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补肾活血法对子宫内膜异位症子宫内膜的影响
目的 观察补肾活血中药对子宫内膜异位症(EMs)患者着床期内膜同源盒基因(HOXA10)DNA甲基化的影响.方法 肾虚血瘀型EMs不孕患者65例随机分为治疗组和对照组,治疗组35例,对照组30例.另选20例同期因男方因素致不孕就诊的女性为空白组.治疗组口服补肾活血免煎颗粒3个月,对照组、空白组直接进入研究.观察3组分泌中期血清雌二醇(E2)、孕酮(P)含量,检测内膜HOXA10蛋白的含量,甲基化特异聚合酶链反应检测子宫内膜HOXA10 DNA甲基化程度.结果 治疗组分泌中期血清E2、P明显高于对照组(P<0.05).治疗组HOXA10蛋白呈强阳性(3+)表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).治疗组EMs患者内膜发生甲基化占14.4％,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 补肾活血中药可改善EMs不孕患者血清E2、P激素水平,增加内膜HOXA10蛋白的含量,降低内膜HOXA10 DNA甲基化率.
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二补助育汤对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响
目的：探讨补肾活血中药方二补助育汤对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响。方法：制备小鼠胚泡着床障碍模型，研究其子宫内膜SCFmRNA、HOXA-10 mRNA、LIF、ER、PR、整合素（αvβ3）表达的改变。结果：GnRHa＋HMG＋HCG超促排方案能降低子宫内膜容受性，而二补助育汤能够调控小鼠子宫内膜调控链间的相关调控因子的表达，从而改善子宫内膜容受性。结论：二补助育汤改善子宫内膜容受性的作用是肯定的，并且其作用途径是多靶点、多环节的。
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二补助育汤及改良方对小鼠子宫内膜整合素αυβ3、SCF mRNA及HOXA-10mRNA表达的影响
目的:观察二补助育汤及改良方对胚泡着床障碍模型小鼠子宫内膜整合素αυβ3、干细胞因子(SCF)mRNA及同源盒基因10 (HOXA-10) mRNA表达的影响.方法:实验动物分为6组:空白组、模型组、补佳乐组、阿司匹林组、二补助育组、改良方组.建立小鼠胚泡着床障碍模型,于造模的同时给药,其后处死小鼠,检测小鼠子宫内膜各指标的表达量.结果:模型组小鼠子宫内膜整合素αυβ3、SCF mRNA、HOXA-10 mRNA表达均明显低于空白组(P＜0.01);与模型组比较,改良方组、二补助育组小鼠子宫内膜整合素αυβ3、SCF mRNA、HOXA-10mRNA表达均明显增加(P＜0.01,P＜0.05).结论:二补助育汤及改良方均可提高子宫内膜容受性,其可能机制为通过上调整合素αυβ3、SCF mRNA及HOXA-10mRNA的表达,从而改善子宫内膜容受性以利于胚泡对子宫内膜的黏附.
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人同源盒基因HoxB4真核表达载体的构建及鉴定
本研究旨在构建人同源盒基因HoxB4真核表达载体并进行鉴定,为进一步研究HoxB4的作用提供物质基础.采用RT-PCR的方法从健康产妇脐血单个核细胞中扩增出该基因,并将HoxB4的PCR产物用EcoRI和BamHI双酶切后连接到用EcoRI和BamHI双酶切的带有EGFP编码序列和内部核糖体转入位点(IRES)的真核表达载体pIRES2-EGFP中,重组质粒在大肠杆菌DH5α内扩增后,对其进行双酶切及测序鉴定以证实载体构建成功.结果表明,双酶切和质粒测序结果证明HoxB4基因正确的连接到真核表达载体pIRES2-EGFP中,开放阅读框架正确,pIRES2-EGFP/HoxB4真核表达载体构建成功.结论:利用PCR,DNA重组等分子生物学技术,成功构建了pIRES2-EGFP/HoxB4真核表达载体,为探讨HoxB4基因在造血干细胞的增殖和分化的调控功能提供了实验基础.
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同源盒基因HoxA10的重组逆转录病毒载体及稳定包装细胞株的建立和鉴定
本研究构建携带同源盒基因hoxA10的重组逆转录病毒载体,并建立稳定产毒的包装细胞株.通过PCR扩增获得hoxA10基因编码区全长序列,克隆至逆转录病毒载体MSCVneo,并测序鉴定插入的hoxA10基因.将重组载体及空载体经脂质体分别转染包装细胞系PT67,以G418筛选稳定产毒细胞株.收集病毒悬液并测定病毒滴度.结果表明:重组逆转录病毒载体MSCVneo插入的hoxA10基因序列正确.将筛选所得的高效产毒细胞株命名为PT67/MSCVneo、PT67/MSCVneo-hoxA10.测定病毒滴度分别为5×105CPU/ml、4×104CFU/ml.结论:成功构建了同源盒基因hoxA10的重组逆转录病毒载体,建立了稳定、高效、准确产生逆转录病毒的细胞株,为探讨hoxA10基因在造血干细胞的增殖和分化功能提供了实验基础.
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同源盒基因在急性髓系白血病中的表达
同源盒基因(homeobox genes)初发现于果蝇体内,以包含一段被称为同源盒的183 bp的保守序列为特征[1].
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缺氧诱导因子-1α与同源盒基因共转染在移植静脉重塑态的表达
目的 探讨缺氧诱导因子(HIF-1α)和同源盒基因(gax)共转染在移植静脉组织中的表达状态.方法 Wistar大鼠16只随机分为实验组和对照组,每组8只,均行自体静脉移植术,实验组移植静脉行缺氧诱导因子(HIF-1α)和同源盒基因(gax)共转染,对照组则未行基因转染,于术后14 d取出移植的静脉,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹(Western blotting)及透射电镜等技术检测,分析移植静脉中HIF-1α和gax基因的核酸及蛋白表达水平,血管内皮细胞(VEC)及血管平滑肌细胞(VSMC)表型的变化.结果 HIF-1α的mRNA表达水平实验组为(93.1±22.9)bP,对照组为(42.7±15.9)bP,P<0.01;gax基因的mRNA表达水平组(106.9±38.7)bP,对照组(50.7±25.8)bP,P<0.01;HIF-1α的蛋白表达水平实验组(10.86±2.76)kD,对照组(4.52±1.90)kD,P<0.01;gax基因的蛋白表达水平实验组(13.65±3.35)kD,对照组(5.40±2.26)kD,P<0.01;VSMC合成表型实验组(21.3±5.4)%,对照组(41.2±8.6)%,P<0.05.结论 HIF-1α和gax基因联合转染可成功导入移植静脉组织并产生生物学效应.
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孕酮调节的胚胎着床相关分子及其作用
正常子宫内膜仅在一个有限的时期内允许胚胎着床,此时子宫内膜接受性(receptivity)高,称为"着床窗口".雌激素和孕酮在此过程中起重要的调节作用,它们通过调节多种分子的表达,间接地对胚胎着床进行调节.降钙素、粘蛋白-1、角质细胞生长因子、白血病抑制因子、同源盒基因、骨桥蛋白、胎盘蛋白14、晶体蛋白、间隙连接蛋白等,通过促进胚胎发育,或促进子宫内膜形态、结构和生理变化,在母体和胎儿的相互作用中起中介者的作用.它们均不同程度地介导了孕酮对着床的调节.本文简要叙述孕酮调节的着床相关分子及其作用机理.
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HOX基因与小儿白血病的关系研究进展
1 HOX基因概述 HOX基因即同源盒基因(Homeobox gene,HOX),控制着胚胎空间结构的发育,是重要的发育相关基因,在进化过程中高度保守.
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HOX基因与白血病关系研究进展
同源盒基因(homeobox gene,HOX)广泛存在于线虫、果蝇、老鼠和人类等物种,编码的蛋白质为转录因子,通过与其转录协同因子(如PBX和Meis等)的相互作用来调节转录,进而在造血过程中发挥重要作用.近年大量文献报道,HOX基因是造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPCs)增殖分化的主控基因,同时有证据表明造血细胞的恶性克隆即白血病的发生亦与HOX基因有关.
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己烯雌酚对OVCAR3细胞株HOXA10基因表达与甲基化影响及其机制的探讨
目的:研究己烯雌酚(DES)对卵巢上皮性癌细胞株OVCAR3中HOXA10基因表达及启动子区甲基化状态的影响.方法:体外培养卵巢上皮性癌细胞株OVCAR3,分别加入5×10-6、5×10-7和5×10-8 mol/L的DES培养5d(120 h)后收集细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印记技术检测HOXA10基因mRNA和蛋白的表达水平；运用甲基化特异性聚合酶链反应检测HOXA10基因启动子区的甲基化状态.结果:随着DES浓度的升高,OVCAR3细胞中HOXA10基因的表达存在升高的趋势,且各组间的表达差异有统计学意义,HOXA10基因mRNA表达(5×10-8 mol/L DES组与对照组比较,P=0.002；5×10-7 mol/L DES组与5×10-8 mol/L DES组比较,P=0.028；5×10-6 mol/L DES组与5×10-7 mol/L DES组比较,P=0.000 2)、HOXA10基因蛋白表达(5×10-8 mol/L DES组与对照组比较,P=0.032；5×10-7 mol/L DES组与5×10-8 mol/L DES组比较,P=0.049；5×10-6 mol/L DES组与5×10-7mol/LDES组比较,P=0.009)；且DES可诱导HOXA10基因启动子区的甲基化状态发生去甲基化改变.结论:DES可以上调卵巢上皮性癌细胞株OVCAR3细胞中HOXA10基因的表达,这与DES对HOXA10基因启动子区甲基化状态的影响有关.
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苯乙酸对胶质瘤同源盒基因表达的上调作用
目的观察苯乙酸(PA)诱导分化胶质瘤细胞C6过程中,同源盒(Hox)基因表达的变化.方法根据引物的不同,将已知的22种Hox基因分为P1、P2、P3三组.用逆转录PCR(RT-PCR)及图像分析法,分组检测应用PA前后Hox基因组在C6细胞中的表达.对应用PA前后表达显著不同的Hox基因组,检测其特异Hox基因的表达.结果 C6细胞中,P2组基因表达明显弱于P1、P3组.应用PA后,P2组基因及P2组中Hox B2基因表达显著增强(P<0.001).PA在分化诱导胶质瘤过程中,对Hox基因mRNA水平的表达有明显上调作用.结论 PA抑制胶质瘤细胞增殖的作用机理与调节胶质瘤细胞转录过程有关.
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中国人遗传性并指畸形家系HOXD13基因突变鉴定
目的:研究一个中国人并指(趾)畸形(synpolydactyly,SPD)家系,检测家系成员中是否存在同源盒D13 基因(homeobox D13,HOXD13 )突变.方法:采集SPD 患者及其家系成员的外周血,提取基因组DNA,设计针对HOXD13 基因特异性引物,进行PCR 扩增,产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测,并进行测序鉴定.结果:本家系3代共23人, 6人患病,研究发现患者HOXD13 基因第一个外显子中多聚丙氨酸链由15个延长至22个,第二个外显子基因序列正常.结论:首次揭示中国人并指(趾)畸形家系HOXD13 基因存在多聚丙氨酸延展增加7个丙氨酸的突变形式,表明一定数目的丙氨酸延展可能是导致并指(趾)畸形的重要因素.
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HLX基因的表达与急性髓系白血病相关性
目的 研究HLX表达水平与AML的临床变量及AML不同危险度分层的相关性.方法 应用实时荧光定量PCR方法检测32例初治AML患者骨髓单个核细胞中HLX表达量,分析其与患者FAB分型、血象、骨髓原始细胞、分化程度及AML不同危险度分层关系.结果 初治AML患者HLX表达量在AML-M3中明显降低(P＜0.01),AML-M5中明显升高(P＜0.05);HLX表达水明与骨髓原始细胞数呈负相关(P＜0.01),与外周血血小板水平呈正相关(P＜0.05),且AML-M3HLX表达量与外周血白细胞水平呈正相关(P＜0.05),AML-M5 HLX表达量与外周血白细胞水平呈负相关(P ＜0.05);AML-M5组中分化不良组HLX表达水平明显高于分化良好组,(P＜0.05),病例组及非M3组初治AML患者中,低危组与中危组HLX表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HLX表达水平在部分亚型(如AML-M5)中表达升高,且在不同的FAB分型中有差异.该基因与白血病细胞的增殖、分化和成熟相关.本研究暂无证据表明HLX在不同AML危险度分层中有差异,仍需进一步实验研究.
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子宫内膜癌细胞中同源盒B13基因过量表达与肿瘤浸润的关系
目的:探讨正常子宫内膜组织细胞和子宫内膜癌组织细胞中39种同源盒(HOX)基因的表达情况.方法:采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)的方法测定目前已知的39种HOX基因在正常的子宫内膜和子宫内膜癌组织中的表达情况;通过转染技术将反义HOXB13基因片段转染到子宫体癌瘤株AN3CA中:应用Matrigel浸润试验比较转染前后细胞浸润能力的变化.结果:与正常子宫内膜细胞相比,子宫内膜癌细胞中HOXB13基因是过量表达的,转染后的AN3CA细胞的浸润能力下降了90%(P<0.01).结论:HOXB13基因的过量表达可能与子宫内膜癌的浸润转移相关.
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反义同源盒基因的导入对子宫内膜癌AN3CA细胞浸润能力的影响
目的:通过同源盒(HOX)B13、C13基因的反义RNA片段的导入,研究子宫内膜癌细胞浸润能力发生的变化.方法:通过质粒转染技术将反义HOXB13基因片段和反义HOXC13基因片段分别或共同转染到子宫内膜癌AN3CA细胞中;应用Matrigel浸润试验比较转染前后细胞浸润能力发生的变化.结果:转染了HOXB13反义RNA和共同转染HOXB13+HOXC13反义RNA的AN3CA细胞的浸润能力下降了90%(P<0.01),而转染了HOXC13反义RNA的AN3CA细胞的浸润能力没有明显下降.结论:在39种人类HOX基因中虽然只有HOXB13和HOXC13基因在正常的子宫内膜细胞中不表达而在子宫内膜癌的细胞中过量表达,但是只有HOXB13基因与子宫内膜癌的浸润密切相关,HOXC13与子宫内膜癌的浸润能力的增强没有明显相关.
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同源异型盒基因与妇科恶性肿瘤
同源异型盒基因是控制女性生殖道胚胎细胞发育和分化的重要因子,近年发现其异常表达与妇科肿瘤发生发展有关.研究发现在卵巢癌中HOXA7,B7,BARX2,DLX4基因与肿瘤的恶性型有关,HOXA9,10,11基因与肿瘤向不同组织类型分化有关,CDX2基因可作为胃肠道转移性卵巢癌的标记;在子宫内膜癌中HOXA13,D10基因对肿瘤的发展分别起促进和抑制作用,HOXA10基因在内膜癌中的作用尚有争议;对宫颈癌的研究发现,部分HOX基因在肿瘤组织中呈过表达;而对滋养细胞肿瘤的研究中发现,DLX4可能参与肿瘤侵袭.
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同源盒基因在胶质瘤细胞中的表达
目的:观察胶质瘤细胞C6中同源盒基因(Hox基因组)的表达,及苯乙酸(PA)对Hox基因组表达的影响.方法:体外培养C6细胞并用PA诱导分化,提取细胞RNA.用Hox基因三对简并引物P1、P2和P3进行逆转录PCR(RT-PCR)通过计算机图像分析,Hox基因组mRNA的表达水平用Hox基因(组)/β-肌动蛋白(β-actm)灰度比值表示应用PA前后基因表达的差异用t检验分析.结果:在胶质瘤细胞C6中,P1、P2和P3组Hox基因表达分别为0.881 7+0.073 1(n=16),0.682 5±0.098 7(n=9),0.860 8+0.088 1(n=16);应用PA后,分别为:0.876 5±0.066 7(n=8),0.838 6±0.081 1(n14),0.893 7±0.059 8(n=11).应用PA后,P2组Hox基因表达显著增强,与用药前比较,差异显著(P<.001).结论:在胶质瘤C6细胞中,PA对P2组Hox基因mRNA水平的表达有明显的上调作用. PA的作用机理与调节胶质瘤细胞转录过程可能有关.
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Dlx1基因在大鼠外胚间充质细胞中表达的研究
目的探讨Dlx1基因在牙胚发育过程中的调控作用.方法采用外胚间充质细胞组织块培养法;地高辛标记cDNA原位杂交检测方法和斑点杂交方法,观察Dlx1基因在大鼠外胚间充质细胞,人牙乳头细胞,人牙髓细胞中的表达情况.结果 Dlx1基因在外胚间充质细胞和人牙乳头细胞中mRNA呈强阳性表达,而在牙髓细胞中弱表达.结论 Dlx1基因是牙胚发育过程中重要的调节因子,这种调控作用具有一定的时间性与空间性,它可能主要参与调控早期未分化细胞,而对终末分化细胞作用不显著.
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LIM同源盒基因L3/Lhx8对腭突发育及腭裂形成的影响
LIM同源盒(homeobox)基因群是同源盒基因的亚家族之一.该基因群可编码的蛋白,N末端含有两个LIM领域,C末端含有一个LIM同源盒基因领域.它作为一类转录调节因子,通过其结构域特异的分子内或分子间相互作用,在不同种类动物的形态形成过程中,发挥着极为重要的调控作用[1～3].
