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基于磁球富集的大肠杆菌菌株水平鉴别
本文研究低成本、快速鉴别大肠杆菌菌株水平的方法。通过合成Fe3O4-COOH纳米颗粒，使其快速富集细菌裂解液中的蛋白，然后通过MALDI/TOF MS对蛋白进行快速检测，鉴别大肠杆菌O127：H6和O157：H7。该方法简单、快速、成本低，因此，利用这种方法鉴别致病菌菌株水平有很大潜力。
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tBHQ对CdTe QDs诱导AML 12细胞凋亡的拮抗作用研究
目的 结合叔丁基对苯二酚(tBHQ)的抗氧化效果,探讨碲化镉量子点(CdTe QDs)对小鼠正常肝细胞(AML 12)的毒性效应以及调控机制.方法 四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测量子点对AML 12细胞增殖活性影响；DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)产生；Annexin-V-FITC法检测量子点对细胞凋亡的影响；Real-time PCR法检测Fas、Bcl-2、Bax mRNA表达水平的改变.结果 CdTe QDs染毒24 h后,AML 12细胞有明显的生长抑制作用；随着染毒剂量增加,细胞内ROS水平增加,细胞凋亡发生率增加,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).经tBHQ预处理后,细胞内ROS水平及凋亡发生率降低,与同剂量未用tBHQ预处理的实验组结果比较,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞内的Bcl-2 mRNA表达水平下调,Fas mRNA表达上调,且有剂量依赖效应,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),经tBHQ预处理后的细胞,与同剂量未用tBHQ处理的实验组结果比较Bcl-2 mRNA表达上升,FasmRNA表达下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CdTe QDs可以抑制AML 12细胞活力,诱导细胞内ROS产生,产生氧化应激,促进细胞凋亡发生,其凋亡机制可能与Fas mRNA表达上调以及Bcl-2 mRNA表达的下调有关.抗氧化剂tBHQ可以在一定程度上减轻CdTe QDs的毒性作用.
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不同粒径碳酸钙对HCT-8细胞的氧化损伤作用
目的 体外观察不同粒径碳酸钙(CaCO3)颗粒对人回盲肠上皮HCT-8细胞的细胞毒性和氧化损伤作用.方法 将细胞分别暴露于微米和纳米CaCO3颗粒,测定不同染毒剂量和时间对HCT-8细胞活力(MTT法)及细胞内活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)水平的影响.结果 微米和纳米CaCO3颗粒均可导致细胞活力降低、细胞内ROS及MDA产生增多、而SOD及GSH含量下降(P＜0.05),并呈剂量依赖性.在相同剂量水平下,纳米颗粒的毒性大于微米颗粒,而维生素C可减轻CaCO3颗粒造成的细胞毒性和氧化损伤.结论 CaCO3颗粒在体外对HCT-8细胞的毒性与剂量和粒径相关,氧化损伤可能是造成CaCO3颗粒细胞毒性的原因之一.
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纳米颗粒吸入毒性研究进展
随着纳米技术的广泛应用,纳米材料的安全性问题也越来越多的受到人们的重视.本文从纳米颗粒的流行病学研究、毒理学研究等方面综述了目前关于纳米颗粒吸入毒性方面的研究进展,提出纳米材料呼吸毒理学研究存在的问题,为进一步开展吸入毒性研究提供了参考.
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肿瘤靶向药物相关受体研究进展
对癌细胞及其组织靶向给予抗癌药物是临床治疗癌症的新手段,当细胞毒化疗剂(如紫杉醇和阿霉素)有效杀死癌细胞时,它们并不能区分癌细胞和正常细胞;当患者需要根除肿瘤大剂量使用细胞毒剂药物时,这种非针对性的特异性选择将导致患者全身毒性不良反应,从而造成患者非肿瘤部位组织和功能损伤.本文主要针对靶向药物在肿瘤微环境过表达受体的作用机制,及7种相关受体分子的结构和功能特点进行阐述.
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不同暴露时间TiO2纳米粒子对雌性小鼠脑单胺类神经递质的影响
目的 探讨小鼠鼻腔滴注二氧化钛(TiO2)纳米粒子对脑中单胺类神经递质的影响.方法 以50 mg/kg的剂量给CD雌性小鼠隔天鼻腔滴注不同粒径大小的TiO2(25、80和155 nm)水悬浮液(浓度为105 mg/L),同时设定对照组.分别在暴露2、10、20和30 d后用电感耦合等离子体质谱仪分析小鼠脑组织中钛元素的含量,采用反相高效液相色谱-电化学检测法测定暴露20和30 d后小鼠脑中单胺类神经递质的含量.结果 在暴露10 d时,小鼠脑中钛的含量上升较快,25 nm组小鼠脑中钛的含量即达到(1059.3±293.5)ng/g;在暴露20 d之后,脑中钛的含量有一定降低,仍维持在较高水平,25 nm组中钛的含量下降为(654.7±269.2)ng/g.暴露30 d时钛含量没有明显改变.由于吸入的TiO2粒子在小鼠脑中的蓄积,导致80 nm和155 nm组中小鼠脑中去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT)含量在暴露20 d时明显升高,而多巴胺(DA)、3、4-双羟苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量有一定下降.结论 吸入的TiO2颗粒可以经鼻黏膜吸收入脑并能蓄积于小鼠的脑组织中,影响脑中单胺类神经递质的代谢.
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磁性氧化铁蛋白纳米颗粒在肿瘤组织中的定位和成像
近年来,应用纳米技术进行恶性肿瘤早期诊断与治疗的研究在世界范围内已全面展开,研究人员利用无机纳米材料,仿生合成了一种新型纳米肿瘤诊断试剂——铁蛋白纳米颗粒,它是由氧化铁纳米内核及铁蛋白外壳两部分组成的双功能纳米小体,蛋白外壳能够特异识别肿瘤细胞,氧化铁纳米内核能够催化底物使肿瘤显色,以此区分正常细胞和肿瘤细胞.
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聚乙二醇化骨形态发生蛋白-2基因转染兔骨髓间充质干细胞及其表达测定
目的:聚乙二醇化骨形态发生蛋白-2基因(PEG/BMP-2)纳米颗粒转染兔骨髓间充质干细胞(rBMSCs),检测骨形态发生蛋白-2(BMP-2)在靶细胞中的表达.方法:原代分离培养rBMSCs,分别采用PEG/BMP-2、脂质体/BMP-2转染细胞,采用流式细胞仪检测转染效率,采用Western Blot和real time RT-PCR方法检测BMP-2表达.结果:成功制备出PEG/BMP-2纳米颗粒并将PEG/BMP-2转染至rBMSCs,转染细胞中BMP-2呈高表达,且与脂质体转染法相比,具有更高的转染效率.结论:PEG/BMP-2纳米颗粒转染rBMSCs可高表达BMP-2,为骨缺损治疗修复提供新的治疗方法.
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纳米颗粒标记可视化试纸条在农药残留筛查中的研究进展
农药残留严重影响中药的质量安全,国内外对于农药残留情况也愈加关注.农残快速检测技术可以用于现场快速筛查,发展迅速,尤其是纳米颗粒标记可视化试纸条作为近年来发展迅速的快速检测方法之一,备受关注.该文系统综述了用于小分子农残检测的试纸条分类和研制的关键影响因素,并通过单残留检测、多农残筛查、定量仪分析和新型纳米试纸条在农残检测的应用实例探讨了农残试纸条的研究进展,并对可视化试纸条在中药农残检测中的应用进行了展望,旨在为中药产业农残快速检测技术的发展提供参考.
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壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米DNA疫苗肌注BALB/c鼠诱导细胞免疫效应的研究
探讨载有日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)prME蛋白与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)编码基因重组子(命名为pJME/GM-CSF)的壳聚糖纳米颗粒的免疫佐剂效应及其机制.本研究采用复凝聚法制备壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米颗粒;免疫组化法检测肌肉注射部位浸润细胞的类型,流式细胞仪检测不同免疫原免疫鼠后脾脏DC表型和功能的变化;乳酸脱氢酶释放法检测CTL活性.结果显示制备的壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米颗粒鉴定正确;pJME/GM-CSF募集包括非成熟树突状细胞、巨噬细胞、粒细胞到注射部位,增加脾脏树突状细胞表面MHCⅡ的表达,抗原摄取和递呈功能,增强疫苗诱导的细胞免疫反应,壳聚糖-pJME/GM-CSF纳米颗粒可进一步扩大pJME/GM-CSF的上述作用.这些结果表明壳聚糖可作为DNA疫苗肌注免疫时的传送载体,能够增强pJME/GM-CSF疫苗的细胞免疫应答.
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溶瘤腺病毒治疗肿瘤的研究进展
溶瘤腺病毒是一种改造过的能够选择性地在肿瘤细胞中复制,并能够杀死肿瘤细胞的腺病毒,目前已经应用于肿瘤治疗中.但是因为肿瘤的复杂性以及高突变性,所以提高溶瘤腺病毒对肿瘤的有效性,选择性和安全性成为了主要的研究方向.能够在体内正常表达shRNA、细胞因子、自杀基因、基质修饰蛋白等治疗性基因的溶瘤腺病毒具有比单纯的溶瘤腺病毒更强的抗肿瘤活性.而具有肿瘤特异性启动子,尤其是双调控启动子的溶瘤腺病毒对肿瘤细胞具有更强的选择性杀伤作用.另外用脂质体、PEG聚合物、纳米颗粒、多肽等包裹的溶瘤腺病毒能够减少病毒的免疫原性以及对肝脏的毒性,增强了全身给药途径的抗肿瘤活性.特别是用PEG连上抗体、小肽、细胞因子和配体,能显著提高溶瘤腺病毒的选择性.因此,整合病毒载体与非病毒载体的优点并与免疫治疗相结合,是一个很有希望的提高病毒靶向治疗效果的策略.
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HEVAg-PLGA纳米颗粒疫苗小鼠体内免疫学研究
研究重组戊型肝炎抗原(HEVAg)-乳酸/乙醇酸共聚物(PLGA)纳米颗粒抗原能否在动物体内诱导产生免疫应答.制备HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原后,通过皮下、滴鼻、口服途径接种Balb/c小鼠,每隔4周加强免疫两次,HEVAg与铝盐佐剂(铝佐剂疫苗Al2O3-Ag)为对照组,一定时间内检测抗体及细胞因子的应答水平.结果HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原在小鼠体内诱导产生有效的体液免疫、细胞免疫.滴鼻、口服途径黏膜系统中诱导产生较高滴度的IgA抗体,ELISPOT结果显示鼻腔、唾液腺中IgA ASCs数量显著增加;皮下途径诱导产生较高滴度的IgG抗体;常规铝佐剂疫苗相比于HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原诱导较强的IgG抗体水平,未诱导产生黏膜免疫应答;HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原诱导产生较强细胞免疫应答,皮下接种途径IFN-γ、IL-4生成细胞数量显著高于其它免疫组.与铝佐剂疫苗相比,HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原能有效诱导产生系统免疫及黏膜免疫应答,显示HEVAg-PLGA有潜力成为备选HEV黏膜疫苗抗原,同时展示PLGA颗粒作为黏膜系统抗原递送载体及黏膜佐剂的优越性.
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纳米羟基磷灰石可介导转染人肺癌A549细胞
目的 探讨纳米羟基磷灰石(nHAP)介导带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的pGenesil-1质粒转染人肺癌A549细胞的可行性.方法 用均相沉淀法制备nHAP;透射电镜观察纳米粒结构;经超声分散及碳酸钠预处理后,在pH值7.4环境下应用多聚赖氨酸(PLL)修饰nHAP;实验分为nHAP-PLL组、脂质体组及对照组,分别配制转染复合物并转染A549细胞;荧光显微镜观察EGFP的表达;流式细胞仪检测pGenesil-1的转染率.结果 透射电镜下nHAP呈针状颗粒,粒径较均匀,约(15～20)mm×(60～80)nm,分散程度良好;nHAP-PLL组和脂质体组均见EGFP表达阳性的A549细胞,对照组未见EGFP表达阳性的A549细胞;nHAP-PLL组pGenesil-1转染A549细胞的转染率为(31.8±1.9)%,与脂质体组的转染率(33.4±3.7)%无差异,对照组未见转染阳性的A549细胞.结论 nHAP经PLL表面修饰后可介导人肺癌A549细胞基因转染.
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A型口蹄疫病毒1D蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达、纯化及电子显微镜检测
目的 本实验旨在表达出高可溶性的A型口蹄疫病毒1D蛋白,并通过电子显微镜检测,以期望形成纳米样颗粒.方法 根据A型口蹄疫病毒核酸序列,得到FMDV A/GDMM/CHA/2013株的1D蛋白基因,并进行截短和优化,共132个氨基酸;同时,从结肠弯曲杆菌(Campylobacter coli)中分离得到135个氨基酸的铁蛋白(Fn)基因片段,将A型口蹄疫病毒1D蛋白与铁蛋白串联,设计并合成了口蹄疫病毒1D蛋白-铁蛋白片段,命名为CcFnt166AS.构建了CcFnt166AS融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体.分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选出高可溶性表达的CcFnt166AS融合蛋白.重组蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和纯化,进行电子显微镜检测.结果 成功构建9种CcFnt166AS表达载体;9个标签中,MBP与CcFnt166AS蛋白相融合的可溶表达效果好,并获得了高纯度的MBP-CcFnt166AS重组蛋白质;电子显微镜结果显示,MBP-CcFnt166AS形成了纳米样颗粒.结论 本实验建立了稳定获得CcFnt166AS重组蛋白质的方法.
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O型口蹄疫病毒VP1蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达、纯化及纳米样结构观察
目的 本实验旨在高效表达可溶性的O型口蹄疫病毒VP1蛋白,并形成纳米样颗粒.方法 根据O型口蹄疫病毒核酸序列,得到FMDV O/MYA/7/98株的VP1蛋白基因,并进行截短和优化,共73个氨基酸;同时,从肠道沙门菌(Salmonella enterica)中分离得到135个氨基酸铁蛋白(Fn)基因片段,将O型口蹄疫病毒VP1蛋白与铁蛋白串联,设计并合成了口蹄疫病毒VP1蛋白-铁蛋白基因片段,命名为SeFnt16798.构建了SeFnt16798融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体.分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选高效可溶性表达的SeFnt16798融合蛋白.重组蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和纯化,进行电子显微镜检测.结果 实验成功构建9个SeFnt16798表达载体;9个标签中,MBP与SeFnt16798蛋白相融合的可溶性表达效果好,并获得了高纯度的MBP-SeFnt16798重组蛋白质;电子显微镜结果显示,MBP-SeFnt16798形成了纳米样颗粒.结论 本实验建立了稳定获得SeFnt16798重组蛋白质的方法.
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靶向纳米颗粒--治疗肥胖与代谢疾病的新型药物载体
靶向纳米颗粒（targeted nanoparticles）是一种新型给药手段，其包裹减肥药物成功治疗肥胖的研究工作，近由哈佛大学医学院与麻省理工学院 Robert Langer 团队完成，并发表于2016年5月份的美国科学院院报（PNAS）。
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量子点荧光标记及其应用
量子点(quantum dot,QD)又称为半导体纳米晶体(semiconductor nanocrystal),是一种由Ⅱ-Ⅷ或Ⅲ-Ⅴ族元素组成的纳米颗粒,直径约1～100 nm.在激发光的诱导下,量子点会产生荧光.一、量子点的基本特性
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羟基磷灰石纳米粒子对卵巢癌作用的体外实验研究
目的 探讨羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HAP)纳米粒子对卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用.方法 通过细胞毒性试验观察HAP纳米粒子对细胞生长的作用,测定HAP纳米粒子的量效曲线和时效曲线.通过丫啶橙/溴化乙啶染色荧光显微镜观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期来观察HAP粒子对细胞凋亡的作用.结果 HAP纳米粒子对SKOV3细胞生长具有抑制作用,当细胞的抑制率为30%、50%和70%时,该纳米粒子的浓度分别为8.53mg/L、26.52mg/L和61.99mg/L.形态学和定量的检测均证实HAP纳米粒子有诱导细胞凋亡的趋势,其凋亡率为(38.32±17.87)%,而对照组为(11.88±7.69)%,两组间差异显著,P＜0.05.并且HAP纳米粒子作用后,S期细胞明显少于对照组,而G0/G1期细胞明显多于对照组,两组间差异显著,P＜0.05.结论 HAP纳米粒子对卵巢癌细胞株SKOV3的生长具有明显的抑制作用,其作用机制可能是诱导肿瘤细胞凋亡.
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纳米颗粒在石英晶体微天平生物传感器中的应用与研究进展
得益于快速、简便、可在线分析的优点,石英晶体微天平生物传感器在生物、医学、食品安全分析、环境和军事等领域都有着重要的应用价值,但灵敏度和再生能力等性能的不足仍限制其走出实验室获得实际应用,纳米颗粒的引人有望解决这一难题.纳米颗粒表面活性位点多,生物兼容性好,非常适宜于生物化学分析检测.在石英晶体微天平生物传感器中,纳米颗粒可作为载体固定敏感分子;作为标记物放大检测信号;还可在磁场的辅助下提高传感器的再生能力和缩短检测时间.文中结合近年来国内外新研究进展,对这三个方面进行了详细的评述,并探讨了未来的发展趋势.
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纳米沉淀法及其在纳米药物载体领域的应用研究进展
纳米材料在生物医学领域具有广泛的应用.纳米沉淀法通过控制溶质溶液与非溶剂的混合制备纳米颗粒,反应快速,适用于多种纳米颗粒的制备.近年来纳米沉淀法领域已取得大量研究进展,基于混合器的Flash纳米沉淀技术以及基于水动力聚焦的微流控纳米沉淀技术的出现,提高混合效率和对反应条件的控制性,为高质量纳米颗粒的规模化制备提供条件.纳米沉淀法被广泛用于各种纳米颗粒以及药物载体(姜黄素、紫杉醇、阿霉素、喜树碱、顺铂、青霉素等)的制备,对其近年来的研究进展进行总结归纳.
