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乙醇抑制大鼠原代肝细胞中P70S6K和ERK1/2活性
目的 研究乙醇对原代肝细胞中P70S6K和ERK1/2活性的影响.方法 分离成年雄性SD大鼠的肝细胞,分别以0、50、100和200 mmol/L的乙醇处理4 h,或以200 mmol/L乙醇处理0、1、2和4h,用Western blot法检测P70S6K 和ERK1/2的活性.在细胞中加入100 nmol/L的mTOR特异抑制剂雷帕霉素或10 μmol/L的MEK1/2特异抑制剂U0126,培养24 h后收集细胞,用Western blot法检测P70S6K、ERK1/2及PPARγ的表达；用EMSA检测PPARγ的活性.结果 随着乙醇浓度的增加或处理时间的延长,P70S6K的表达逐渐降低；乙醇也可抑制ERK1/2的活性；U0126同时抑制ERK1/2和P70S6K的活性,而雷帕霉素虽抑制P70S6K的活性,但增强ERK1/2的活性；乙醇不影响PPARγ的表达和活性.结论 在大鼠原代肝细胞,乙醇对P70S6K的活性有抑制作用,且存在量效关系和时效关系.P70S6K的活性受ERK1/2的控制,但P70S6K也可反向调节ERK1/2.
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mTOR信号转导通路与三氧化二砷反应关联的研究
本研究探讨三氧化二砷(ATO)作用与mTOR信号通路的联系.应用Western blot方法检测K562/DNR细胞经ATO处理不同时间后细胞中pmTOR、pAKT及pP70S6K的表达;应用流式细胞术检测K562/DNR细胞经ATO联合LY294002或雷帕霉素处理120小时后细胞的凋亡率.结果表明:K562/DNR细胞经ATO处理60分钟及120分钟时pmTOR表达高于对照组(p＜0.01);经ATO处理30分钟及60分钟时pAKT表达高于对照组(p＜0.01);经ATO处理60分钟时pP70S6K表达高于对照组(p＜0.01).K562/DNR细胞经ATO联合LY294002或雷帕霉素处理后细胞凋亡率高于对照组(P＜0.01).结论:K562/DNR细胞经一定浓度的ATO处理后细胞中mTOR信号通路被激活;mTOR信号通路抑制剂可增强ATO触发K562/DNR细胞凋亡的作用.
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IL-24联合顺铂通过mTOR/P70S6K信号通路抑制宫颈癌淋巴转移的研究
目的 探讨重组质粒pDC316hIL-24基因联合顺铂通过mTOR/P70S6K信号通路抑制人宫颈癌siha细胞淋巴转移.方法 将造模成功的人宫颈癌siha细胞雌性裸鼠模型随机分为6组,每组7只:PBS对照组、pDC316hIL-24组、低剂量顺铂组、高剂量顺铂组、pDC316hIL-24+低剂量顺铂组、pDC316hIL-24+高剂量顺铂组.观察裸鼠一般状况及淋巴结转移情况,实验结束后采用聚合酶链反应(PCR)法测定移植瘤中IL-24 mRNA的表达,CK角蛋白检测获取的淋巴组织有否癌浸润,免疫荧光法检测转移淋巴组织中mTOR和P70S6K蛋白表达,并用Western blot印迹法对其表达做定量分析.结果 IL-24基因成功转染及表达;CK角蛋白检测获取的各组淋巴组织有癌浸润;干预后各组淋巴转移数有差异,其中联合组淋巴结转移数明显低于对照组(P<0.05),而IL-24+低剂量顺铂组、IL-24+高剂量顺铂组淋巴转移数无统计学差异(P>0.05);免疫荧光法成功检测到各组转移淋巴组织中 mTOR/P70S6K 的表达,采用 Western 印迹法进行定量分析,与其他组比较,联合组表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),且mTOR与P70S6K表达呈正相关性(r=0.968, P<0.001).结论 IL-24+低剂量顺铂治疗能达到IL-24+高剂量顺铂的治疗效果;IL-24+低剂量顺铂能明显抑制宫颈癌siha细胞淋巴转移;IL-24联合顺铂在体内通过抑制mTOR/P70S6K信号通路的活性促进细胞凋亡,从而抑制人宫颈癌siha细胞的淋巴转移.
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mTOR/P70S6K信号通路在肝细胞肝癌中的表达及临床意义
目的:研究mTOR/P70S6K信号通路在肝细胞肝癌(HCC)中的表达,探讨其在HCC发生发展中的作用及意义.方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测120例HCC患者癌组织、癌旁肝组织以及10例正常肝组织中mTOR及P70S6K mRNA表达情况;并分析mTOR及P70S6K mRNA的表达与相关临床参数的关系.结果:mTOR及P70S6K mRNA在HCC组织中的表达水平显著高于在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达水平(mTOR mRNA:0.594±0.218 vs 0.437±0.156.0.594±0.218 vs 0.383±0.081,均P＜0.05;P70S6K mRNA:0.610±0.147 vs 0.486±0.162.0.610±0.147 vs 0.440±0.141,均P＜0.05).mTOR mRNA和P70S6KmRNA在HCC组织中的表达呈正相关(r=0.548,P=0.012),且两者在癌旁肝组织及正常肝组织中的表达亦正相关性(r=0.607,0.737,P=0.005,0.015).mTOR及P70S6K mRNA在HCC组织中的表达水平与病理分期、门静脉癌栓等明显相关,而与肿瘤直径、血清AFP水平、性别等无明显关系.结论:mTOR/P70S6K信号通路在HCC中特异性激活.mTOR/P70S6K信号通路可能在肝细胞肝癌的发生、发展中起重要作用.
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沉默p70S6K表达可提高食管鳞癌细胞对雷帕霉素的敏感性
目的 探讨不同分化程度的食管鳞癌细胞对雷帕霉素的敏感性差异以及以p70S6K-siRNA干扰p70S6K表达后食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素敏感性的变化.方法 以细胞计数盒8(CCK-8)法检测雷帕霉素对不同分化程度食管鳞癌细胞(EC9706、TE-1、Eca109、KYSE790、KYSE450)增殖的影响,并根据检测结果,选取对雷帕霉素不敏感的EC9706细胞株转染p70S6K-siRNA.采用CCK-8法、流式细胞术和裸鼠成瘤实验,检测转染前后EC9706细胞对雷帕霉素敏感性的变化.结果 CCK-8法检测结果显示,5株食管鳞癌细胞对低浓度雷帕霉素(≤100 nmol/L)均敏感,而低分化细胞株TE-1和EC9706对高浓度雷帕霉素却易产生耐药性.经50、100、200、500和1 000 nmol/L雷帕霉素+p70S6K-siRNA处理后,EC9706细胞的增殖率分别为(48.67±1.68)％、(15.45±1.54)％、(14.00±0.91)％、(10.97±0.72)％和(2.70±0.32)％,均分别明显低于50、100、200、500和1000 nmol/L雷帕霉素+对照siRNA处理组[(74.53±1.71)％、(68.27± 1.35)％、(71.74±2.44)％、(76.23±1.02)％和(80.21±2.77)％,均P＜0.05].流式细胞仪检测结果显示,p70S6K-siRNA组、雷帕霉素组和p70S6K-siRNA+雷帕霉素组EC9706细胞中G1期细胞的比例分别为(53.82±1.78)％、(57.87±4.01)％和(73.73±3.68)％,均明显高于对照组[(46.09±2.31)％,均P＜0.05].裸鼠体内实验的结果显示,转染p70S6K-siRNA后,雷帕霉素对裸鼠体内移植瘤生长的抑制作用也增强,抑瘤率高达96.5％.结论 不同分化程度的食管鳞癌细胞对雷帕霉素的敏感性不同,p70S6K-siRNA在体内外均能提高食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性.
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LBH589联合多烯紫杉醇对人卵巢癌卵巢癌细胞Akt、mTOR和p70S6K蛋白表达的影响
目的 观察新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589联合多烯紫杉醇(DCT)对人上皮性卵巢癌细胞细胞IGROV-1 Akt、mTOR、p70S6K蛋白表达的影响,探讨LBH589联合DCT诱导IGROV-1细胞凋亡的分子机制.方法 采用不同浓度LBH589、DTX或两者联合处理IGROV-1细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,Western blot方法检测卵巢癌细胞IGROV-1 Akt、mTOR、p70S6K蛋白表达水平.结果 LBH589、DTX均能抑制IGROV-1细胞增殖,诱导凋亡,小剂量LBH589联合DTX作用更强.经Calcusyn软件分析证明两者联合具有明显的协同作用.Western blot结果显示LBH589联合DCT处理的IGROV-1细胞的Akt、mTOR、p70S6K蛋白水平均明显低于对照组.结论 Akt、mTOR、p70S6K通路可能在LBH589联合DCT诱导IGROV-1细胞凋亡中起作用.
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淀粉样β蛋白片段25～35下调大鼠海马PI3K/Akt/p70S6K信号传导通路
目的 探讨阿尔茨海默病(AD)的淀粉样β蛋白(Aβ)的沉积是否损害神经细胞存活的信号传导通路.方法 实验分为生理盐水对照组;Aβ25-35组;Aβ25-35+布洛芬组;Aβ25-35+布洛芬+LY294002组;Aβ25-35+LY294002组.大鼠分别灌胃给予布洛芬7.5或15 mg·kg-1,每日1次,连续3 周后,左侧脑室内注射Aβ25-35(10 μL,1 mmol·L-1),之后继续灌胃给予布洛芬1周.PI3K特异性阻断剂LY294002(5 μL,4 mmol·L-1)在注射Aβ25-35前1 h左侧脑室内注射.注射Aβ25-35后1周,取海马CA1区,Western免疫印迹法观察P53,Bax,FasL,Bcl-2,Akt和p70S6K的蛋白表达水平.应用半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3活性测定试剂盒分析caspase 3活性变化,RT-PCR方法观察p70s6k mRNA表达水平.结果 脑室内注射Aβ25-35可引起大鼠海马CA1区磷酸化Akt/PKB和磷酸化p70S6K表达明显降低,分别从对照组1.32±0.14和0.769±0.028下降到0.69±0.08和0.479±0.032.同时,海马CA1区促凋亡蛋白P53,Bax和 FasL表达及caspase 3活性明显增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低.预先注射LY294002可使caspase 3活性较单独注射Aβ25-35组进一步增加.给Aβ25-35前后连续给予布洛芬4周可明显对抗Aβ25-35引起的上述变化.LY294002可明显减弱布洛芬上调磷酸化Akt/PKB和磷酸化p70S6K表达的作用.结论 Aβ25-35引起抗凋亡通路PI3K/Akt/p70S6K下调可能参与AD的神经元损伤.布洛芬具有较好的对抗作用,这可能与上调PI3K/Akt/p70S6K通路中的一些蛋白有关.
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芪玉三龙汤对肺癌p70S6激酶和真核翻译起始因子4E的影响
目的:研究芪玉三龙汤对肺癌生长的关键合成蛋白p70S6激酶(p70S6K)和真核翻译起始因子4E(eIF4E)表达的影响.方法:基于前期研究基础,采用LLC细胞培养移植法构建移植肺癌模型,荷瘤成功后随机分为模型组(M),化疗组(C),中药组(低、中、高剂量组,分别命名为QL、QM、QH),联合组(CQH),低、中、高剂量组小鼠分别按(20.12、40.24、80.48)g/(kg·d)灌胃给药,化疗组以0.4 mL顺铂腹腔注射给药,联合组以中药高剂量灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组以等量生理盐水给药,1 次/d,连续给药10 d;称取瘤质量,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化;RT-qPCR法检测Ras mRNA表达水平;Westem Blot法检测肿瘤组织eIF4E、p-eIF4E、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达.结果:芪玉三龙汤可抑制肺癌移植瘤生长,电镜下可见凋亡小体,用药各组均可下调Ras转录水平,但中药各组之间无明显差异(P＞0.05),联合组与化疗组之间相比无统计学意义(P＞0.05).同时,该复方均可降低肿瘤组织eIF4E、p-eIF4E、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达.结论:芪玉三龙汤可抑制肺癌生长,诱导其镜下凋亡,与下调肺癌生长的关键合成蛋白p70S6K和eIF4E表达相关.
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PI3K、P70S6K在胰岛素抵抗大鼠脂肪中的表达及其意义
目的 测定不同饮食喂养大鼠产生胰岛素抵抗(IR)的情况,观察大鼠脂肪中PI3K、P70S6K的表达及大鼠血清中游离脂肪酸(FFA)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)的变化.方法 4周龄Wistar雄性大鼠40只,随机分为4组,分别以普通、高糖、高脂、高糖高脂饲料喂养大鼠8 w后,行高胰岛素-正常血糖钳实验,对大鼠IR程度进行评估,应用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中FFA及hs-CRP,分别用原位杂交、Western印迹方法检测大鼠脂肪中的PI3K、P70S6K.结果 高脂、高糖高脂饲料组大鼠产生IR,普通、高糖饲料组未出现IR,IR组大鼠FFA及hs-CRP明显高于非IR大鼠(P＜0.01),PI3K表达在IR组大鼠明显低于非IR组大鼠、P70S6K的表达在IR组大鼠明显高于非IR组大鼠(P＜0.01).结论 高脂、高糖高脂饲料喂养大鼠8 w可成功诱导大鼠产生IR,IR的产生可能与肥胖、高FFA及炎症反应有关,PI3K在IR组表达降低,P70S6K升高.
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P70S6k在口腔鳞癌中的表达及临床意义
目的:研究P70S6k在口腔鳞癌中表达的情况及临床意义.方法:采用免疫组织化学SP法检测P70S6k在62例口腔鳞癌患者其癌组织及癌旁组织中表达的情况,并分析其表达的情况与患者临床病理资料之间的关系.结果:与在本组癌旁组织中表达的阳性率相比,P70S6K在本组癌组织中表达的阳性率较高,差异有统计学意义(P<0.05).P70S6K在癌组织中表达的阳性率与本组患者的性别、年龄和发病部位无明显的相关性(P>0.05).与分化程度中或高、未发生淋巴结转移的癌组织中表达的阳性率相比,P70S6K在分化程度低及发生淋巴结转移的癌组织中表达的阳性率明显升高(P<0.05).P70S6K在本组癌组织中表达的阳性率与癌组织的分化程度及是否发生淋巴结转移有显著的相关性(P<0.05).结论:P70S6k在口腔鳞癌组织中呈高表达,其表达的阳性率与该癌组织的临床病理分级、发生淋巴结转移的情况有密切的关系.
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mTOR、p70S6K在子宫腺肌病中的异常表达及其意义
目的:通过研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p70S6K在子宫腺肌病异位病灶、在位内膜组织中及正常子宫内膜组织中的表达情况,以探索其与子宫腺肌病发生发展的关系.方法:采用免疫组化方法检测p-mTOR和p-P70S6K在异位病灶组、在位内膜组、正常子宫内膜组细胞中的表达.结果:p-mTOR和p-P70S6K在子宫腺肌病异位病灶中及在位内膜中的表达高于正常子宫内膜组(P<0.05),异位病灶与在位内膜中二者的表达无差异(P<0.05).异位病灶组中p-mTOR和p-P70S6K的表达具有相关性(r=0.778,P<0.05).结论:mTOR与P70S6K的高表达促进了子宫腺肌病的发生与发展.
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TGF-α/EGFR自分泌环调控卵巢癌细胞增殖转移的分子机制
背景与目的:TGF-α/EGFR自分泌环在许多恶性肿瘤中异常激活,与肿瘤发生、发展密切相关.本研究观察TGF-α诱导的卵巢腺癌细胞Caov-3生物学行为及相关信号分子的改变,探讨TGF-α/EGFR自分泌环在卵巢癌发生、发展中的作用机制.方法:采用MTT和BOYDEN小室体外侵袭实验检测Caov-3细胞增殖和侵袭能力;采用Western blot方法检测EGFR、ERK1/2、PI3K、AKT、P70S6K蛋白表达情况.结果:TGF-α促进Caov-3细胞增殖和转移,0.5-25ng/ml浓度范围内,细胞增殖率与TGF-α浓度成剂量效应关系;TGF-α在短时间内可使Caov-3细胞EGFR表达量骤增,并伴随PI3K、AKT、P70S6K等信号传导分子表达量的上调;但ERK1/2表达量无明显变化.结论:TGF-α /EGFR 自分泌环可能通过激活PI3K/AKT信号传导通路,上调P70s6k来增强卵巢癌细胞的增殖和转移能力.
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mTOR信号通路蛋白在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义
目的:研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路蛋白在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义.方法:选取山东大学齐鲁医院和聊城市人民医院神经外科2007年7月至2010年5月间手术切除并经病理证实的人脑胶质瘤石蜡标本87例(Ⅰ～Ⅱ级27例、Ⅲ级24例、Ⅳ级36例),应用免疫组织化学法检测胶质瘤组织中mTOR信号通路关键蛋白pAKT、pmTOR和p-p70S6K的表达,分析它们与胶质瘤患者临床病理特征的关系.结果:pAKT、pmTOR和p-p70S6K在各级胶质瘤中的阳性率分别为:Ⅰ～Ⅱ级70.4%(19/27)、Ⅲ级70.8%(17/24)、Ⅳ级75.0%(27/36),Ⅰ～Ⅱ级77.8%(21/27)、Ⅲ级75.0%(18/24)、Ⅳ级72.2%(26/36),Ⅰ～Ⅱ级63.0%(17/27)、Ⅲ级70.8%(17/24)、Ⅳ级80.6%(29/36);各阳性表达率间无明显差异(P>0.05),但它们的表达水平均随着胶质瘤病理级别的增高而升高(P=0.0001,0.0063,0.0001),而与患者的性别、年龄、肿瘤大小和术前KPS评分等参数无关.pAKT、pmTOR和p-p70S6K三者共表达于42例胶质瘤组织中,在其余45例中仅有一种或两种表达.结论:mTOR信号通路蛋白在胶质瘤的发生、发展中起着重要的作用.可能是胶质瘤治疗的潜在靶点.
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自噬信号因子P70S6K参与Cox7a2调控睾酮生成机制研究
目的:研究Cox7a2对TM3 Leydig细胞睾酮生成的影响以及涉及其中的自噬调控信号的作用.方法:构建Cox7a2荧光表达载体,转染TM3 Leydig细胞.ELISA测定睾酮水平,Western印迹检测Cox7a2对睾酮合成快速调节蛋白StAR表达和自噬调控因子P70S6K磷酸化水平的影响.结果:在TM3 Leydig细胞中,LH刺激能增加促进StAR蛋白表达,增加睾酮合成水平.Cox7a2在TM3小鼠睾丸Leydig细胞中抑制P70S6K磷酸化水平,降低StAR蛋白的表达,进而抑制LH诱导的睾酮合成.结论:Cox7a2通过抑制快速调节蛋白StAR的表达减少LH诱导的睾酮分泌,这至少和Cox7a2抑制自噬调控因子P70S6K有关.
关键词： Cox7a2睾酮 类固醇合成快速调节蛋白 P70S6K 自噬 -
p70 S6K信号通路在黏液表皮样癌发生中的作用
目的 研究p70 S6K信号通路激活在黏液表皮样癌发生中的作用.方法 检测p70 S6K在30例口腔黏液表皮样癌、15例正常口腔组织中的表达.结果免疫组织化学结果显示,和正常组织相比,黏液表皮样癌中p70 S6K的表达增加. 结论 口腔黏液表皮样癌p70 S6K的表达增加可能是介导黏液表皮样癌发生的主要机制之一.
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4E-BP1、p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28,N-87细胞生长中作用的实验研究
目的:探讨真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1(4E-BP1)、核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28、N-87细胞生长中的作用.方法:体外培养人胃癌MKN-28、N-87细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术、Westem-blot检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布及p70S6k、4E-BP1蛋白表达及磷酸化情况.结果:细胞计数结果显示RAD001作用于胃癌细胞株MKN-28,N-87 24 h即开始出现对细胞生长的抑制作用,随着作用时间延长至48、72 h,抑制作用逐渐增强.流式细胞术结果显示RAD001作用24 h后MKN-28、N-87细胞株细胞周期发生改变,停滞在G0～G1期细胞比例增加,在实验中显示细胞系N87对于RAD001作用相对敏感.Western-blot结果显示RAD001作用24 h后MKN-28、N-87的4E-BP1和p70S6K表达下降,同时去磷酸化.结论:RAD001是通过抑制mTOR的活性,进而阻断4E-BP1及p70S6K的磷酸化和蛋白质翻译进而调节着细胞周期以发挥抑制胃癌细胞生长的作用.
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苦参碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞发生自噬与自噬相关蛋白mTOR相关性研究
目的：探讨苦参碱是否可通过抑制mTOR活性阻断PI3K/Akt信号通路，诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬发生。方法苦参碱（终浓度为0、1、2mg/mL）±氯喹（chloroquine）（自噬抑制剂）处理乳腺癌Bcap-37细胞24h，运用免疫印迹（Western-blot）法检测PI3K/Akt信号通路自噬相关蛋白mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6、eIF4E表达。苦参碱（终浓度为0、1、2mg/mL）±BafilomycinA1（自噬抑制剂）/Rapamcin（自噬诱导剂）处理乳腺癌Bcap-37细胞24h，Western-blot法检测eIF4E蛋白的表达。结果苦参碱剂量依赖性抑制mTOR、p70S6k磷酸化，同时降低eIF4E蛋白表达；当苦参碱联合氯喹（CQ）作用于乳腺癌Bcap-37细胞时，则对上述蛋白表达均无明显抑制作用。苦参碱联合BafilomycinA1作用于Bcap-37细胞时，eIF4E蛋白表达同样无明显改变；苦参碱联合Rapamcin时，eIF4E蛋白表达则呈剂量依赖性降低。结论苦参碱可通过抑制mTOR活性阻断PI3K/Akt信号通路，从而诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬发生。
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P70S6K在Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌中的表达及临床意义
目的 检测P70S6K在Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌(renal eell carcinoma associated with Xp1 1.2 translocation/TFE3 gene fusion,TFE3 RCC)中的表达,探讨其在TFE3 RCC发生、发展中的作用及临床意义.方法 采用免疫组化法检测23例确诊的TFE3 RCC、14例肾透明细胞癌(clear cell RCC,CCRCC)和6例乳头状肾细胞癌(papillary RCC,PRCC)组织中P70S6K的表达,观察其表达与三种RCC的关系,同时观察P70S6K表达与TFE3 RCC发生、发展和相关临床病理参数的关系.结果 P70S6K在TFE3 RCC组织中的表达(91.3％)明显高于其在CCRCC组织(64.2％)和PRCC组织中的表达(66.6％),差异有显著性(P＜0.05).P70S6K在TFE3 RCC组织中阳性表达水平的H-score评分值(88.2±9.8)亦显著高于其在CCRCC组织(54.4±7.6)和PRCC组织(43.7±6.2)中阳性表达水平的H-score评分值,差异具有显著性(P＜0.05).P70S6K表达与TFE3 RCC患者年龄、有无淋巴结转移和脉管瘤栓有关,与患者性别、肿瘤直径等临床病理参数无关.结论 与CCRCC和PRCC组织相比,TFE3 RCC组织中P70S6K表达显著增高,有助于TFE3 RCC的鉴别诊断.P70S6K在TFE3 RCC组织中高表达,同时提示mTOR信号通道在TFE3 RCC的发生、发展中可能起重要作用.为TFE3 RCC的靶向治疗寻找潜在药物靶点提供一定的理论基础.
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柚皮苷通过下调p70S6K抑制非小细胞肺癌细胞生长的作用机制研究
目的:研究柚皮苷对非小细胞肺癌细胞生长的作用及机制.方法:应用SRB法检测柚皮苷对非小细胞肺癌细胞株生长的抑制作用.用Western blot法检测柚皮苷对p70S6K的调控作用.利用质粒过表达p70S6K,用SRB法检测过表达p70S6K后对柚皮苷抑制细胞生长作用的影响.利用小干扰RNA阻抑p70S6K的表达,用SRB法检测阻抑p70S6K的表达对柚皮苷抑制细胞生长作用的影响.结果:柚皮苷呈浓度依赖性抑制非小细胞肺癌细胞的生长,并且可以下调p70S6K的表达.过表达p70S6K可以削弱柚皮苷抑制细胞生长的作用,敲降p70S6K可以增强柚皮苷抑制细胞生长的作用.结论:柚皮苷通过下调p70S6K抑制非小细胞肺癌细胞的生长.
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葫芦素E抑制HeLa细胞mTORC1的活性并诱导细胞自噬
目的：研究葫芦素E诱导HeLa细胞发生细胞自噬的作用机制。方法改良MTT法测定葫芦素E对HeLa细胞增殖的影响，免疫印迹法检测mTORC1下游信号蛋白的磷酸化以及自噬相关蛋白的表达。结果葫芦素 E对 HeLa细胞增殖有剂量依赖性抑制作用，其24 h 的 IC50为4.01μmol·L-1。通过对mTORC1底物磷酸化水平的检测发现，葫芦素E对p70S6K的磷酸化(活化)作用有明显的剂量和时间依赖性抑制作用。同时，葫芦素E增加自噬小体标志物LC3-Ⅱ的表达，氯喹能进一步提高其水平；葫芦素E还能降低p62/SQSTM1的水平，表明诱导了完整的细胞自噬过程。细胞自噬的诱导与mTORC1下游底物ULK1 S757磷酸化水平的下降有正相关性。结论葫芦素 E 可能通过抑制mTORC1活性而诱导细胞发生自噬作用。
