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  • HCT116细胞体外筛选抗肿瘤药物

    作者:

    关键词: 细胞 体外筛选
  • 华蟾素注射液中酯蟾毒配基的分离及体内外抗肿瘤活性筛选

    作者:高波;魏晓露;韩玲玉;边宝林

    目的:通过观察华蟾素注射液中酯蟾毒配基体内外抗肿瘤的作用效果和对部分酯蟾毒配基类单体体外抗胰腺癌细胞的药效筛选,以明确酯蟾毒配基抗胰腺癌的物质基础.方法:运用现代色谱技术分离华蟾素注射液,得到酯蟾毒配基类成分,采用HPLC-DAD-FT-ICR-MS分析并鉴定酯蟾毒配基类化合物的主要单体.通过体外细胞筛选酯蟾毒配基抗肿瘤的活性,在体内建立胰腺癌荷瘤裸鼠模型以评价酯蟾毒配基药效,在体外将分离所得酯蟾毒配基的主要活性单体进行抗胰腺癌活性筛选.结果:华蟾素注射液中的酯蟾毒配基在体外对肝癌BEL7402细胞,胃癌BGC823细胞和胰腺癌SW1990,MIA PaCa-2细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.47 ±0.03),(0.06±0.01),(0.06±0.02),(0.11±0.03) g·L-1,酯蟾毒配基的半数致死量(LD50)为20 mg·kg-1,体内对SW1990荷瘤裸鼠的治疗效果接近化疗药物吉西他滨,从酯蟾毒配基中分离并鉴定的12个活性物质体外抗胰腺癌的活性筛选出日蟾毒它灵、沙蟾毒精和嚏根草苷元对SW1990和BxPC-3细胞具有明显抑制作用.结论:华蟾素注射液中酯蟾毒配基在体外对胰腺癌细胞的抑制率与胃癌几乎相同,在体内对胰腺癌荷瘤裸鼠有明显治疗效果,同时酯蟾毒配基中的单体成分日蟾毒它灵、沙蟾毒精和嚏根草苷元在体外对胰腺癌细胞有明显的抑制作用.

  • 血管紧张素转化酶中药抑制剂的筛选模型研究

    作者:巩颖;王灵芝;史新元;乔延江

    目的:研究比较不同的血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)筛选模型,提供从中草药中快速筛选ACEI药物的方法.方法:以卡托普利为阳性药,分别以大鼠血清、血管紧张素转化酶(ACE)纯酶、兔肺ACE粗提物作为酶源,采用不同的检测方法,建立3种ACEI筛选模型,考察多种中药有效成分ACEI活性.结果:大鼠血清粗提酶液模型检测卡托普利IC50值为2.30 nmol·L-1:ACE纯酶模型检测卡托普利IC50值为1.04 nmol·L-1;兔肺ACE粗提物模型检测卡托普利IC50值为1.40nmol.L-1,3种ACE筛选模型线性关系均良好,模型建立成功.结论:3种模型均町用于中草药的体外活性筛选,但各有利弊,可根据中草药组分和筛选模型的特点选择快速有效的模型.

  • Aptamer核酸药物的研究进展

    作者:汪治清;佟玉品;杨新科

    Aptamer指的是能结合蛋白或其他小分子物质的单链或双链寡核苷酸[1].体外筛选技术的发展和PCR技术的应用,使得Aptamer的研究近年来有了长足的进步,筛选到了一大批能与各种蛋白或小分子特异紧密结合的核酸分子(Aptamer).这些Aptamer包含了RNA、双链DNA、单链DNA等多种形式的寡核苷酸,其配体的性质各异.体外筛选Aptamer不仅增强了人们对核酸-蛋白相互作用的认识,也为寻找新药提供了一条途径.Aptamer核酸药物的研究近年来也取得了一些可喜成果.我们拟就该方面的进展及相关问题作一综述.

  • SELEX技术检测小分子化学物研究进展

    作者:侯祺;姚朗

    Tuerk等[1-2]于1990年发明一种体外筛选新技术,即指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligandsby exponential enrichment,SELEX),分别筛选出针对噬菌体T4 DNA聚合酶和有机染料分子的特异性适体.适体(aptamer)指用SELEX技术从体外合成的随机寡核苷酸序列库中人工筛选出的与靶标有高亲和力和特异性结合的寡核苷酸序列.

  • 体外筛选抑制K562细胞生长的放线菌代谢物

    作者:胡艳红;张庆林;曹菊荣;龚萍;肖凤君;毕建进;王晓娜;王正平;吴祖泽

    目的:建立一种适合较大量微生物代谢物抑制K562细胞生长的体外筛选方法,筛选对K562细胞具有抑制作用,而对正常细胞Vero无明显抑制作用的土壤放线菌提取物.方法:放线菌培养液加入乙醇后,置于96孔板中,经过减压除去溶剂后,用MTT法检测各样品对K562及Vero细胞的抑制作用.结果与结论:从446种土壤放线菌提取物中筛选获得5种提取物对K562细胞具有明显的抑制作用,而对Vero细胞生长抑制作用较弱.

  • 全新长春氟宁衍生物体内外药效筛选

    作者:刘悦;雷新胜;宫爱申;肖亮;孙易;全海天;徐永平;唐卫东;楼丽广;邓炳初

    目的:对29个全新长春氟宁衍生物进行体内、外药效筛选,以期发现具有开发前景的抗肿瘤化合物.方法:体外筛选采用SRB法,移植入非小细胞肺癌A549裸小鼠模型作为体内药效模型.结果:通过体外IC50结果,结合化学结构,挑选出2个较有优势化合物:SHRll5706和SHR115766,IC50分别为0.05和0.29μmol·L-1.SHR115706能够剂量依赖性的抑制裸鼠移植肿瘤的生长,抗癌疗效与长春氟宁相当;SHR115766亦可抑制肿瘤的生长,但剂量依赖性不明显.SHR115706(80 mg·kg-1),SHR115766(80 mg·kg-1)和长春氟宁(35 mg·kg-1,作为阳性对照)组肿瘤增殖速率分别为47.5%,57.6%和46.5%.SHR115706和SHR115766对裸鼠表现的毒性均明显低于长春氟宁.结论:SHR115706有望成为抗肿瘤新药.

  • 核糖体展示技术原理与应用

    作者:孟夏萌;高志贤;段宏泉

    核糖体展示技术是一种完全的细胞外展示技术,其显著特点是不受细胞转染和表达等因素影响,已经成功用于筛选与靶分子特异结合的高亲和力蛋白,可以筛选出所需要的酶、多肽、抗体等.针对该技术在医药学领域中已成为一种迅速有效的工具,就核糖体展示技术的原理、发展、应用、优缺点作一综述.

  • 石棉诱发人外周血淋巴细胞姐妹染色单体交换分析

    作者:孙宏春

    目前普遍认为,姐妹染色单体交换(SCE)是染色体损害和修复的指标.业已证实SCE是揭示化学诱变剂和致癌物质对染色体作用的极为敏感的指标.1974年,Late研究丝裂霉素C对人的淋巴细胞作用时,发现低得不能使染色体畸变增高的浓度,仍可使SCE有明显的增高,从此SCE的方法被建议用于监测诱变剂对哺乳类染色体的作用.由于SCE的计数容易,正确,观察染色体畸变敏感,它要求的诱变剂的浓度远远低于引起染色体畸变的浓度,且发生率高,观察的细胞数较少,故近年来在毒理学中应用很广,已作为一种体外筛选致癌物和诱变剂的方法.

  • 抗肿瘤药物体外筛选方法

    作者:吴慧

    肿瘤的化疗目前还是一项有效的治疗措施.但用于临床的抗肿瘤药物普遍存在选择性差、毒副作用大、易产生耐药性等问题,因此继续寻找选择性高、毒副作用小的抗癌药是抗肿瘤新药研究的重点.每年都有大量的植物提取物以及化合物出现,如何进行药物初筛仍是工作的一个重要环节.本文就常用抗肿瘤药物的体外筛选方法进行简要介绍.

  • 噬菌体展示技术筛选人乳腺髓样癌细胞特异性结合肽

    作者:张帆;贾昕;姚红;逯晓青;郭超;杨晓峰

    目的 利用噬菌体随机七肽库体外筛选与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞特异性结合的小分子多肽. 方法 培养人乳腺髓样癌Bcap-37细胞作为靶细胞,人正常乳腺上皮细胞MCF-10A为吸附细胞,将噬菌体展示随机七肽库与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞进行减性体外筛选,用ELISA法鉴定噬菌体对人乳腺癌Bcap-37细胞的亲和力.提取亲和力较高的单克隆噬菌体DNA,测定DNA序列并翻译出相应的氨基酸序列,进行同源性分析. 结果 利用噬菌体随机七肽库通过4轮减性筛选获得了与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞特异结合的小分子多肽.ELISA法表明,第1,3,5,6,8,12,14,16,17,18和20号单克隆噬菌体与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞有很强的亲和力和特异性.测序结果显示,重复性高的序列为LXRNTNX. 结论 利用噬菌体展示技术体外筛选获得了能与人乳腺癌Bcap-37细胞特异性结合的小分子多肽LXRNTNX,经检索该肽段与已知蛋白尚无同源性,因此它很有可能成为乳腺癌的早期诊断和靶向治疗新的靶点.

  • 楮树皮中生物碱对α-糖苷酶和小肠糖吸收抑制作用研究

    作者:刘新颖;富晓楠;鲍玲;王明奎;喻凯

    目的:从中药材楮树皮中筛选出抑制α-糖苷酶的物质,并考察其对糖分吸收的抑制作用.方法:建立α-糖苷酶抑制剂的体外筛选模型,对多种楮树皮提取物中的α-糖苷酶抑制物质进行筛选;建立大鼠小肠外翻囊体外模型,探讨所筛出的抑制物质对蔗糖吸收的抑制作用.结果:从楮树皮乙酸乙酯提取物中筛选出了两个有抑制作用的生物碱Broussonetinine B( B1)和Broussonetine( B2),它们对蔗糖吸收的半数抑制浓度(IC50)分别为0.530 mg·mL-1、0.445 mg·mL-1.结论:本筛选模型简便可靠,为开发中药楮树皮的新用途奠定了理论基础.

  • 具有降胆固醇功能益生菌的筛选研究

    作者:王巍;邹积宏;袁杰利

    目的 通过体外实验从发酵制品及人体肠道内分离筛选出安全高效的降胆固醇乳酸菌,并研究其生理生化特性,为今后功能性乳制品的开发提供优良菌种.方法 应用MRS-胆固醇培养基液体发酵法进行目的菌株筛选,并测定其耐酸及耐胆盐等能力.结果 筛选出4株具有降胆固醇能力的乳酸菌,其降解率分别为DM84031 63.1%、DM84034 70.3%、DM8503 81.1%、DM86056 63.1%;同时4株乳酸菌均表现出不同程度的耐酸及耐胆盐能力,其中DM86056能力强,其他3株乳酸菌次之;经鉴定,DM84031为保加利亚乳杆菌、DM84034为嗜热链球菌、DM8503为詹氏乳杆菌、DM86056为屎肠球菌.结论 经上述实验综合比较,DM86056降胆固醇能力比较强且耐酸及耐胆盐等能力也较强,因此有待于将其应用于动物体内进行深入研究.

  • 5α-还原酶抑制剂体外筛选模型的建立

    作者:巫传玲;马松涛

    目的:建立5α-还原酶抑制剂体外筛选模型.方法:通过紫外分光光度法,考察待筛物是否引起反应体系340 nm处吸光度发生变化,以此反映待筛物能否抑制5α-还原酶活性.结果:该方法能反映待筛物对5α-还原酶活性的影响.结论:该方法可广泛用于5α-还原酶抑制剂的初筛.

  • 核糖体展示技术的研究与应用现状

    作者:郑磊;李前伟

    核糖体展示技术是20世纪90年代建立并发展起来的一种完全在体外进行的分子筛选与进化技术,避免了体内展示技术的缺陷,不受细胞转染与基因表达等因素影响,已经成功用于筛选与靶分子特异结合的高亲和力多肽、抗体和酶等.本文主要概述了核糖体展示技术的基本原理、具体步骤、技术改进及应用现状.

  • 一种简单的gRNA体外筛选方法

    作者:成大欣;徐丽然;于清清;高守翠;王晓靖;刘懿;刘恩岐;赵四海

    目的 探讨体外筛选效率较高的引导核糖核酸(guide ribonucleic acid,gRNA)的方法.方法 以家兔扭转蛋白2A(torsin family 2 member A,TOR2A)基因的gRNA设计和筛选为例,介绍gRNA简单的体外筛选方法.首先根据TOR2A基因的外显子序列在线设计gRNA,选择3条gRNA序列(也可更多),将其分别插入到T7启动子之后,体外转录gRNA并纯化备用.设计包含gRNA打靶序列的一对引物,以基因组DNA为模板进行PCR扩增并胶回收PCR产物.将gRNA,PCR产物和Cas9内切酶组成的体系进行酶切实验,琼脂糖电泳判定gRNA引导的酶切效率.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示第1条gRNA未能引导Cas9内切酶对含打靶位点的PCR产物进行DNA酶切,第2条gRNA(GCTTGTCCATCTCGTCGAAG)和第3条gRNA(TCTCTTCCTCTTCGACGAGA)引导Cas9进行了比较彻底的酶切,第2、3条gRNA可用于后续研究.结论 此体外筛选方法是一种简单、可行和实用的gRNA的体外筛选策略.

  • 寡核苷酸适配子在核医学中的应用

    作者:穆传杰;韩佩珍

    寡核苷酸适配子(aptamer,ataptable oligomer)是用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,通过体外筛选、扩增和富集获得能和小分子物质、多肽、蛋白质、细胞器、核酸及细胞和组织等靶物质高亲和、高特异结合的修饰寡核苷酸.适配子(aptamer)来源于拉丁语"aptus"一词,意为"使适合".

  • 基于人胚胎干细胞的实时细胞系统评价心脏毒性方法的建立

    作者:赵琪;汪溪洁;王淑颜;马璟

    目的:采用人胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞(hu-man embryonic stem cells derived cardiomyocytes, hESC-CM)联合实时细胞分析系统(real- time cell analysis Cardio,RTCA Cardio),建立一种体外药物心脏毒性早期筛选方法。方法将 hESC-CM 接种到 RTCA Cardio E-Plate 96孔板,分析心肌细胞的搏动频率、幅度和搏动节律不规则性指数确定细胞佳接种密度及检测时间,建立体外药物心脏毒性早期筛选方法。在此基础上,分别采用0.1% DMSO 作为溶剂对照及具有抗心律失常作用的药物奎尼丁(0.2、0.78、3.13、12.5、50和100μmol·L -1)作为阳性对照进行了验证。结果0.1% DMSO 对 hESC-CM 的生长指数(cell index,CI 值)、搏动特征图谱及搏动频率和幅度均无影响。而与溶剂对照组相比,奎尼丁浓度≥3.13μmol·L -1时影响细胞 CI 值和特征性搏动图谱,抑制细胞搏动频率和幅度,且具有浓度依赖性,浓度越高细胞搏动信号恢复所需时间越长,对搏动频率和幅度的抑制作用越明显。结论采用 hESC-CM 联合 RT-CA Cardio 系统建立的体外药物心脏毒性早期筛选方法可以检测出奎尼丁对心肌细胞搏动状况的影响,该方法可作为一种高通量筛选工具用于临床前药物心脏毒性早期筛选。

  • 抗病毒中药体外筛选噬菌体-细菌模型的初步探索

    作者:王海俊;宁苏莉;王家驯;赖永贤

    目的:运用噬菌体技术对建立抗病毒中药体外筛选噬菌体-指示菌模型进行初步尝试.方法:采用双层琼脂平板-纸片法,利用枯草杆菌噬菌体-枯草杆菌和大肠杆菌噬菌体-大肠杆菌两种噬菌体-指示菌模型,对三氮唑核苷和氟脲嘧啶进行抗病毒阳性对照物筛选;对板蓝根和大蒜进行中药抗病毒初步试验.结果:氟脲嘧啶筛选结果呈阳性,三氮唑核苷的筛选结果呈阴性;中药受试物为大蒜汁试验结果呈阳性,板蓝根试验结果呈阴性.结论:以噬菌体-指示菌系统为模型进行抗病毒中药的筛选工作,尚需进行大量试验来建立较为完善的对照模型和筛选模型;但作为一种全新的筛选体系,噬菌体-指示菌系统具有一定的良好应用前景.

  • 原研药与仿制品质量差异对患者的影响

    作者:

    从研发的角度,药物可以简单的分为原创新药、Me Too药和仿制药.原创新药的研发是一个极其复杂的过程,从开发至上市需经过高通量筛选、理化特性研究、体外筛选、体内筛选等临床前研究;Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期临床研究;在此基础上经注册后方能上市.

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