好的生物相容性.
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基于Biacore T200分析系统研究阿达木单抗生物学活性
目的 利用Biacore T200生物分子相互作用分析系统研究阿达木单抗的生物学活性.方法 将人源阿达木单抗偶联于CM5传感芯片,利用Biacore T200系统观察重组人肿瘤坏死因子α(TNF-α)和食蟹猴TNF-α与阿达木单抗结合的动力学常数,并采用不同种属的重组TNF-α验证种属特异性,进一步研究阿达木单抗抑制重组TNF-α的细胞毒作用,以确认阿达木单抗的生物活性.结果 阿达木单抗与重组人TNF-α的结合常数(Ka)为(2.114±0.007)×105,解离常数(Kd)为(5.315±0.220)×l0-5,亲和力常数(KD)为(2.515±0.107)×10-10;与重组食蟹猴TNF-α的Ka为(2.574±0.068)×105,Kd为(1.554±0.124)×10-5,KD为(5.320±1.271)×10-10.阿达木单抗与50 nmol/L重组人TNF-α、重组食蟹猴TNF-α、重组小鼠TNF-α和重组大鼠TNF-α结合的响应值分别为84.3、66.4、1 3和-0.8 RU,呈现明显的种属差异.阿达木单抗可抑制重组人TNF-α和重组食蟹猴TNF-α对L929细胞的毒性作用,其半数有效浓度分别为194.0和685.5 pmol/L,但对重组小鼠或重组大鼠TNF-α导致的细胞毒作用无影响,细胞水平检测结果与Biacore T200系统检测结果一致.结论 用Biacore T200生物分子相互作用分析系统研究抗原抗体结合简便快速准确,该方法适合用于重组人TNF-α单抗生物学活性分析与药效学评价.
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人程序性死亡配体2基因真核表达载体的构建及其在L929细胞株中的表达
目的：构建人程序性死亡配体2（PD-L2）基因的真核表达载体，并通过转染获得稳定表达该分子的L929基因转染细胞株。方法获取人外周血单个核细胞，通过RT-PCR方法获取PD-L2基因全长序列。并与pIRES2真核表达载体连接，通过脂质体方法转染L929细胞，经G418筛选获得稳定表达该基因的细胞株。流式细胞术鉴定PD-L2基因的表达。结果成功构建了真核表达载体pIRES2/PD-L2，建立了稳定转染该基因的L929细胞株。结论稳定表达PD-L2分子的基因转染细胞株为进一步研究该分子的生物学功能提供了物质基础。
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镍离子诱导小鼠成纤维细胞氧化应激反应的实验研究
目的：研究镍离子对小鼠成纤维细胞L929的毒性作用规律及与氧化应激反应的关系。方法：小鼠成纤维细胞L929在不同镍离子浓度（0、200、400、800μmol/L）的培养液中培养24、48、72 h，MTT法测定细胞相对增值率（relative growth rate， RGR）；培养48 h，利用荧光探针DCFH-DA结合流式细胞术检测细胞内活性氧（reactive oxygen species， ROS）含量，通过比色法测定脂质过氧化反应的终产物丙二醛（maleic dialdehyde， MDA）。结果：200～800μmol/L镍离子处理细胞不同时间点下各组间存在统计学差异（P＜0.05）。各浓度组均表现出细胞毒性，中浓度组及高浓度组细胞毒性程度较高。200～800μmol/L镍离子处理细胞48 h，各组间DCF荧光值及MDA生成量存在统计学差异（P＜0.05），且浓度越高，DCF荧光值及MDA生成量越高。结论：在镍离子刺激下，L929细胞增殖活力受到明显抑制，且呈现浓度依赖和时间依赖趋势；一定浓度的镍离子可诱导L929细胞发生氧化应激反应，氧化应激反应可能是镍离子细胞毒性反应的重要机制之一。
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镍离子对小鼠成纤维细胞毒性的实验研究
目的 探索镍离子对L929细胞毒性作用规律.方法 小鼠成纤维细胞L929在含不同镍离子浓度(0、200、400、800μmol/L)培养液中培养24、48、72h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,MTT法测定细胞相对增值率(RGR)；培养24h,透射电镜观察细胞超微结构改变并拍照.结果 200 ～ 800 μmol/L镍离子处理细胞不同时间点下各组间存在统计学差异(P＜0.05).倒置相差显微镜和透射电镜下,经不同浓度镍离子处理24h后,细胞形态和亚结构出现不同程度的损害,出现细胞回缩、细胞核形态不规则、胞浆空泡性改变、线粒体肿胀等改变,且随着浓度增大,结构破坏更加明显.结论 在镍离子刺激下,L929细胞增殖受到抑制,细胞形态及亚结构均有中毒样改变,在观察浓度及时间范围内,呈现浓度依赖和时间依赖趋势.
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一种新型牙科陶瓷的细胞毒性评价研究
目的 检测一种新型硅藻土可切削陶瓷的细胞毒性,初步评价其生物相容性.方法 小鼠成纤维细胞L929在新型硅藻土可切削陶瓷浸提液中培养1、3、5 d,并与其他4种牙科常用修复材料作比较,MTT法观察细胞形态变化,测量吸光度(A值),计算细胞相对增殖率(RGR),判断细胞毒性的级别.结果 阴性组,新型硅藻土可切削陶瓷组,铸瓷组,钴铬合金烤瓷之间无统计学差异(P>0.05).阴性组与树脂,镍铬合金烤瓷之间存在统计学差异(P<0.05).所有材料细胞毒性级别都在1级.结论 新型硅藻土可切削陶瓷无明显的细胞毒性.
关键词： 新型硅藻土可且削陶瓷 L929细胞 MTT 细胞毒性 -
5种牙本质粘结剂的细胞毒性研究
目的 比较Clearfil S3 Bond和Single Bond,Clearfil SE Bond,XenoⅢBond,G Bond对L929细胞活力的影响.方法 小鼠成纤维细胞L929在Clearfil S3 Bond,Single Bond,Clearfil SE Bond,XenoⅢBond,G-Bond五种牙本质粘结剂的不同体积分数浸渍液(100％、50％、25％、12.5％)作用不同时间(24 h、72 h、120 h)后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,MTT法测定细胞相对增值率(RGR);用5级毒性分类法评级,并进行统计分析.结果 5种牙本质粘结剂在不同体积分数浸渍液的作用下,L929细胞形态均发生不同程度的变化.在72 h、120 h后,12.5％ Clearfil S3 bond组和Clearfil SE Bond组的RGR值显著高于其它各组的RGR值(P＜0.05).结论 5种牙本质粘结剂的体外细胞毒性均较弱,其中第7代牙本质粘结剂Clearfil S3Bond和第5代牙本质粘结剂Clearfil SE Bond的细胞毒性显著低于其他几种粘结剂,可以安全地应用于临床.
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人CD160基因转染细胞株的建立及其生物学特性的研究
目的 克隆人CD160基因,并构建含有该目的基因的pIRES2 - EGFP重组质粒载体,获得稳定表达CD160分子的基因转染细胞.方法 从人外周血cDNA文库中扩增CD160的基因,另以VSIG4基因的cDNA为模板扩增跨膜区基因片段,将它们一并装入pIRES2 - EGFP质粒载体中,脂质体法共转染L929细胞,用G418筛选出能稳定表达CD160分子的L929细胞株.结果 成功克隆出了CD160的基因,构建了pIRES2 - EGFP/CD160TMv质粒载体,并建立了稳定表达人CD160分子的L929转基因细胞株,该转基因细胞能结合L929/HVEM转基因细胞,证明其功能性.结论 构建了含人CD160基因的重组pIRES2-EGFP质粒载体和建立稳定表达人CD160分子的细胞株,为CD160分子的后续研究奠定基础.
关键词： CD160 pIRES2-EGFP 基因转染 L929细胞
