首页 > 文献资料
-
核酸适体的研究进展
目录一、指数富集配体系统进化(SELEX)技术的基本原理及技术路线二、核酸适体的特点及优势三、核酸适体的应用(一)基础研究方面(二)诊断学方面(三)药物研制方面四、结语与展望近年的研究表明,DNA和RNA不仅起遗传信息储存和传递的作用,还可以藉自身形成的空间结构与其它类型的分子相互作用,以此为基础建立随机寡核苷酸文库,施加选择压力(结合靶目标),淘选与靶目标高度特异结合片段的过程,被称为指数富集的配体系统进化(Systematic evolution of ligand by exponential enrichment,SELEX)技术.筛选出的分子被称为核酸适体(aptamer).Aptamer源于拉定语aptus,即配对、适应之意.自1990年Tuerk等首次利用SELEX技术成功筛选到噬菌体T4DNA聚合酶的RNA型适体[1]以来,截止到2004年6月8日,据Aptamer Database网站[2]报道,各个实验室通过该技术已成功筛选出了2882种核酸适体,许多申请专利保护的适体序列还未计其中.核酸适体的靶分子广、亲和力高、特异性强、易改造修饰等特点令其在基础研究、临床诊断、药物研制方面得以广泛应用.
-
靶标诱导变构解离SELEX技术筛选皮质醇特异核酸适体
目的 通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术获得皮质醇特异性核酸适体,建立高品质、超敏、易用和稳定的皮质醇检测试剂盒.方法 人工合成两端固定序列,中间为35 bp随机序列,生成80 bp长度ssDNA文库,捕获序列固定在磁珠上,文库与其退火组装,皮质醇的特异核酸适体通过我们建立的靶标诱导变构解离SELEX(TISSD-SELEX)技术获得.后一轮的PCR产物经克隆测序,MegAlign 和RNAstructure软件分析其一级和二级结构.实时(real-time)apta-PCR方法分析G12的亲和活性.结果 经过12轮筛选后,获得10个皮质醇的核酸适体.序列分析显示,特异核酸适体以高G含量核酸序列为主,软件预测其中8个序列主要以G四联体二级结构为主,候选核酸适体 G12显示了可以作为生物探针用于皮质醇检测.结论 成功建立TISSD-SELEX技术,获得小分子靶标皮质醇核酸适体.小分子靶标无需将其偶联在固相介质或大分子上,对靶分子结构、性质无特殊要求,因而有望成为小分子靶标核酸适体筛选的通用技术方法.
-
核酸适体和胶体金检测皮质醇含量的方法与应用
目的 通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术获得皮质醇特异性核酸适体,应用核酸适体和胶体金建立一种灵敏的定量检测皮质醇含量的方法.方法 采用柠檬酸钠还原法和硼氢化钠还原法制备胶体金,用核酸适体、胶体金聚集显色法检测皮质醇含量.结果 相比20 nm胶体金,采用5 nm和13 nm胶体金颗粒具有较好的灵敏度、重复性和线性范围,5 nm胶体金颗粒用于皮质醇的检测的线性范围为10.1~320μmol/L,标准曲线相关系数r为0.9993,其重复性较好,标准差小于平均值10%.结论 本实验建立了一种高灵敏性的能特异性地检测皮质醇标准品含量的方法.
-
治疗性核酸适体的研究进展
核酸适体是采用指数富集配体的系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)从随机单链核苷酸库中筛选出的能与不同靶分子高特异性、高亲和力结合的单链DNA或RNA.核酸适体结合靶标的方式与抗原-抗体间的作用机制相似,且其特性很多方面可与抗体相媲美.核酸适体作为一种新型的生物药物越来越受到重视.本文主要介绍核酸适体在肿瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病等疾病治疗中的研究进展.
-
诊断慢性粒细胞白血病的电化学生物传感器的研究
目的 建立一种检测慢性粒细胞白血病的方法.方法 此实验在已经筛选出慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞5个特异性、结合率较高的核酸适体的基础上,构建了一种检测方法:采用两种纳米金属材料分别标记5个适体,将标记后的10个适体,两两组合与CML K562同时结合,一个作为捕获分子,一个作为测定分子与CML K562结合后,经氧化还原反应将测定分子上的金属转化成离子状态,利用电化学工作站检测对应的电流.结果 筛选出了佳组合(P2-S3-P1-S5)实现对CML K562的检测,得到了检测细胞数目与DPV电流值的拟合曲线方程.结论 得到一种检测下限可达到50个细胞的诊断慢性粒细胞白血病的电化学生物传感器.
-
核酸适体(aptamer):一种具有潜力的肿瘤药物"靶向配基"
核酸适体(aptamer)可描述为化学抗体,是用配体指数富集法系统进化(SELEX)技术筛选获得的单链DNA或RNA,借其自身形成的空间结构与靶标分子特异性识别,具有靶分子广、亲和力高、特异性强、易改造修饰等特点.本文简述核酸适体作为肿瘤药物"靶向配基"的应用研究.
-
核酸适体技术在生物医学研究中的应用
以单链随机寡核苷酸序列为文库,通过指数富集配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)能够获得与靶标特异性结合的核酸适体,这是一类新型的分子识别探针,其与靶标的亲和力可以同抗原抗体相媲美,甚至优于抗原抗体的结合.核酸适体广泛应用在生化分析、疾病诊断、药物研发等领域.该文将介绍核酸适体的筛选和特点以及核酸适体在生物分子检测、疾病的诊断和治疗中的应用,后介绍核酸适体在神经系统疾病研究中的应用.
-
核酸适体筛选方法的研究进展
核酸适体是能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,理论上自然界存在的任何物质均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术,筛选到其相应的核酸适体.近年来,在传统SELEX技术的基础上,新的SELEX技术不断出现,如毛细管电泳SELEX(capillary electrophoresis SELEX,CE-SELEX)、荧光磁珠SELEX(FluMag SELEX)、自动化SELEX(automated SELEX)、细胞-SELEX(cell-SELEX)、消减SELEX(subtractive SELEX)技术等.这些新技术的出现,在不断完善SELEX技术的同时,也极大地推动了适体技术在各学科领域中的发展及应用.本文对核酸适体的筛选方法进行了总结和展望,为核酸适体的筛选提供了参考.
关键词： 核酸适体 筛选方法 指数富集的配体系统进化技术 -
DNA适体筛选中双链DNA拆分方法研究
目的 研究能够用于DNA适体筛选的双链DNA拆分方法.方法 采用琼脂糖凝胶电泳,观察和比较λ核酸外切酶法、不对称PCR法、磁珠法以及琼脂糖凝胶法的拆分效果.结果 琼脂糖凝胶电泳显示,λ核酸外切酶法不能充分拆分双链DNA形成单链DNA；不对称PCR法产生的非特异性单链DNA较多；磁珠法拆分双链DNA获得单链DNA的量较低,且成本较高；琼脂糖凝胶法拆分双链DNA较为充分,单链DNA纯度较高.结论 琼脂糖凝胶法可用于DNA适体筛选中双链DNA的拆分.
-
核酸适体在肿瘤诊疗中的应用
核酸适体分子量小、穿透力强、结合靶标的范围广泛、与靶标结合力强、无免疫原性、性质稳定、易于合成和修饰,不仅具有分子识别功能,还具有信号转导及调控功能,故可作为分子识别的工具和治疗药物的载体用于多种疾病的诊断和治疗.
-
基于铅诱导核酸适体133DNA链构象转变的铅和氡累积辐射非标记荧光传感检测新方法
目的 应用核酸适体133DNA和N-甲基中卟啉IX (NMM),建立铅离子和放射性惰性气体氡的非标记荧光传感分析新方法.方法 以核酸适体133DNA为识别探针,以N-甲基中卟啉IX(NMM)为荧光信使,采集氡辐射稳定的子体铅;用Pb“离子诱导单链133DNA发生构象转变,形成稳定的G-四链体.G-四链体与NMM键合,导致体系荧光信号敏锐变化,灵敏检测铅和氡.结果 Pb2离子浓度cPb为5.0 nmol/L～90 nmol/L时,荧光强度改变量(△F)与Pb2离子浓度之间呈现良好的线性关系,△F=1.80cPb (nmol/L)-2.07,r =0.990 9;氡累积浓度cRn为2.O×104 Bq·h/m3～12.0×104 Bq ·h/m3时,△F值与氡累积浓度之间的数学定量模型为△F=7.71cRn+3.00,r =0.996 5.新方法对铅的检出限为1.67 nmol/L,对氡的检出限为1.19×103 Bq·h/m3,低于中国国家标准方法中氡的累积测量的检出限(2.1×103Bq ·h/m3).结论 本方法可以灵敏检测铅和氡,K+离子等干扰小.在氡的采样和检测过程中,避免了辐射危害;氡样品可直接测定,操作简单,成本低廉,拓展了核酸适体对放射性物质和气体的核酸适体荧光传感检测新领域.
-
硫磺素T诱导G-四链体核酸适体的氡累积辐射剂量荧光检测新方法
目的 应用核酸适体9-3-35和硫黄素T,建立放射性惰性气体氡的非标记荧光传感分析新方法.方法 用硫磺素T诱导富G序列核酸适配体9-3-35形成稳定的G-四链体结构,产生荧光信号,采集氡辐射得到稳定的子体铅,加入Pb2后导致体系荧光信号敏锐变化,灵敏检测氡.结果 Pb2+离子浓度为1.0 nmol/L～ 125.0 nmol/L时,荧光强度改变量(△F)与Pb2+离子浓度呈现良好的线性关系,△F =9.13cPb+ 163.40,r =0.995 3;氡累积浓度为3.0×104 Bq·h/m3～2.2×105 Bq·h/m3时,△F值与氡累积浓度之间的数学定量模型为△F=35.59cRn+ 229.51,r=0.994 0.新方法对铅的检出限为0.312 nmol/L,对氡的检出限为1.87×103Bq·h/m3,低于国家标准方法中氡的累积测量的检出限(2.1×103 Bq·h/m3).结论 本方法可以灵敏检测氡,在氡的采样和检测过程中避免了辐射危害;可直接测定氡样品,操作简单,成本低廉,拓展了核酸适体对放射性物质和气体的荧光传感检测新领域.
-
肺癌血清学肿瘤标志物的研究
肺癌发病率和死亡率呈逐年上升趋势,传统影像在肺癌的早期发现中具有很大的局限性,因此开发新的血清肿瘤标志物对肺癌的早期诊断与治疗具有非常重要的意义,也对患者预后预测及肺癌类型的鉴别具有重要的指导意义.
-
核酸适体在肿瘤学诊断和治疗中的研究进展及应用前景
0 引言核酸适体(Aptamer)也被称为"化学抗体",是一类分子大小介于25～60个核苷酸的单链DNA或RNA分子,在体外折叠形成特殊而稳定的3-D结构,其配体来源广泛,常见的如核苷酸、蛋白质,此外,对于自然界的其他有机物或无机物、大分子或小分子,我们都可以通过一系列的筛选手段得到其对应的核酸适体.因为适体来源于大量随机序列的核苷酸库,其筛选过程常利用亲和力的大小进行分离纯化,这种方法就是指数富集配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术.
-
以核酸适体KMF2-1a为基础的乳腺癌细胞靶向化疗药物载体研究
目的:探讨开发以核酸适体KMF2-1a为基础的乳腺癌细胞靶向阿霉素载体的可行性.方法:应用流式细胞仪检测人乳腺癌MCF-10AT1细胞对核酸适体KMF2-1a及其修饰物(药物载体)的内吞作用；将阿霉素与药物载体相互作用后,用分光光度计检测阿霉素嵌入药物载体的情况.结果:流式细胞仪检测示,核酸适体KMF2-1a及其修饰物均能被MCF-10AT1细胞特异内吞；分光光度仪检测示,阿霉素可成功嵌入至药物载体中.结论:核酸适体KMF2-1a能被MCF-10AT1细胞特异内吞,经修饰后有可能作为阿霉素的载体用于乳腺癌的靶向治疗.
-
核酸适体在儿童恶性肿瘤诊断与靶向治疗中的研究进展
核酸适体(aptamer)是运用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)从体外人工合成的随机寡核苷酸序列库中经过多轮筛选后得到的单链DNA或RNA,它可以高亲和力与金属离子、小分子、糖类、脂质以及蛋白质等靶标特异性结合,具有制备方便、热稳定性好、低免疫原性等优点.核酸适体在分子成像、生物传感、疾病早期诊断及药物靶向治疗等生物医学领域中有很大的应用潜能.在儿童恶性肿瘤中,核酸适体技术具有实现肿瘤的早期诊断以及靶向治疗的应用前景,可避免传统化疗带来的儿童生长发育障碍以及远期的脏器功能不良等副作用.本文总结了与儿童恶性肿瘤相关的核酸适体筛选与应用的研究进展.
-
脂肪细胞特异性核酸适体对肥胖小鼠脂肪代谢的影响
目的 通过研究体外筛选的脂肪细胞特异性核酸适体adipo 8在肥胖小鼠体内是否可以与脂肪组织特异性结合,初步探讨adipo 8在肥胖小鼠体内对脂肪组织成脂的影响作用.方法 ①高脂喂养雄性C57BL/6小鼠60只复制肥胖小鼠模型;②取小鼠4只,腹腔注射cy 3荧光标记并硫代碱基修饰,结合聚乙二醇的adipo 8,注射后1h取肝脏、肾脏、肌肉及附睾脂肪组织于冷冻切片机制成冰冻切片2块,荧光显微镜下观察各组织荧光信号和HE染色;③取小鼠24只分为未修饰adipo 8组和修饰adipo 8组,每组12只.Cy 3荧光标记的未修饰和修饰adipo 8分别腹腔注射入两组小鼠体内,注射后30 min、1h、2h、4h、8h、24h分别取附睾脂肪组织制成冷冻切片,荧光显微镜下显像;④32只小鼠分为随机序列组和adipo 8组,每组16只.微型渗透压泵埋入小鼠腹腔,分别连续腹腔输注随机序列和修饰adipo 8,于连续腹腔输注第1、2、3、4周,分别取附睾脂肪组织制成冷冻切片,HE染色观察分析脂肪细胞大小改变.结果 ①腹腔注射cy 3荧光标记并修饰的adipo 8,1h荧光显微镜下观察显示:脂肪组织可见非常强的荧光信号,而其余组织仅可见微弱信号;②未修饰adipo 8与脂肪组织结合弱且作用时间短,修饰adipo 8与脂肪组织结合强且时间长.修饰adipo 8组中,脂肪组织的荧光信号呈先增后减,1h强,30 min和24 h信号弱;③光学显微镜相同放大倍数单个视野内,第1周,adipo 8组脂肪细胞大小较随机序列组无明显差异(P＞0.05),第2、3、4周,adipo 8组脂肪细胞小于随机序列组(P＜0.05).结论 ①核酸适体adipo 8在肥胖小鼠体内可与白色脂肪组织高度特异性结合;②Adipo 8经硫代碱基修饰、结合聚乙二醇,增强了其与脂肪组织结合的强度及延长结合时间;③)Adipo 8在肥胖小鼠体内可以抑制脂肪组织成脂,并且该作用随着时间的延长而加强,即adipo 8在体内抑制成脂的作用呈时间依赖性.
-
基于核酸适体的比色技术检测肿瘤标志物血管内皮生长因子
目的 基于核酸适体和磁珠,提出一种检测肿瘤标志物血管内皮生长因子(VEGF)的比色方法.方法 核酸适体与标记脲酶的单链结合,通过生物素-亲和素的特殊识别作用固定在链霉亲和素修饰的磁珠上;待检测的肿瘤VEGF标志物与适体结合形成茎环结构,使标记脲酶的单链脱落下来;经磁分离,转移上清液,加入到含一定量尿素和酚红试剂的溶液中.利用上清液中的脲酶水解尿素产生氨,使得溶液的pH值升高,导致溶液的颜色变化,通过肉眼或紫外分光光度计分析显色结果.结果 该检测体系在佳条件下,检测VEGF的线性范围为0.1～10 pmol/L,检测限达0.06 pmol/L.并利用此体系,检测人肺癌患者血清中的VEGF浓度,其结果与ELISA方法检测出的结果基本一致.将本方法与ELISA方法同步盲法测定10例血清样本,结果显示本方法的准确率为90％,表明其具有较高的有效性和敏感性.结论 该检测方法操作简单方便,同时具有较高的灵敏度和选择性,在临床VEGF检测中具有潜在的应用前景.
-
核酸适体在细胞信号转导系统中的研究进展
多细胞生物对众多内外环境刺激的应答，调节代谢、适应环境，有赖于细胞间复杂的信号传递系统。通过传递信息分子，发生分子转化并启动级联反应，活化细胞内部的信息。从而生理性地调控机体内每个细胞的新陈代谢和应答行为，调节细胞代谢和控制细胞生长、繁殖和分化，保证了整体生命活动的正常进行。细胞信号转导系统中的信息物质包括细胞间信息物质和细胞内信息物质。核酸适体（ nucleic acid aptamer）是能够与靶分子高亲和力，高特异性结合的单链寡核苷酸或是肽链。核酸适体作为一种人工合成的核酸，在与靶分子结合时，需要大量的单链寡核苷酸折叠成众多高级结构，通过高级结构间的相互结合，与靶分子诱导契合。近，应用体外筛选等方法，筛选出能够与受体、配体、细胞质或细胞核内信号分子作用的适体。这些适体在细胞内表达，调节细胞代谢，用于研究和调控细胞内的信号转导途径［1］。
-
核酸适体技术研究进展
核酸适体(aptamer)指的是经体外筛选技术SELEX(指数富集配体系统进化)筛选出的能特异结合蛋白质或其他小分子物质的寡聚核苷酸片段,对可结合的配体有严格的识别能力和高度的亲和力.核酸适体在生物传感器、新药开发以及纳米技术等方面有着广泛的用途,本文对核酸适体近两年的研究进展进行综述.
关键词： 核酸适体 指数富集配体系统进化 生物传感器 新药开发 纳米技术
