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黄酒中尿素的酶法降解应用研究
在黄酒生产中使用脲酶降解尿素有望成为控制氨基甲酸乙酯(EC)的含量的有效手段.本研究选取日本清酒生产用商品化脲酶NAGAPSIN,在考察了其基于温度和pH的酶学性质及各因素对酶降解尿素影响的基础上探索了该酶在降解成品黄酒中尿素中的应用.结果显示该酶的作用适温度为30oC,适作用pH为4.4;在低温及酸性条件下具有较好的稳定性.在成品黄酒中的效果验证表明,30 U/L的脲酶既可于2 d内降解约80%的尿素,且残余酶活易清除.基于以上结果,进一步提出了两种脲酶在实际生产中的应用方案.本研究为黄酒中尿素和EC的酶法控制提供了实验数据支持及实际应用指导.
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海螵蛸提取物对脲酶活性的抑制作用初探
目的:研究海螵蛸提取物对脲酶活性的抑制作用.方法:采用系统分离法即有机溶剂提取海螵蛸粉末,残渣再以热水浸提得到海螵蛸中的水提多糖,水提后残渣以氢氧化钠碱溶液获得碱提多糖,采用pH增值法首次探索了海螵蛸多糖等提取物对脲酶活性的体外抑制作用.结果:海螵蛸中多糖等有机物质对脲酶活性有一定的抑制作用.其中水提多糖和碱提水溶性多糖对脲酶活性的抑制作用较大,抑制率分别达到了70%以上,有机溶剂提取物中乙醚层和乙酸乙酯层提取物对脲酶活性的抑制作用在60%以上.结论:传统海洋中药海螵蛸中含有多糖等有机物质,以期对脲酶活性抑制作用的探索性研究为海螵蛸的临床应用机制和中成药开发提供一定的理论依据.
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尿素测定方法的概述
尿素是人体内蛋白质代谢的终产物,由肝脏合成主要通过肾脏排出.血清尿素的测定是临床上用于诊断和观察各种肾脏疾病的一项重要指标.尿素浓度处于各个不同的医学决定水平有着不同的临床意义.并且尿素的检测对慢性肾脏疾病的病程、病情观察及预后判断均有意义,但它并不是肾功能损伤的特异性指标[1].以往测定尿素采用尿素氮报告结果,但无论在生理或病理情况下,能够确切反映肾功能、体液渗透压等有效成分实为尿素而非为尿素氮.固现推荐统一采用尿素报告结果.换算公式为:1 mmol/L尿素氮=1/2mmol/L[2].
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广藿香醇抑制幽门螺杆菌脲酶活性及其机制
探讨广藿香醇对于幽门螺杆菌Helicobacter pylori脲酶活性的抑制及其相关基因的表达变化,为进一步研究广藿香醇对幽门螺杆菌定植感染的影响奠定基础.培养幽门螺杆菌并采用革兰染色、快速尿素酶及PCR的方法鉴定后,在酸性条件(pH 5.3)和中性条件(pH 7.0)培养液中给予不同浓度的广藿香醇干预1 h,应用琼脂稀释法测定细菌的存活率;Berthelot显色法检测细菌的脲酶活性;RT-qPCR法检测细菌中ureA,ureB,ureE,ureH,ureI和nixA相关脲酶基因的表达变化.经过鉴定生长良好幽门螺杆菌在不同浓度的广藿香醇干预后,细菌存活率没有明显变化;其脲酶活性出现了显著的下降;同时脲酶的相关基因ureA,ureB,ureE,ureH,ureI和nixA的表达均出现不同程度的降低.广藿香醇在酸性条件和中性条件下均可以抑制幽门螺杆菌脲酶的活性,可能与降低细菌脲酶相关的基因表达有关.
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非损伤性胃内采样法用于诊断幽门螺杆菌感染
幽门螺杆菌(Hp)的检查,一般用内窥镜取胃粘膜组织作病理镜检、快速脲酶、培养及Hp基因检测等方法,取样有一定的损伤性,频繁的检查患者难以接受,现有13C和14C呼气试验的非损伤性检查方法,但价格昂贵,操作繁琐并有一定的放射性,为此,我们设计了一种无损伤性的简易线制采样具,用采样端的线团采集胃内标本,并用此做快速脲酶和PCR法检测Hp的16S rRNA基因,并与培养等方法的结果作对比,取得了良好效果.现将结果报告如下.
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幽门螺杆菌脲酶的研究现状
幽门螺杆菌与慢性胃炎、胃十二指肠溃疡甚至胃癌等关系密切。脲酶是其主要的定植因子和致病因子,也是主要抗原成分和疫苗候选抗原之一。本文就脲酶的理化性质、基因结构、细胞定位、致病机制以及检测方法和疫苗应用等方面的研究现状作一介绍。
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008 用作脲酶直肠免疫佐剂的大肠杆菌肠毒素的安全性和效力
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004 表达幽门螺杆菌脲酶A和B的活重组伤寒杆菌Ty21a在志愿者中的安全性和免疫原性
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开郁清胃颗粒在改善糖尿病性大鼠小肠残余应变中的作用
Wistar雄性大鼠40只,体重130~160克,随机分为正常对照组(10只,CON)和糖尿病组(30只).糖尿病组禁食12小时,经腹腔注射链菌脲酶素(Streptozotocin, STZ, Sigma corp.)60毫克/公斤复制大鼠糖尿病模型,5天以后测空腹血糖值大于11.1 mmoL/L为造模成功.后造模成功的24只大鼠再随机分为3组,每组8只:糖尿病对照组DM)、开郁清胃颗粒组(T1)和达美康组(T2).
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酪酸菌对小鼠有害气体排放的影响
目的 探讨酪酸菌对小鼠有害气体排放的影响.方法 80只KM小鼠分4组,每组20只,雌雄各半,Ⅰ组为对照组,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组分别连续21 d灌胃酪酸菌500 mg/kg、1 000 mg/kg、1 500 mg/kg,每日测定独立通气笼内氨(NH3)和硫化氢(H2S)浓度,试验21d测定各组小鼠生长性能、小鼠粪便中脲酶活性.结果 与对照组相比,Ⅲ组、Ⅳ组小鼠的平均日增重略有提高,但没有统计学差异;灌胃后7d,Ⅲ组、Ⅳ组笼内NH3含量明显低于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05),各组均未检测到H2S.结论 酪酸菌可能会影响小鼠的生长性能和氨的排放.
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脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联法动力学测定血清或尿液中尿素
目的建立适合于自动化分析血清和尿液尿素的脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联的连续监测法.方法对pH、2-酮基异乙烯酸钠、亮氨酸脱氢酶和脲酶浓度等反应条件进行实验研究,并对建立的方法进行评价.结果用双试剂连续监测法,试剂Ⅰ:100 mmol/L N,N-二乙醇胺基乙酸缓冲液(pH 8.80),含2-酮基异乙烯酸钠3.0 mmol/L、NADH 0.3 mmol/L、亮氨酸脱氢酶2.0 kU/L.试剂Ⅱ:试剂Ⅰ中加入脲酶70 kU/L.本法线性范围血清0.5~150 mmol/L,尿液8.0~650 mmol/L.血清和尿液的平均回收率分别为102.1%和101.5%.血清批内和批间平均CV分别为1.02%和1.70%;尿液批内平均CV为1.98%.本法(Y)和脲酶偶联谷氨酸脱氢酶法(X)对比相关良好(血清Y=0.992X+0.040,r=0.993;尿液Y=0.990X+0.61,r=0.991).胆红素<325 μmol/L、血红蛋白<5 g/L、抗坏血酸<800 μmol/L、三酰甘油(TG)<7.5 mmol/L和NH+4<0.5 mmol/L对测定无明显干扰.结论本法简便、准确、线性范围广,可用于常规自动分析.
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佳节嗑瓜子要悠着点
佳节至,亲朋好友聚在一起时总爱嗑一些葵花子、西瓜子、南瓜子之类的干果炒货食品.不同种类的瓜子不仅具有不同的风味,还具有一定的保健功效.如葵花子含有的维生素E,有抗衰老作用;西瓜子具有利肺、润肠、止血功效;南瓜子含脂肪高达50%,还含有蛋白质,脲酶,维生素A、B、C等营养成分.
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氨气敏电极法测定游泳池水中的尿素含量
目的:建立一种简便、快速、准确的游泳池水中尿素测定的新方法.方法:在游泳池水样中加入脲酶,使尿素分解产生氨,产生的氨用氨气敏电极测定,测定得到的电势值E与尿素浓度对数值成正比,通过作标准曲线获得尿素含量.结果:新建立的氨气敏电极法线性范围0.00~2.90 mg/L,平均回收率为98.6%,RSD为2.8%.将所建立的新方法用于实际游泳池水样的测定,结果与国标法吻合.结论:氨气敏电极法操作简便、结果准确,适合实际样品测定.
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脲酶-Berthlot比色法测定游泳池水中尿素的影响因素分析
游泳池水中尿素检测方法一直沿用二乙酰-肟分光光度计(GB2-06-01 1998草案),此法线性范围较窄(0.1~1.5mg/L),操作步骤较烦等缺点.中国卫生检验杂志1999年第9卷第6期曾报道用脲酶-Berthlot比色法测定游泳池水中尿素含量,线性范围0.2~4.0mg/L,结果准确可靠,且设备简单,试剂普通,操作方便.于是我们按此法测定,出现严重的干扰现象,经分析主要是由硫酸铜引起的沉淀现象(我们这次实验是在假设其它条件均不影响的情况下进行).
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脲酶-水杨酸盐光度法测定游泳池水中尿素及Cu2+干扰的消除
蛋白质在机体内分解代谢终产生尿素,随尿液、汗液排出体外,人在游泳池中游泳时机体排泄物对水体造成污染,水中尿素浓度增加,因此尿素浓度是反映游泳池水受人体污染的一项重要指标.已有一些测定游泳池水中尿素的方法,如:二乙酰一肟-安替比林法,邻苯二甲醛法,OPA法,脲酶-Berthlot法等[1-2],其中脲酶-Berthlot法有选择性好、灵敏度高等优点,但该法实际应用时常因游泳池水中加入的抑藻剂硫酸铜导致脲酶变性而严重干扰测定,迄今尚未见该法中有效消除Cu2+干扰的报道[3].经实验研究,我们采用二乙基二硫代氨基甲酸钠(铜试剂)-氯仿体系萃取去除Cu2+[4],再用脲酶水解尿素产生氨,氨由水杨酸盐光度法测定[5],从而提出了一种测定游泳池水中尿素的新方法,并解决了脲酶-Berthlot法测定游泳池水中尿素时Cu2+干扰的难题.
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脲酶阳性副溶血弧菌食物中毒的病原学分析
1999年6月30日,本市某建筑工地,因食用猪头肉拌黄瓜,致使22人发生食物中毒,经流行病学、卫生学调查及实验室诊断,确定为副溶血弧菌食物中毒,从患者肛拭中分离出脲酶阳性,神奈川溶血阴性副溶血弧菌新菌型,现将结果报告如下:
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纳氏试剂法鉴定生熟豆浆的实验观察
纳氏试剂检测生熟豆浆的原理为:豆浆中脲酶在适当温度和酸碱度下催化尿素,转化成碳酸铵,碳酸铵在碱性条件下形成氢氧化铵,再用纳氏试剂测定氨[1],当脲酶反应阳性时为生豆浆,当脲酶反应阴性时为熟豆浆.
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基于核酸适体的比色技术检测肿瘤标志物血管内皮生长因子
目的 基于核酸适体和磁珠,提出一种检测肿瘤标志物血管内皮生长因子(VEGF)的比色方法.方法 核酸适体与标记脲酶的单链结合,通过生物素-亲和素的特殊识别作用固定在链霉亲和素修饰的磁珠上;待检测的肿瘤VEGF标志物与适体结合形成茎环结构,使标记脲酶的单链脱落下来;经磁分离,转移上清液,加入到含一定量尿素和酚红试剂的溶液中.利用上清液中的脲酶水解尿素产生氨,使得溶液的pH值升高,导致溶液的颜色变化,通过肉眼或紫外分光光度计分析显色结果.结果 该检测体系在佳条件下,检测VEGF的线性范围为0.1~10 pmol/L,检测限达0.06 pmol/L.并利用此体系,检测人肺癌患者血清中的VEGF浓度,其结果与ELISA方法检测出的结果基本一致.将本方法与ELISA方法同步盲法测定10例血清样本,结果显示本方法的准确率为90%,表明其具有较高的有效性和敏感性.结论 该检测方法操作简单方便,同时具有较高的灵敏度和选择性,在临床VEGF检测中具有潜在的应用前景.
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幽门螺杆菌致病机制进展及其中医药干预
综述了幽门螺杆菌(H.pylori)的流行病学特点、生存特性、致病机制及其中医药干预途径.H.pylori的感染率在世界范围内差异较大,经济条件、卫生条件、饮食习惯、年龄等都会对其造成影响.H.pylori借助自身脲酶、鞭毛、粘附素等系列因子定植于宿主,并通过T4SS注入系统、机体自噬系统以及毒力因子破坏,共同诱导机体产生胃炎、胃溃疡、胃癌等疾病.中医药对H.pylori感染过程的干预主要体现在对生存因子、运动力及趋向、粘附能力及H.pylori诱导自噬的干扰.中药在治疗H.pylori感染等慢性病上有着得天独厚的优势,对传统中药及其有效成分抗H.pylori作用的开发利用,是今后新药研制的重要方向之一.
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脲酶-Fe3O4磁性纳米粒子的制备及表征
目的应用微乳法制备脲酶-Fe3O4磁性纳米粒子并初步探讨其相关特性,以期获得一种合适的口服脲酶制剂.方法以碳化二亚胺为耦联剂,制备脲酶-Fe3O4磁性纳米粒子,后用Bradford蛋白测定方法测定脲酶耦联量;运用TEM测定其粒径,用FTIR来检测脲酶与Fe3O4磁性纳米粒子的耦联.结果Fe3O4磁性纳米粒子与脲酶耦联后,其粒径稍有增大;Fe3O4磁性纳米粒子耦联脲酶的量与其粒径大小、碳化二亚胺/Fe3O4纳米粒子(W/W)等因素有关,粒径越小,耦联剂用量越大,耦联脲酶的量越高;Fe3O4磁性纳米粒子平均粒径为180 nm,当温度为4℃,碳化二亚胺与Fe3O4磁性纳米粒子用量比为1:2(W/W)时,脲酶的耦联率约为4.75%(W/W);固定化脲酶的活性约保留原酶活性的30%.结论Fe3O4磁性纳米粒子可用于酶、蛋白质等药物的固定化.