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DNA免疫诱导小鼠产生抗人心肌肌钙蛋白T抗血清的研究
目的通过基因免疫诱导BALB/c小鼠产生抗人心肌肌钙蛋白T (cTnT)的抗体应答,并比较不同免疫佐剂、预处理方法对免疫应答的影响. 方法构建cTnT的真核表达质粒pCI-cTnT,大量提取、PEG纯化质粒,通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠并加强免疫,每隔2周取血,ELISA法分析抗cTnT的体液应答,免疫印迹检测抗血清的特异性.并比较布吡卡因预处理、CpG ODN核酸佐剂、弗氏不完全佐剂对抗体应答效果的影响. 结果接种pCI-cTnT质粒的小鼠血清中检测出抗cTnT特异性抗体,加强免疫使抗体滴度提高;使用CpG ODN后免疫应答增强,弗氏不完全佐剂可明显增强免疫效果,而吡卡因预处理使应答水平下降;初次免疫后14周仍可测得较高的抗体应答. 结论采用含cTnT基因的质粒DNA免疫,成功地诱导小鼠产生抗cTnT的抗体;传统的弗氏不完全佐剂可作为核酸免疫的佐剂使用.
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猪囊尾蚴保护性抗原cC1的疫苗研究
囊虫病是由猪带绦虫幼虫-囊尾蚴寄生于人和猪体引起的人、畜共患病,在我国囊虫病也有广泛的流行区域.抗原cC1是以囊虫病患者、病猪血清为探针从猪囊尾蚴cDNA文库中筛选出的具有高度特异性的人、猪共同抗原[1].以抗原cC1为目的基因构建了含有全长cC1 cDNA的重组质粒p3-cC1,同时制备并纯化了重组抗原cC1,以p3-cC1为DNA疫苗,cC1蛋白加弗氏佐剂为抗原佐剂疫苗,用这两种不同形式的疫苗免疫接种小鼠观察免疫应答.
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链佐星-弗氏完全佐剂制作大鼠糖尿病眼病并发症模型
目的探讨建立适合于糖尿病眼病并发症及其治疗学研究的病理模型制作方法.方法雄性Wistar大鼠ip链佐星30 mg·kg-1,d 2每只ip弗氏完全佐剂(CFA)0.1 mL,链佐星和CFA均每周1次,连续3周,血糖稳定升高后给予高脂饲料喂养.酶反应荧光法测定晶状体内山梨醇含量,视网膜铺片以OPTMAS软件分析内皮细胞/周细胞(E/C)比值及微血管密度,普通石蜡切片观察视网膜病理变化,电镜观察晶状体病理变化.结果造模成功后血糖保持16 mmol·L-1以上达12周,模型动物85%出现明显白内障,晶状体内山梨醇含量明显升高,视网膜毛细血管密度显著增加,E/C比值升高,视网膜、晶状体病理变化明显.结论此模型与临床糖尿病眼病并发症有一定相似之处,可以作为糖尿病眼病并发症的动物模型.
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曲安奈德乳剂对佐剂型关节炎模型的治疗作用
目的 采用佐剂型大鼠类风湿性关节炎模型评估曲安奈德棕榈酸酯脂质微球注射液对关节炎的疗效.方法 采用弗氏佐剂给大鼠单侧造模后,分别于阳性对照组、受试药组和空白乳剂组大鼠双侧踝关节腔内一次性给予阳性对照药(曲安奈德注射液2.0 mg· kg-1)、受试药(曲安奈德棕榈酸酯注射液2.0、1.0、0.5 mg·kg-1)及空白乳剂.每3d检测1次各组双侧后足的肿胀度,直至给药后第12天采集所有动物血清,用ELISA法检测血清中IL-1β及TNF-α.并取原发侧踝关节组织及膝关节滑膜组织进行病理组织学观察及用免疫组化法测定MMP-3.结果 曲安奈德棕榈酸酯注射液关节腔内注射可抑制佐剂型类风湿性关节炎模型大鼠的足肿胀度；降低血清IL-1β、TNF-α水平；减轻造模形成的各种组织病理学变化；抑制原发部位膝关节滑膜组织MMP-3水平.以上作用强度均与阳性药相当.结论 曲安奈德棕榈酸酯注射液对佐剂型大鼠类风湿性关节炎模型有强大的治疗作用,且药效与阳性药曲安奈德注射液相当.
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Toll样配体的免疫作用及在免疫佐剂中的应用
有效的新型疫苗的研究，不仅依赖于新的疫苗种类和设计策略，还要求疫苗制品中不可缺少的组分--佐剂的发展和创新［1，2］。从初的传统佐剂铝盐佐剂到弗氏佐剂再到目前多种类型的佐剂，佐剂类型正在不断发展。佐剂能通过一系列机制加强抗原提呈能力和疫苗的免疫效果［3］，所以成功的疫苗必须要联合佐剂的使用。
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牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗的制备与检定
目的 制备牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗,并进行检定.方法 从黑龙江某牛场发病牛病变的肺组织中分离溶血性曼氏杆菌,经各项鉴定合格后,制备种子液.确定甲醛灭活牛溶血性曼氏杆菌的佳浓度,将佳浓度甲醛灭活24 h的牛溶血性曼氏杆菌菌液分别与弗氏佐剂和灭菌Al(OH)3佐剂混合乳化,制备弗氏佐剂灭活疫苗和铝佐剂灭活疫苗,对两种佐剂灭活疫苗进行无菌检验、物理性状检查、安全性观察和效力检验.结果 甲醛灭活牛溶血性曼氏杆菌的佳终浓度为0.3％.制备的两种佐剂疫苗在5％绵羊血琼脂平板上培养24 h,均无细菌生长;物理性状良好;疫苗注射昆明小鼠后,弗氏佐剂灭活疫苗组小鼠除在注射部位部分产生结节外,无其他副作用,而铝佐剂灭活疫苗组小鼠注射部位产生了脓肿和结块;弗氏佐剂灭活疫苗对经牛溶血性曼氏杆菌强毒菌液攻击的小鼠的保护效果较明显,保护率为90％;铝佐剂灭活疫苗产生的保护作用较弱,保护率为80％.结论 成功制备了弗氏佐剂和铝佐剂的牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗,其中弗氏佐剂灭活疫苗效果较好,可用于临床溶血性曼氏杆菌引起的呼吸道传染病的预防.
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弗氏佐剂与氢氧化铝佐剂对诱导小鼠获得性免疫应答作用的比较
为研究、比较不同佐剂对诱导小鼠产生获得性免疫应答的不同作用, 以卵清白蛋白(OVA)为抗原,分别混合完全弗氏佐剂(CFA)或Al(OH)3佐剂,对C57BL/6小鼠进行常规免疫,采用流式细胞技术对细胞内细胞因子IFN-γ和IL-4进行检测;ELISA方法对特异性抗OVA抗体滴度及抗体亚型进行了检测.结果显示在免疫后CFA组产生以IFN-γ为主的细胞因子而Al(OH)3组产生以IL-4为主的细胞因子;两组中均产生特异性抗OVA IgG抗体,但CFA组以IgG2a亚型为主,而Al(OH)3组则以IgG1亚型为主,不产生IgG2a亚型抗体.实验表明,经CFA加抗原免疫后机体产生的免疫应答以Th1型细胞免疫为主,抗体类型为IgG2a;而Al(OH)3佐剂则诱导机体产生Th2型细胞免疫应答,抗体类型为IgG1.
关键词： 弗氏佐剂 Al(OH)3佐剂 Th1、Th2细胞因子 抗体型别 -
链佐星-弗氏完全佐剂制作大鼠糖尿病肾病模型
目的 探讨建立适合于糖尿病肾病并发症及其治疗学研究的病理模型制作方法.方法 雄性Wistar大鼠ip链佐星30mg/kg,d2每只ip弗氏完全佐剂(CFA)0.1mL,链佐星和CFA均每周1次,连续3周,血糖稳定升高后给予高脂饲量喂养达14周.14周后收集尿液、采集血清、制备肾匀浆,测定尿液、血清中与糖尿病肾病相关的指标;HE、PA5染色观察肾脏病理变化;免疫组织化学染色观察TGFβ-1在肾脏中的表达.结果 造模成功后血糖保持16mmol/L达14周;模型动物尿量明显增加,尿液24h微白蛋白、总蛋白排出量增加,肌酐排出量减少;血清中肌酐、尿素氮、AGEs含量显著升高,肌酐清除率降低;模型动物体质量明显降低,肾脏质量、肾指数、山梨醇含量、肾组织匀浆中NO含量明显增加;病理组织学研究表明模型动物肾小球呈分叶状,系膜区增宽,基质明显增多,分布不均,毛细血管基底膜增厚,TGFβ-1在肾小球表达增多.结论 此模型具有糖尿病肾病的特点,可作为糖尿病肾病研究的动物模型.
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三种免疫调节剂增强弓形虫重组ROP2疫苗保护效应的研究
目的 观察弗氏佐剂(Freund's Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应.方法 将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-rROP2疫苗组、PT-rROP2疫苗组和CIM-rROP2疫苗组等5组;FA、PT和CIM分别与rROP2抗原混合皮下注射免疫,检测小鼠细胞免疫和体液免疫指标,并观察弓形虫RH株攻击感染后的生存时间.结果 FA-rROP2组、CIM-rROP2组小鼠血清IFN-γ、特异性IgG、脾细胞增殖活性及外周血CD4+/CD8+比值均显著高于rROP2蛋白组(P<0.05);PT对外周血CD4+/CD8+比值无明显影响,但显著增加了IFN-γ的水平及脾细胞增殖活性.小鼠攻击试验表明,FA-rROP2组、PT-rROP2组以及CIM-rROP2组小鼠存活时间显著长于rROP2组和PBS对照组组;rROP2蛋白组各项指标均显著高于PBS组(P<0.05).结论 FA、PT和CIM可增强rROP2蛋白抗原诱导的细胞免疫和体液免疫反应,都能延长攻击感染小鼠的生存时间,具有增强rROP2蛋白疫苗保护效应的功能.其中CIM的佐剂样免疫促进作用接近于FA,但副作用显著低于后者,具有临床实用的潜在价值.
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弗氏佐剂与抗原乳化方法的改良及其应用
目的 改良弗氏佐剂与抗原的乳化方法并验证其效果.方法 以微型电钻做为动力源,自制搅拌头,组装成佐剂搅拌器.利用此搅拌器乳化乙脑E蛋白和CFA/IFA的混合物,滴水实验、离心实验及琼脂糖双向扩散实验检测乳化效果.结果 利用自制佐剂搅拌器制备出乙脑E蛋白和CFA/IFA的乳化剂,进行滴水实验,乳化剂滴于冰水上5～10 min.内完全保持完整不分散,成滴状浮于水面；进行离心试验,将乳化剂置于离心机中以3 000 r/min离心10 min,未见分层现象；利用此乳化剂制备的免疫血清进行琼脂糖凝胶双向扩散实验,血清1:16稀释后仍能观察到沉淀线出现.结论 自制佐剂搅拌器制作简便,价格低廉,制备乳化剂时,混匀所需时间短,操作简单,安全高效,乳化效果好,为研究工作提供了便利,是一种值得推广的方法.
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新型免疫佐剂在淋巴细胞杂交瘤技术中的应用
目的观察新型免疫佐剂ImmunEasyTM(CpG ODN)的免疫调节作用,并与弗氏佐剂相比较,探讨其在单克隆抗体制备中的应用前景.方法将小鼠用新型免疫佐剂ImmunEasyTM或弗氏佐剂混合原核表达的重组APRIL抗原,分别以常规免疫和少量抗原免疫方案免疫Balb/c小鼠,用间接ELISA法检测不同时相小鼠免疫血清抗APRIL抗体的总效价及各类和亚类的效价.建立一种能在单个细胞水平反映小鼠B细胞分泌特异性抗体亚类的改良ELISPOT方法,并对两种佐剂免疫组中配对的小鼠进行检测.常规方法制备杂交瘤,以间接ELISA法筛选阳性杂交瘤,比较不同佐剂免疫小鼠所获得的杂交瘤上清液的类及其亚类频率.结果与弗氏佐剂相比,ImmunEasyTM在单克隆抗体制备过程中可明显减少抗原用量,缩短免疫周期,提高免疫血清效价,并增加IgG2a、IgM及IgA抗体的比例.结论在细胞融合制备鼠源性mAb中,应用ImmunEasyTM,可减少免疫原用量,提高效率,还可优先获得某些类及其亚类的mAb.
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单侧外周伤害性刺激诱发大鼠脊髓中转录因子CREB的双侧磷酸化
cAMP反应成分结合蛋白(cAMP response element-binding protein, CREB)是一种转录因子,它在磷酸化之后可调节靶基因的转录.CREB在133位置的丝氨酸的磷酸化,与脊髓中伤害性传入的处理有关,本文作者等用特殊抗体对此进行了免疫细胞化学研究.在正常大鼠,虽然几乎所有脊髓神经元的核中都可见CREB的轻度着色,但磷酸化的CREB仅见于双侧腰段脊髓的Ⅰ～Ⅱ层(75±15 vs 60±18)和Ⅹ层(9±3).用福尔马林注射引起一侧后脚掌出现炎症时,可在双侧腰段脊髓看到磷酸化CREB细胞核的快速(小于5 min)和节段性的显著增多;它们主要分布在双侧背角表层Ⅰ～Ⅱ层(254±20 vs 262±23)、Ⅹ层(115±13)和双侧Ⅴ～Ⅷ层(346±20 vs 328±26);而在对照和炎症组大鼠的胸段脊髓中均未见磷酸化CREB的增加.在注射CFA诱发一侧炎症或切断一侧坐骨神经的实验组大鼠,也可看到至少延续到第三天的强而双侧性的CREB的磷酸化.这种由一侧后肢伤害性传入引致腰段脊髓中镜像式双侧CREB磷酸化的出现,与一般看到的损伤传入只在同侧脊髓背角引起某些神经化学改变的结果不同,可能是人神经损伤后或在实验动物中出现对侧镜像式疼痛过敏现象的基础.
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移植前诱导抗独特型抗体对小鼠皮肤排斥反应的抑制作用
目的 探讨抗独特型抗体诱导对异品系小鼠皮肤移植排斥反应的影响. 方法 以C57BL/6小鼠脾细胞免疫BALB/c小鼠制备抗同种异品系抗体(Ab1). 将Ab1与KLH交联后，免疫BALB/c小鼠诱导产生抗独特型多克隆抗体(Ab2)，并以之为受体，观察Ab2对小鼠皮肤移植排斥反应的影响. 结果 Ab1交联KLH加弗氏佐剂免疫可有效地诱导抗独特型抗体(Ab2)产生. 与对照组相比较，Ab2诱导组小鼠移植物存活时间明显延长. 结论 移植前在受体体内诱导产生以移植物抗原为模拟抗原的抗独特型抗体，可对移植排斥反应产生有效的抑制作用.
