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诚爱乐于奉献,治学恪守医德
邱录贵,现任中国医学科学院北京协和医学院教授,主任医师,博士生导师.任中国医学科学院血液病医院淋巴肿瘤中心主任,并兼天津脐带血干细胞细胞库主任.他主持的天津脐带血干细胞库于2002年率先获得卫生部的执业许可,以此为基础的《脐带血造血干细胞库的建立及相关基础研究》项目获得2003年度天津市科技进步一等奖.2008年获得天津市科技创新重大专项资金支持,组织全国12家造血干细胞移植中心进行"脐带血干细胞移植关键技术"的多中心临床研究,为我国脐带血干细胞移植的广泛应用提供规范化技术和方案.
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CCC-HPF-2细胞基因组DNA可作为STR分型标准物质
目的 检测细胞培养传代过程中的基因稳定性,筛选符合中国人遗传特性的DNA标准物质,建立DNA标准细胞库.方法 通过显微镜下观察、免疫组织化学、核型分析检测细胞传代过程中形态、分子表达及核型是否稳定;应用PCR方法检测细胞的外源微生物及种属来源;STR检测验证细胞在传代过程中STR表达谱的平衡性及稳定性.结果 CCC-HPF-2细胞呈成纤维细胞样;波形蛋白表达阳性,CK阴性;无外源微生物污染;细胞来源于人;所有15个STR基因座都得到扩增,呈现较好的扩增平衡性,各代细胞STR表达谱一致,表现了高度稳定性.结论 CCC-HPF-2细胞来源于人,30代内的该细胞DNA可作为STR分型标准物质.
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人羊膜间充质干细胞储备库的构建
目的 构建人羊膜间充质干细胞库,为间充质干细胞的应用提供充足的细胞来源.方法 将胎盘冲洗干净后,分离出羊膜组织,从羊膜组织原代和传代培养羊膜间充质干细胞(hAMSCs).用MTT法检测细胞生长方式,流式细胞仪分析细胞表型及干细胞标记,使用不同的诱导分化培养基检测鉴定hAMSCs多向分化的能力,细胞周期等鉴定其生物学特性,将磁性纳米颗粒标记的人羊膜间充质干细胞移植到小鼠创面进行细胞功能评价.结果 羊膜来源的细胞生长呈典型的成纤维细胞形态.细胞传代过程中未发现细菌、真菌、霉菌、支原体和内毒素等的污染.细胞表达间充质干细胞表面标记CD90和CD105,不表达CD45、CD14、CD34和HLA-DR.在不同的条件培养基培养状态下,细胞可向成骨、成软骨和成脂方向分化.细胞大多数处于G1期,仅少数细胞处于活跃的增殖期G2;建库用人羊膜间充质干细胞可显著促进小鼠创面愈合(P<0.05).结论 所得到的细胞为人羊膜间充质干细胞.羊膜间充质干细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的生物学特性.初步建立了库存细胞的生物学特性检测标准和相应的干细胞质量控制体系.
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我国建起了细胞培养细胞库--基础性科技工作建设项目
细胞是一切有机体的基本生命单位,是一切生命科学研究的基础材料.体外培养细胞要求绝对无菌等苛刻的条件,否则容易引起支原体感染或变异,使科研数据不够准确或难以重复. 长期以来我国在此领域仅有零星尝试,由于缺乏可靠的细胞来源和培养材料,常常难以使体外细胞长期健康成活和传代.一些珍贵的科研成果如单克隆抗体或传染特定基因的细胞株常因传代保存不善而造成损失.为了取得令国际同行信服的科研数据,国内很多实验室都在国外购买标准细胞.没有我国自己的符合国际标准的细胞培养细胞库,已成为我国科技发展的瓶颈.1999年启动国家细胞库建设项目.2000年10月,中国医科院基础医学细胞中心成立.与国内有关单位一起研制生产了大型液氮冻存设备 ,完成了原保存的100余株、系细胞的整理和登记,扩容入库细胞60株、系,同时建立健全了各种规章制度,制定了符合国标标准的操作规程,并开始对外提供细胞等服务.中科院上海生化细胞所1991年就建成中科院细胞库,这次改建了生物防护实验室,对外服务细胞千余种.科技部、卫生部专家希望这两个细胞库加速基地建设和国际化进程,继续为国家重要科研项目提供标准的细胞株,并在今后基因组计划、干细胞的深入研究中,发挥优质技术平台作用 .引自<健康报>
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干细胞库研究应用进展
干细胞是一类具有自我复制更新和多向分化潜能的原始细胞群体,在一定条件下,它可以分化成多种功能的细胞或组织器官.干细胞可用于白血病、心血管疾病、糖尿病、骨及软骨缺损、老年性痴呆、帕金森病、自身免疫性疾病、脊髓损伤和遗传性缺陷以及恶性肿瘤等疾病的治疗.
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国家卫生计生委延长脐带血造血干细胞库规划设置时间
脐带血造血干细胞库(以下简称脐带血库)是以脐带血造血干细胞移植为目的,具有采集、处理、保存和提供脐血干细胞能力的特殊血站。脐带血造血干细胞主要用于治疗白血病、再生障碍性贫血等血液系统疾病。
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T细胞等位基因排斥研究进展
T淋巴细胞通过其表面受体(T cell receptor,TCR)与抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)表面的MHC-肽复合物结合识别外来抗原.TCR由异源二聚体α、β或γ、δ组成.其中参与特异性免疫应答的T细胞是α/βT细胞,占外周T细胞库的90%~95%[1].
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中国大陆急性髓系白血病患者的移植选择
急性髓系白血病( acute myeloid leukemia ,AML)是常见的成人急性白血病,尽管50%~80%的AML患者会获得血液学缓解( complete remission ,CR),但其中多数终会复发。近10年来学者们在该病发病机制、预后分层及微小残留病监测等方面均取得了长足的进步,国内同仁更是在异基因造血干细胞移植( al-logeneic hematopoietic stem cell transplantation ,allo-HSCT)领域取得了瞩目的成绩,这使AML有了更多和更为乐观的治疗选择。同时,中国大陆由于计划生育政策的推行,无关供者的干细胞库还不能满足 AML 患者的需求,这就使临床医师面对中高危AML,尤其是复发患者时需做出慎重的选择。本文将结合国内情况,主要就成人AML的预后分层和治疗选择进行简述。
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基因测序确认二例造血干细胞捐献者新等位基因HLA-DRB1*0114
人类白细胞抗原(HLA)是迄今所知的人类复杂的免疫遗传多态性系统,由于分子生物学技术尤其是DNA测序技术在HLA分型上的应用,新的等位基因不断被发现[1-3].随着中国造血干细胞库捐献者数量的增加,不断地在中国人中发现新等位基因的报道.我们报告2例在对中华骨髓库陕西分库注册的捐献者进行HLA低分辨的过程中发现的一个新等位基因,该等位基因2006年3月被世界卫生组织(WHO)HLA因子命名委员会正式命名为HLA-DRB1*0114.
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脐带血造血干细胞研究与应用展望
自1988年Gluckman报道用人白细胞抗原(HLA)匹配同胞脐带血移植治疗范可尼(Fanconi)贫血获得成功以来,脐带血作为一种重要的造血干细胞来源日益受到重视,并在脐带血干细胞生物学、脐带血干细胞库和脐带血干细胞移植临床应用方面取得了长足的进展.
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多能性干细胞与再生医学
在体内胚胎发育是一个连续的、时空精密调控的过程,伴随着受精卵的分裂、分化,终发育为一个包含多种细胞类型,并由多种细胞类型形成复杂组织结构的完整个体.将原本连续的胚胎发育过程中的特殊阶段维持下来,使其既能维持在自我更新水平,又能回归发育过程分化为其他类型的细胞,这种细胞称之为干细胞.有些类型的干细胞是发育中不存在的,人为的调控信号通路将其在体外维持下来,例如通过持续激活LIF-Stat3 通路和经BMP4 通路从早期囊胚内细胞团建立的胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES 细胞),通过调控成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF),activin通路从植入后胚胎的表胚层建立的表胚层干细胞[1];有些类型的干细胞在发育中存在,并作为"干细胞库"更新、修复组织,例如造血干细胞、毛囊干细胞等.
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白细胞介素32在感染性疾病中的研究进展
1992年,Dahl等[1]在使用大剂量白细胞介素(interleukin,IL)-2刺激外周血细胞后发现了一种新的表达基因,并从人自然杀伤细胞(natural killer,NK)细胞库中克隆出这种互补DNA(complementary DNA,cDNA),此种cDNA被命名为NK4基因,但在接下来的十二年中,NK4相关研究并无明显的进展,其具体功能仍不为人知.直至2005年,美国科罗拉多大学健康科学中心医学部的Kim等[2]采用基因芯片技术研究IL-18可诱导高表达基因时,再次意外获得了该基因,并成功提取出NK4重组蛋白,并将其命名为IL-32.初步研究表明,IL-32与多种疾病的发生、发展相关,已成为目前临床研究热点之一.本文主要就IL-32在感染性疾病中的研究进展作一综述.
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加强疫苗生产用Vero细胞控制的思考
1 背景日本千叶大学的Y.Yasumura 和Y.Kawakita 两位学者于1963年研制出Vero细胞系, 来源于非洲绿猴肾(Cercopithecus aethiops)上皮细胞.1964年,Simizu博士将第93代的Vero细胞提供给英国的Tropical病毒实验室(NIAID, NIH).1979年,第113代Vero细胞提供给美国标准菌种保藏中心(America Type Culture Collection, ATCC),传代至第121代建立细胞库.Vero细胞为连续细胞系, 可在体外连续传代,并对多种病毒敏感,包括SV-40, SV-5,麻疹病毒、虫媒病毒、逆转录病毒、风疹病毒、猴病毒、腺病毒、脊髓灰质炎病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、牛痘病毒等多种病毒.因此,Vero细胞制备后被广泛用于实验室相关生物学检测,如病毒扩增和空斑检测等.
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非血缘关系脐血造血干细胞移植治疗28例恶性血液病患者
山东省脐带血造血干细胞库自1999年12月至今,已冻存脐血8000份,并为临床移植提供脐血110份.现将2001年8月至2002年12月为28例恶性血液病患者提供脐血进行非血缘脐血移植(UCBT)的长期随访结果报告如下.
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脐血造血干/祖细胞修复脊髓损伤的研究进展
脊髓损伤(spinall cord iniury,SCI)是高致残性疾病,目前其治疗研究以干细胞移植为热点.脐血中含有多种干细胞,均用于中枢神经系统损伤修复的研究,如间质干细胞[1-4](mesenchymml stem cells)、脐血造血干/祖细胞(corel bloodhematopoietic stem/progemitor cells,CBHSC/HPCs)、内皮祖细胞[3,5](endothelia progenitDr cells,EPCs)、胚胎样干细胞[6](embryonic-like stem cells)及成分更为复杂的单个核细胞[7,8](mononuclear cells)等,为产业化、规模化和标准化的脐血造血干细胞库的建立,提供了稳定、及时的干细胞来源,并已成功用于治疗恶性血液疾病、先天代谢性疾病及免疫缺陷性疾病等,其在治疗SCI研究中的作用引起人们的关注.
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视网膜色素上皮细胞的培养和保证
视网膜色素上皮(RPE)细胞移植是近年来发展起来的一项新的医学科研技术,本研究首次在分离兔RPE细胞时应用了酶的二步消化法分离了兔RPE上皮与神经上皮,Bruch膜之间的插入连接,这种方法与机械分离法、冷冻法相比较,避免了RPE细胞完整性的破坏,细胞收获量大,体外生长旺盛,细胞存活率高,为在细胞及分子生物学水平上深入探索RPE细胞的生理生化特性及视网膜色素变性,光损伤等各种眼疾病机制的探讨和防治提供了研究基础.同时为建立细胞库奠定了基础,当应用于视网膜移植实验时,可不受时间、条件、供体来源的限制,为将来临床RPE细胞移植开拓了广阔前景.
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外周B淋巴细胞BCR二次重排(编辑/修正)与选择
B淋巴细胞介导的获得性免疫能识别、应答多种多样的抗原;分清自我和非我;形成免疫记忆.这些特性的机制是经典的Burnat克隆(或者细胞)选择学说,即B淋巴细胞在骨髓的发育过程中,经过重链和轻链基因重排(Rearrangement),组成了外周多样性的BCR淋巴细胞库,同时对自身反应性B淋巴细胞,通过凋亡或克隆无能进行选择(细胞水平选择或克隆选择,Cell or clonal selection);抗原将从已存在的多样免疫抗原受体中挑选特异性的克隆细胞;免疫记忆是抗原特异性细胞的大量扩增后部分保持的结果.
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基因诊断在MNS血型系统中的应用
MNS血型系统的抗原取决于寡糖和多肽构成的唾液糖蛋白(sialocophorins),存在于红细胞膜的血型糖蛋白A(glycophorin A,GPA),受控于4号染色体的GPA基因,在临床输血和遗传学研究中具有重要意义.近年来时有因MNS血型系统血型不符造成输血时产生抗体;或由于抗体的产生了造成血型鉴定和配血困难,甚至引起新生儿溶血病的报告[1-4],储备一定数量已知MNS血型的健康献血者是建立和完善红细胞库的基础,也是为临床提供更配型血液制品的基础.应用PCR-SSP技术对109名随机供血者进行了基因分型,并与血清学表型结果相比较,报告如下.
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非洲绿猴肾细胞(Vero)无血清细胞库的建立
目的 建立Veto细胞无血清细胞库.方法 采用序贯适应和直接适应方法,将Vero细胞从有血清培养适应到无血清培养,建立Vero细胞无血清细胞主库和工作库,采用STR图谱并结合染色体计数对Vero细胞进行鉴别,并对Veto细胞无血清细胞库进行致瘤性和病毒外源因子检定.结果 两种方法均能使Vero细胞适应到无血清培养,其中直接适应法可大大缩短适应代次,因此选择其作为建立Vero细胞无血清细胞库的方法.Vero细胞无血清主库和工作库的STR图谱与日本细胞库公布的Vero细胞STR图谱完全一致,Veto细胞库无外源因子污染,无致瘤性.结论 Vero细胞无血清细胞库可用作生物制品生产用候选细胞基质.
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人二倍体细胞(2BS株)细胞库的建立及生物学特性鉴定
目的 建立人二倍体细胞(2BS株)主细胞库和工作细胞库.方法 将人二倍体细胞(2BS株)扩大培养后冻存,建立主细胞库和工作细胞库,采用台盼蓝染色计数细胞,计算细胞活力,并进行染色体、外源病毒因子、微生物污染、致瘤性的检测及鉴别试验.将全面检定合格的工作细胞库细胞分别接种至T75一次性培养瓶、3L玻璃转瓶和10层细胞工厂,观察细胞形态;将水痘病毒分别按0.010 5、0.012 8、0.018 8 MOI接种至T75一次性培养瓶、3L玻璃转瓶和10层细胞工厂上的单层细胞,收获病毒原液,检测病毒滴度.结果 主细胞库细胞活力为94.1%,工作细胞库细胞活力为94.4%;1 000个处于分裂相时期的细胞的核型分析结果均在《中国药典》三部(2010版)人二倍体细胞染色体分析标准的规定范围内;细胞上清液和裂解液中人外源病毒因子检测结果均为阴性,符合《中国药典》三部(2010版)规程要求;细胞均贴壁,成纤维细胞形态,种属鉴别为人细胞B型;细胞库未被细菌、真菌、病毒及支原体污染,也未出现致瘤性.建立的细胞库在3种培养器皿中均可在工艺要求时间内生长为单层,单位面积活细胞浓度在(2.01~2.59)× 105个/cm2之间,收获的病毒滴度在5.0 ~ 5.25 lgPFU/ml之间,符合成都生物制品研究所有限责任公司《水痘减毒活疫苗制造及检定规程》要求.结论 建立了人二倍体细胞(2BS株)主细胞库和工作细胞库,为2BS细胞应用于水痘减毒活疫苗的研发和生产提供细胞资源和理论依据.
关键词: 人二倍体细胞(2BS株) 细胞库 生物学特性