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动物致伤人群狂犬疫苗免疫后血清学分析
人群对狂犬病毒普遍易感,感染后没有特效治疗药物,一旦发病死亡率几乎为100%.目前唯一有效的途径是疫苗接种或同时应用抗血清.由于现用狂犬疫苗制剂的质量、使用方法及人群个体差异等各种原因影响,并非所有人群免疫后均产生保护性抗体及不同人群产生抗体的情况不同.对于暴露后人群,若未能及时产生保护性抗体,情况将非常危险.所以我们对本站免疫人群进行血清学检测,目的是一能及时对未被保护人群采取有效的补救措施;二评价现用狂犬疫苗免疫效果;三找出影响抗体产生水平的因素,对沿用免疫方案作针对性改进,以求更有效地保护被感染人群.现将结果报告如下.
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福氏志贺菌O-抗原磷酸乙醇胺修饰特异抗血清的制备
目的 制备针对福氏志贺菌O-抗原磷酸乙醇胺(PEtN)修饰的抗血清.方法 用血清型Yv菌株036_Yv(O-抗原PEtN修饰)免疫兔子制备抗血清,用036_Yv的宿主菌036(O-抗原无PEtN修饰)吸附后,制备针对O-抗原PEtN修饰的特异抗血清,并用135株福氏志贺菌检测血清的特异性.结果 制备的血清能够特异地与O-抗原存在PEtN修饰的福氏志贺菌发生凝集,效价为1∶32;除了O-抗原携带PEtN修饰的福氏志贺菌血清型Xv,Yv和4av外,制备的血清不能与其他血清型发生交叉凝集,具有很好的特异性.结论 成功制备了针对福氏志贺菌O-抗原PEtN修饰的特异抗血清,可应用于痢疾检测和监测.
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血清睾酮酶联免疫吸附分析试剂盒的研制
目的血清睾酮酶联免疫吸附分析试剂盒的研制.方法用人工合成抗原睾酮-3-(O-羧甲基)肟:BSA免疫新西兰大耳白兔,制备出睾酮抗体并测定其效价及亲和常数.在此基础上,采用竞争性结合法,研制血清睾酮酶联免疫吸附分析试剂盒,并对所研制的试剂盒进行方法学鉴定.结果睾酮抗血清滴度1:50 000,Ka=1.22×109L/M(M表示摩尔数).睾酮酶免试剂盒:灵敏度0.1 ng/ml;精密度:批内、批间变异系数分别为CV=3.4%和CV=7.1%.确定了男女性正常值范围:女性为0.15～1.00ng/ml,平均值为0.46 ng/ml;男性为1.21～11.0 ng/ml,平均值为6.6 ng/ml.结论本试剂盒适于临床常规检验和科研工作需要,以国产代替进口,具有广泛应用前景.
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狂犬病的防治、疫苗和抗血清的安全性探讨
狂犬病又称恐水症,是由狂犬病毒所致的急性传染病,人被病兽咬伤而感染,多见于狗、猫、狼等肉食动物.狂犬病主要临床表现为兴奋、恐水、咽肌痉挛、进行性瘫痪等.狂犬病是一种十分凶险的疾病,即使在科学比较发达的今天,提起狂犬病,也会让人毛骨悚然,它在某种程度上说比癌症更可怕,当今病死率高的疾病就是狂犬病.狂犬病一旦发作,在症状出现后病死率几乎是100%.虽然狂犬病的死亡率是100%,但狂犬病又是百分之百可以预防的.
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郑州市腹泻患者、宿主动物及食品中肠出血性大肠埃希菌O157:H7监测
为了解郑州市腹泻患者、宿主动物及食品感染或污染O157:H7状况,建立全市流行病学监测网,在辖区内采集动物(牛、羊、猪、鸡、狗等)、门诊腹泻患者粪便及市售食品进行监测.1.材料与方法:mEC增菌培养基、SMAC培养基、抗-E.coli O157:H7免疫磁珠、磁铁架、O157抗血清、H7抗血清等均由河南省疾病预防控制中心提供,有效期内使用.检测方法按照<2005年重点肠道传染病国家级监测点工作会议>的方法进行.
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广州地区1998～2000年儿童流行性感冒病毒监测
在1998年1月至2000年12月对我院门诊临床怀疑为病毒性上呼吸道感染的儿童1 693例进行流行性感冒(流感)病毒检测.每周采集约10份门诊患儿咽分泌物,接种到MDCK细胞上.放入33℃温箱培养72 h,上清液进行血凝试验.将血凝试验阳性的标本用A/武汉/359/95(H3N2)、A/京防/53/97(H1N1)、B/京防/184/93病毒鸡抗血清进行加敏血凝抑制试验鉴定(由国家流感中心鉴定).
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956例暴露患者抗狂犬病血清联合运用抗过敏药的临床观察
Ⅲ度犬咬伤患者预防狂犬病除立即处理伤口,还应注射狂犬病疫苗和抗血清,但后者系异源性蛋白副反应较大,使用中易发生变态反应和血清病,发生率为15%～45%[1].为此笔者对应用抗狂犬病血清同时服用抗过敏药预防过敏反应的效果进行观察.
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禽呼肠孤病毒分离株P10、P17、δ3蛋白基因的表达及抗血清的制备
禽呼肠孤病毒的感染在我国鸡群中非常普遍,它除了可引起鸡传染性关节炎外,还可能引起矮小综合症和免疫抑制等.从鸡群中分离到的不同毒株ARV的毒力差别较大,抗原性也不尽相同[1].ARV是一种双股RNA病毒,病毒颗粒中的基因组有10个不同的独立节段组成[2].其中对S1节段研究的比较详细,而对其它节段的研究尚不深入.现已知,ARV的S1节段有3个ORF,分别编码P10、P17和δ3三种蛋白质[3,4 ].其中δ3是一种结构蛋白,并可能与病毒吸附宿主细胞及病毒中和反应相关[5].而P10和P17为非结构蛋白,但其中P10与感染细胞后细胞膜融合相关[6].为此,Bodelon等[4]在大肠杆菌中分别表达S1节段的P10、P17和δ3三个基因,同时比较了这三个基因产物对细菌膜通透性的影响.
关键词： 禽呼肠孤病毒 P10、P17、δ3蛋白 表达 免疫荧光试验 抗血清 -
免疫程序对抗猪血浆纤维连接蛋白抗血清效价的影响
浆FN血清,皮下+淋巴结注射和多次加强免疫是较好的免疫方法,纯种新西兰兔较杂种兔更易产生兔抗猪FN抗血清.
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HPV 18 L1病毒样颗粒的表达纯化及其豚鼠抗血清制备
目的 优化人乳头瘤病毒(HPV)18型晚期基因L1并在昆虫细胞中表达,获得HPV 18 L1病毒样颗粒(VLP),制备豚鼠抗血清.方法 联合利用昆虫细胞偏性密码子、C末端截短32个氨基酸、降低mRNA二级结构等策略优化HPV 18 L1基因,合成后克隆入pFastBacl载体,构建重组病毒,感染sf9昆虫细胞72 h后进行Western blot表达鉴定,密度梯度离心法纯化后进行纯度鉴定及形态学鉴定,获得HPV 18 L1 VLP,联合弗氏佐剂免疫豚鼠制备抗血清.结果 HPV 18 L1优化基因在昆虫细胞中可有效表达,纯化的HPV 18 L1蛋白纯度达90%以上,电镜观察可见直径约为50 nln的VLP,豚鼠免疫血清中HPV 18 L1 VLP特异性抗体滴度达5.12×105.结论 HPV 18 L1优化基因可在昆虫细胞中高效表达并组装成VLP,制备的高滴度抗血清为HPV 18 L1 VLP疫苗的进一步研究打下基础.
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SIEA-Gp101分子抗原的分离纯化及其单特异性抗血清的制备
应用SDS-PAGE、电渗、透析等方法,分离纯化SIEA-Gp101分子抗原.采用多途径免疫法制备单特异性抗血清,琼脂扩散试验和ELISA测定抗体的效价,SDS-PAGE和ELIB检测抗体的特异性.结果表明纯化的SIEA-Gp101为单一抗原分子,对SIEA-Gp101的抗血清进行ELIB分析,证明其仅识别SIEA-Gp101抗原,说明SIEA-Gp101分子具有抗原性.
关键词： 日本血吸虫未成熟卵抗原 糖蛋白 纯化 抗血清 -
细粒棘球蚴转化生长因子βⅡ型受体胞外域基因的克隆、表达及抗血清制备
目的 构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)转化生长因子β Ⅱ型受体胞外域(Extracellular Domain of Transforming Growth Factor beta type Ⅱ receptor of Eg,EgTβRⅡ-E)原核表达载体,诱导表达融合蛋白并制备其特异性抗体. 方法 采集羊源Eg原头蚴,Trizol法提取总RNA,RT-PCR扩增EgTβRⅡ-E基因,构建pET28a-EgTβRⅡ-E原核表达载体,PCR、限制性内切酶双酶切和测序鉴定正确的阳性质粒转入BL21E.coli感受态细胞,IPTG诱导EgTβRⅡ-E融合蛋白表达并免疫小鼠,制备抗血清. 结果 成功构建pET28a-EgTβRⅡ-E原核表达载体,经0.6mmol/L IPTG诱导表达18 ku的EgTβRⅡ-E融合蛋白.用融合蛋白免疫小鼠,获得高效价(1∶256 000抗血清). 结论 制备的EgTβRⅡ-E融合蛋白具有抗原性,免疫小鼠获得高效价的抗血清,为研究EgTβRⅡ的生物学功能奠定了基础.
关键词： 细粒棘球蚴 转化生长因子βⅡ型受体 基因克隆 抗血清 -
重组刚地弓形虫Peroxiredoxin蛋白的纯化及抗血清制备
目的:对原核系统表达的重组刚地弓形虫Peroxiredoxin(rTgPrx)蛋白进行镍亲和层析纯化,免疫大鼠,制备抗血清.方法:优化rTgPrx表达条件,获得大量的可溶性蛋白,经镍亲和层析法纯化后皮下注射免疫Wistar大鼠,间接ELISA法测定血清抗体效价.结果:在表达菌液Asoo为0.5,IPTG浓度为0.2 mmol/L,37℃诱导10h时,可溶性rTgPrx表达量较高;用镍亲和层析纯化获得纯的目的:蛋白,免疫大鼠后诱导产生高滴度抗体血清,效价达1:12800以上.结论:镍亲和层析法纯化的rTgPrx具有免疫原性,用该蛋白免疫大鼠可获得高效价的抗rTgPrx血清.
关键词： 刚地弓形虫 peroxiredoxin 蛋白纯化 抗血清 -
致病性大肠埃希菌EspA抗血清制备及其对细菌粘附的影响
目的 制备致病性大肠埃希菌(EPEC)分泌蛋白 A(EspA)抗血清,并检测其对EPEC粘附的中和作用. 方法 以EPEC标准株E2348/69为模板,采用PCR方法获得EspA基因,将目的基因连接载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a-EspA,转入表达菌株BL21后用IPTG诱导表达并采用Ni-柱亲和层析法纯化EspA;以纯化EspA辅以佐剂免疫家兔,多次免疫获得抗血清,采用中和试验检测抗血清中和EPEC粘附Hep-2细胞的能力. 结果 成功构建Es-pA原核表达质粒,表达蛋白分子质量单位为37 ku,与预期值相符.用纯化的表达蛋白EspA免疫家兔,对流免疫电泳检测抗血清的效价为1∶2,但稀释度≤1∶16时仍能效抑制EPEC粘附Hep-2细胞. 结论 EspA抗血清具有抑制EPEC粘附Hep-2细胞作用,有望为疫苗研发的候选抗原.
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EPEC粘附素IntiminC280抗血清的制备及其中和能力测定
目的 制备EPEC粘附素IntiminC280抗血清,检测其中和EPEC对Hep-2细胞粘附作用.方法 用基因克隆技术构建IntiminC280表达载体pET32 (α)-intiminC280,转化表达宿主菌BL21,用IPTG诱导His-IntiminC280融合蛋白的表达,SDS-PAGE分析其表达形式;用NI柱亲和层析法纯化融合蛋白,并辅以佐剂免疫家兔,4次免疫后采血,分离血清,对流免疫电泳法检测抗血清效价;以该抗血清作为一抗,采用Western blot检测EPEC粘附素Intimin的表达;用不同稀释度的抗血清中和EPEC,显微镜下观察细菌被中和后对Hep-2细胞的粘附情况.结果 成功构建BL21/pET32 (α)-intiminC280原核表达系统,表达蛋白的分子质量单位为50 ku,与预期相符.用纯化的His-IntiminC280免疫家兔获得高效价抗血清,16倍稀释后仍能有效抑制EPEC对Hep-2细胞的粘附.结论 IntiminC280抗血清具有抑制是EPEC粘附Hep-2细胞作用,可作为EPEC疫苗研发的备选抗原.
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变性乙型肝炎病毒表面s抗原抗体的制备和应用
在新型乙型肝炎基因工程疫苗(s+pre s1,ss1)的研制中,对s抗原的免疫学鉴定至关重要,但我国现有的乙型肝炎病毒表面抗体不能有效地用于蛋白印迹法(Western blot)鉴定变性乙型肝炎病毒表面s抗原.常规的从SDS-PAGE凝胶上回收变性抗原多肽免疫动物,可诱导免疫应答,产生抗体,但从凝胶上回收的变性抗原量很少,无法用来大量制备抗血清;电泳结束后,切下含特异多肽的凝胶条,制成凝胶碎末,或凝胶转至硝基纤维素滤膜,剪下相应部分,溶于二甲基亚砜,再加佐剂免疫动物,整个方法操作步骤多、耗时长、切割相应多肽部位难以掌握精确[1].我们建立了一种新的抗变性乙型肝炎病毒(HBV)s抗原抗血清的制备方法,并把该方法制备的抗血清成功地应用于HBV s抗原的Western blot鉴定工作中.
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空肠弯曲菌HB9313及galE变异株抗血清诱导周围神经病变的差异
格林-巴利综合征(Guillain-Barré syndrome, GBS)是一种常见的周围神经病.其发生机制尚未阐明,较多资料显示GBS病人血清中存在多种神经节苷脂抗体,并发现轴索型GBS与空肠弯曲菌感染及抗神经节苷脂三者间存在密切关系[1],故空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni, CJ)感染介导的自身体液免疫反应在轴索型GBS发病中的作用已引起广泛关注.
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抗伤寒沙门菌SOD血清的制备及其免疫保护作用的研究
目的 制备抗伤寒沙门菌Fe-SOD血清,研究其免疫保护作用,探讨SOD与沙门菌毒力的关系.方法 用纯化的伤寒沙门菌(Stw1)Fe-SOD免疫家兔制备兔抗Fe-SOD血清.利用ELISA法检测抗血清的效价.免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗体对酶活性抑制试验分析抗血清的特性.用不同浓度的抗血清预先处理Stw1,然后进行小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬杀菌试验,并利用鼠伤寒沙门菌感染小鼠模型证明抗SOD血清的被动免疫保护作用.结果 抗血清的ELISA效价为1∶10240,免疫电泳结果显示纯化的Fe-SOD及伤寒沙门菌无细胞溶解物与抗Fe-SOD血清在相同位置各形成一条沉淀线.双向琼脂扩散试验结果显示该抗血清与牛红细胞SOD不形成沉淀线,抗血清对酶活性抑制试验结果显示抗血清可抑制伤寒沙门菌及鼠伤寒沙门菌无细胞溶解物中部分SOD活性,对牛红细胞SOD的抑制率较低.小鼠腹腔吞噬细胞对伤寒沙门菌的吞噬杀菌试验结果显示,经中浓度的抗血清处理的细菌在60min、120min时和经高浓度抗血清处理的细菌在30min、60min及120min时CFU值明显低于对照组(P＜0.01).经抗血清处理过的5LD50鼠伤寒沙门菌攻击的小鼠3d和7d的存活率分别为90%和60%,均明显高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 抗伤寒沙门菌SOD血清可促进小鼠腹腔吞噬细胞对伤寒沙门菌的杀灭,也能提高鼠伤寒沙门菌攻击小鼠的存活率,说明此抗血清具有免疫保护作用,提示SOD可能是沙门菌共同的保护性抗原,间接说明了伤寒沙门菌的SOD与其毒力有关.
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同亚型抗血清参考品在甲型 H7 N9禽流感病毒血凝素含量检测中的适用性研究
目的：在无甲型H7 N9禽流感病毒特异性抗血清的情况下，研究现有的H7亚型抗血清用于单向免疫扩散试验（ SRID）的适用性，以建立应急情况下检测抗原含量的方法。方法获得英国国家生物制品检定所（NIBSC）已有的4种H7亚型抗血清参考品，对其制备用毒株与H7N9毒株的血凝素序列进行对比，之后通过双向免疫扩散试验比较其效价，根据同源性比对结果及双扩效价确定适用的抗血清，并以SRID方法验证检测H7N9抗原的可行性。结果 NIBSC 07/278号参考品制备使用的毒株（H7N3亚型）与H7N9血凝素氨基酸序列同源性高，为97．14％；与H7N9抗原的双扩效价达到1∶8。以此抗血清进行SRID试验，H7N9抗原浓度10～40μg/ml时，能够形成清晰的沉淀环，回归曲线线性R2＞0．99。结论在无H7N9特异性抗血清的情况下，NIBSC 07/278编号抗血清能够用于H7 N9疫苗的血凝素含量的应急检测。
关键词： 甲型H7 N9禽流感病毒 抗血清 单向免疫扩散 -
人H7N9禽流感疫苗抗血清参考品的快速制备及初步应用
目的 以重组H7N9禽流感病毒血凝素(HA)免疫动物后制备抗血清,以应用于单向免疫扩散试验(SRID)对H7N9禽流感疫苗抗原定量.方法 以真核表达的HA蛋白免疫绵羊,通过酶联免疫试验及双向免疫扩散试验检测抗体效价.通过优化抗血清使用浓度,建立检测H7N9禽流感疫苗抗原含量的方法.结果 经4次免疫后,抗体滴度达到高值,效价分别为1∶1 000000(酶联法)和1∶32(双扩法).以制备的抗血清进行SRID试验,当H7N9病毒抗原浓度为10 μg/ml ～ 40μg/ml时,能够形成清晰的沉淀环,其直径与抗原浓度相关性良好.以该法检测6批次H7N9疫苗原液中抗原含量,结果与SDS-PAGE方法结果一致.结论 通过免疫重组抗原,及时制备了抗血清参考品,可初步应用于H7N9禽流感疫苗的抗原定量.
关键词： 甲型H7N9流感病毒 抗血清 单向免疫扩散
