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转染NY-ESO-1特异性TCR增强人PBMC对NY-ESO-1阳性肿瘤细胞的特异性细胞毒性
目的 探讨体外转导NY-ESO-1特异性T细胞受体至人外周血淋巴细胞中,是否可增强转导后细胞体外特异性识别并杀伤肿瘤细胞的能力.方法 将NY-ESO-1特异性TCR质粒(pCDNA3.1-ESO-TCR)体外电转入新分离的正常人PBMC中,RT-PCR法鉴定转导是否成功；采用流式细胞仪分析转导后PBMC表型；用特异性NY-ESO-1b抗原肽(p157-165)刺激转导PBMC后,用ELISPOT法检测PBMC分泌IFN-γ的能力,用实时无标记动态细胞分析仪检测PBMC特异性细胞毒性作用.结果 电转后PBMC能够扩增出特异性TCR片段；电转pCDNA3.1-ESO-TCR质粒的PBMC细胞表面特异性TCR表达率高于电转空载体的PBMC的表达率(P＜0.05)；经多肽刺激后,电转目的质粒的PBMC分泌IFN-γ的斑点数明显多于电转空载体的PBMC(P ＜0.05)；转导后PBMC特异性细胞毒性作用明显强于电转空载体的PBMC.结论 经NY-ESO-1特异性TCR基因修饰的PBMC对NY-ESO-1阳性HepG2细胞的体外特异性杀伤作用有明显提高,为进行下一步肝癌过继性免疫研究提供了基础资料.
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T细胞免疫识别研究进展
免疫识别是疫苗设计的基础.T细胞免疫识别是预防性疫苗、治疗性疫苗(含负调疫苗)发展的基础.通过T细胞受体(T-cell antigen-receptor,TCR)的信号转导的特征是依赖于对表位多肽的限制性识别.
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克隆性基因重排在淋巴瘤诊断中的应用
大多数淋巴组织增生性病变通过组织形态学和免疫表型可得出肯定诊断,大约有5%～10%的病例表现复杂,即使做大量的免疫标志可能也难以鉴别其良恶性,免疫球蛋白和T细胞受体(TCR)基因克隆性重排可作为重要的辅助指标协助诊断,其基本原理是淋巴瘤(或其他淋巴细胞性恶性肿瘤)起源于单个恶性转化的淋巴细胞,相同的克隆具有相同的基因重排方式.
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CDR3谱型分析在肿瘤研究中的应用进展
肿瘤特异性T细胞通过其表面T细胞受体(Tcell receptor,TCR)识别肿瘤,进而杀伤肿瘤细胞,其所介导的细胞免疫在机体抗肿瘤免疫应答中发挥极其重要的作用.寻找肿瘤特异性T细胞克隆是当前肿瘤研究领域的热点,而应用广泛、灵敏地寻找肿瘤特异性T细胞的方法是通过基因扫描(Ge-neScan)对TCR互补决定区3(complementary deter-mining region 3,CDR3)谱型进行分析.
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T细胞等位基因排斥研究进展
T淋巴细胞通过其表面受体(T cell receptor,TCR)与抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)表面的MHC-肽复合物结合识别外来抗原.TCR由异源二聚体α、β或γ、δ组成.其中参与特异性免疫应答的T细胞是α/βT细胞,占外周T细胞库的90%～95%[1].
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淋巴细胞膜分子CD160结构与功能的研究进展
T细胞活化需要两个信号:一是T细胞抗原受体(TCR)与抗原肽-MHC Ⅰ/Ⅱ类分子复合物相互作用的第一信号,决定了T细胞应答的特异性;二是T细胞表面辅助受体与抗原提呈细胞(APC)的共刺激分子相互作用传递的辅助或协同信号,加强或抑制了第一信号的刺激[1.2].
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TCR介导的信号转导
近几年来,在了解TCR信号转导的早期事件方面的研究取得了重大进展.c-Cb1已经被证实是ZAP-70/Syk家族激酶的负调控因子.有关LAT、SLP-76、Itk和Vav的研究显示了这些蛋白在Ras和磷脂酶Cx1-Ca2+信号转导中的作用.糖脂微域在T细胞的活化中也有重要作用.本文就TCR介导的信号转导过程作如下简要介绍.
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TCRVβ7.1重组腺病毒载体的构建
将TCRV β7.1基因克隆入腺病毒穿梭质粒pDC315中,再穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒.然后用PCR,RT-PCR对其进行鉴定.
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B7:CD28/CTLA-4在子痫前期T细胞免疫中的新进展
T细胞活化的双信号模式认为,T细胞活化不仅需要抗原特异性T细胞受体(TCR)与抗原递呈细胞(APC)上的抗原肽一主要组织相容性(抗原)复合物(MHC)相互作用,同时还需要协同刺激信号.
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pMHC多聚体技术研究进展
抗原肽结合的主要组织相容性复合物(pMHC)通过形成多聚体可有效提高结合到位于T细胞表面上的T细胞受体(TCR)的亲合力.自从20年前pMHC四聚体首次被用于抗原特异性T细胞检测以来,pMHC四聚体已成为免疫分析中重要的检测工具之一.近年来pMHC多聚体在四聚体的基础上又取得了较大进展,更高价的pMHC多聚体被研制出来以提高免疫检测的灵敏度;可逆化的pMHC多聚体由于可以从T细胞表面解离而避免了对T细胞的功能损伤,也被发展用于抗原特异的T细胞分离.pMHC多聚体作为一类分子工具在抗原特异的T细胞分析和免疫治疗中具有重要作用,对它的充分了解和有效运用能帮助我们更好地进行科学和临床应用.
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T细胞淋巴瘤DNA疫苗的实验研究
目的:研究T细胞淋巴瘤TCR Vβ DNA疫苗诱发小鼠体液免疫反应.方法:将BALB/C小鼠随机分为pcDNA3.1组、pcDNA3.1/TCR Vβ8组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+CpG+质脂体组和全硫代CpG组,共4组(每组6只),双侧股四头肌注射疫苗免疫,于第0、2、4周各免疫1次,共3次.每次免疫前及免疫开始后至第8周,取鼠血,应用间接免疫荧光法检测小鼠抗体生成情况.结果:pcDNA3.1/TCR Vβ8组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+CpG+脂质体组小鼠血清中均产生了特异性抗体,抗体滴度在第4周开始增高,第6周时达到高峰.同一时间段相比,特异性抗体滴度后者显著高于前者.结论:证明了DNA重组质粒pcDNA3.1/TCR Vβ8可诱导小鼠产生特异性抗T细胞淋巴瘤TCR Vβ8抗体;CpG和脂质体增强了TCR Vβ8 DNA疫苗诱导的体液免疫反应.
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特异性TCRαβ基因转染T细胞促进抗肿瘤免疫的研究
目的：研究肝癌特异性TCR基因TCRVα12畅2-Vβ7畅1转染T细胞后，促进T细胞识别肿瘤抗原，活化抗肿瘤免疫反应的效果。方法：构建重组腺病毒Ad5F35-TRAV-TRBV，以之感染T细胞并优化佳感染条件。钙黄绿素染色法检测T细胞对不同肿瘤靶细胞株的杀伤活性。 Annexin V-PI双染法检测靶细胞凋亡比例。流式细胞术检测T细胞表面FasL表达比例。 ELISA法检测T细胞作用于靶细胞后IFN-γ与IL-2分泌水平。结果：成功将TCRVα12畅2-Vβ7畅1基因片段构建入嵌合型腺病毒载体，获得重组腺病毒 Ad5 F35-TRAV-TRBV。感染复数为100时，重组腺病毒有高转染效率。感染3天后， TCRVα12 Vβ7阳性细胞比例超过25％。特异性TCR基因转染有效促进T细胞杀伤AFP阳性肝癌细胞，特异性裂解率显著提高（ P＜0畅001）。特异性TCR基因转染有效促进T细胞诱导靶细胞凋亡（ P＜0畅001）。同时，T细胞表面FasL表达比例上升（ P＜0畅001）。 TCR基因转染T细胞作用于AFP抗原阳性靶细胞后IFN-γ分泌显著提高（P＜0畅001）。结论：重组腺病毒Ad5F35-TRAV-TRBV成功介导肿瘤特异性TCR基因转染T细胞。 TCR基因转染可有效促进T细胞识别抗原阳性肿瘤细胞，并发挥抗肿瘤免疫效应。
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人类TCRαβ家族V基因的进化研究
目的:了解人类TCRα家族V基因(TCRAV)和TCRβ家族V基因(TCRBV)的进化特征.方法:采用MEGA3.1软件对人类TCRAV和TCRBV基因分别构建进化树,并估算基因复制的发生时间;采用FEL法检测TCRAV和TCRBV编码序列正选择和负选择位点.结果:进化树显示TCRAV和TCRBV的基因分组在进化过程中已经维持了相当长的时间.TCRAV已经不受正选择作用,TCRBV基因序列的CDRs区域检测到两个正选择位点.结论:人类TCRαβ家族V基因的进化特征为研究TCR基因在机体免疫及疾病防治提供了理论分析基础.
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表达降钙素基因相关肽的单纯疱疹病毒I型扩增子载体免疫效果观察
目的 探讨重组pUPO-△γ134.5-CGRP扩增子对免疫系统的作用.方法 用重组扩增子感染BALB/C小鼠,分离血清及淋巴细胞,流式细胞仪法、免疫组化法、LDH法、分别检测外周血CD4、CD8分类、TCR、NK细胞、CTL细胞以及LAK细胞活性杀伤活性.结果 重组扩增子明显增强了机体的免疫力.结论 该重组扩增子具有增强机体免疫力的作用.
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TCR DNA疫苗及其在自身免疫性疾病中应用的研究进展
TCR DNA疫苗是一种治疗性基因疫苗,在自身免疫性疾病、肿瘤和移植排斥反应的治疗中可以选择性抑制或杀伤致病性T细胞克隆,具有很好的应用前景.本文对近年来文献中关于TCR、TCR DNA疫苗的特点及其在自身免疫病治疗中的应用及相关研究进展进行了综述.
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共表达TCRα 12-2和TCRVβ 7.1重组腺病毒载体的构建及其杀伤肝癌细胞作用的研究
目的:构建共表达TCRα12-2和TCRVβ7.1重组腺病毒载体Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1,并研究其杀伤肝癌细胞的作用.方法:提取外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)总RNA,用RT-PCR的方法得到TCRα12-2基因.TCRVβ7.1基因由pCDN3.1-Vβ7.1扩增获得,将这两个基因以IRES相连克隆入腺病毒穿梭质粒pDC315中.穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染HEK293细胞,包装出可同时表达TCRα12-2和TCRVβ7.1的重组腺病毒.然后提取病毒基因组DNA,对外源目的基因进行PCR鉴定;病毒感染宫颈癌细胞(HELA),48小时后提取细胞总RNA,通过RT-PCR鉴定目的基因表达;后病毒感染PBMC,用流式细胞仪检测目的蛋白的表达.对鉴定正确的病毒进行大量扩增并测定滴度.用MTT比色法检测Ad.TCRα 12-2-IRES-Vβ7.1感染的PBMC对肝癌细胞HEPG2和BEL-7402的杀伤作用.结果:从重组病毒基因组中扩增出目的基因TCRα12-2和TCRVβ7.1,RT-PCR和流式细胞仅检测表明目的基因可以有效的表达.Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染PBMC组对肿瘤细胞的杀伤率明显高于PBMC组和Ad-GFP感染组.结论:成功构建了双表达TCRα12-2和TCRVβ7.1基因的重组腺病毒载体Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1,且其感染后的PBMC可有效的杀伤肝癌细胞.
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重组逆转录病毒载体pLXPXSN-TCRα12-2-IRES-Vβ7.1的构建及其杀伤肝癌细胞作用的研究
目的:构建双表达逆转录病毒载体pLXPXSN-TCRα12-2-IRES-Vβ7.1,包装成病毒颗粒后有效地感染PBMC.方法:以实验室保存含TCRVB7.1基因和TCRα12-2基因的质粒为模板,分别扩增得到两个基因,亚克隆入栽体pLXPXSN,得到重组质粒pLXPXSN-TCRα12-2-IRES-Vβ7.1.重组体质粒经酶切鉴定后,将鉴定好的阳性重组质粒用脂质体介导转染PA317细胞,包装成完整的病毒后测定滴度,感染PBMC,用流式细胞仪和提取基因组DNA检测目的蛋白的表达.后病毒感染PBMC,用流式细胞仪检测目的蛋白的表达.然后用流式细胞术细胞凋亡率,MTT比色法检测pLXPXSN-TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染的PBMC对肝癌细胞BEL-7402和HEPG2的杀伤作用.结果:从重组病毒基因组中扩增出目的基因TCRα12-2和TCRVβ7.1,流式细胞仪检测表明目的基因可以在PBMC中有效的表达.pLXPXSN-TCRα12-2-IRES-V137.1感染PBMC组对肿瘤细胞的杀伤率明显高于PBMC组和空载体感染组.结论:TCRα12-2和TCRVB7.1能够整合进宿主PBMC的基因组中,并能得到有效地表达.pLXPXSN-TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染PBMC后可提高其对肝癌细胞的杀伤活性.
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CD4+T细胞免疫识别的一种新理解
获得性免疫具有抗原特异性,但同时T细胞识别却有混杂性和NHC制约等现象,这提示T细胞对抗原肽-MHC分子复合物(pMHC)识别中可能存在不同模式.本文提出了CD4+T细胞有两种特异性识别活化基础单位(具有不同的生理学意义)的模型,一种为纯TCR模式(TCR model),对pMHC(尤其是抗原肽)高特异性识别;另一种为复合受体模式(TCR-CD4 model),对MHC-Ⅱ分子特异性要求很高(NHC制约),但有可以不同亲合度结合抗原肽的混杂性;它们在免疫应答中以不同组合形式出现,可形成细胞水平区分"自我"与"非我"的效应.由此可更合理、简化地理解各种有关免疫现象以及淋巴免疫系统的起源.
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外周T细胞TCR基因的重排(编辑/修正)与选择
T细胞在胸腺发育过程中,TCR通过VDJC基因重排(rearrangement)和选择(细胞水平选择或克隆选择,cell or clonal selection),而组成了外周多样性的T细胞库.现证实外周的T细胞存在着TCR的第二次重排(编辑/修正,editing/revision)与选择(受体水平或分子水平的选择,receptor or molecular selection),即外周的T细胞能重新开放RAG酶等进行VDJC基因的重新编排,修正原来的TCR或产生全新的TCR,再一次选择成为产生耐受或特异应答的新的T细胞,这种机制在外周T细胞库的扩展、自身免疫病、T细胞的外周耐受、肿瘤和感染、免疫缺陷和移植等免疫应答机制中发挥重要作用.
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免疫突触与T细胞活化
免疫识别是机体固有免疫( innate immunity)和适应性免疫(adaptive immunity)过程中的起始阶段,免疫识别主要通过TCR、BCR以及NK细胞受体等免疫受体( immunoreceptor )所介导的.
