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芪玉三龙汤平衡肺癌小鼠Th1/Th2漂移相关机制
目的:探讨芪玉三龙汤对肿瘤细胞的促凋亡作用以及对肺癌小鼠辅助T细胞(Th cells)因子免疫生物调节作用.方法:采用Lewis肺癌细胞培养移植法(LLC)建立肺癌荷瘤小鼠模型,模型成功后随机分为模型组、化疗组、芪玉三龙汤组、联合组,每组8只,另设8只正常小鼠为空白组;观察小鼠的生存状态,称取瘤重,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化,判断芪玉三龙汤是否可诱导肿瘤细胞凋亡;采用酶联免疫(ELISA)法检测各组小鼠脾脏中白细胞介素(IL)-2,干扰素-γ(IFN-γ),IL-4,IL-10含量的变化;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肿瘤组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA的转录水平.结果:中药组、联合组生存状态明显优于化疗组.与模型组比较,芪玉三龙汤组、化疗组和联合组能显著抑制肿瘤生长(P＜0.01).芪玉三龙汤组电镜下可见肿瘤细胞的变化以凋亡为主,亦有坏死,化疗组电镜下可见多个凋亡小体,联合组电镜下可见典型坏死细胞.各组Bcl-2 mRNA表达水平显著低于模型组(P＜0.01);与化疗组比较,芪玉三龙汤组和联合组Bcl-2 mRNA表达水平显著降低(P＜0.01).各组Bax mRNA表达水平较模型组明显升高(P＜0.05).与模型组和化疗组比较,芪玉三龙汤组IL-2,中药组、联合组的IFN-γ含量显著增加(P＜0.01).芪玉三龙汤组及联合组IL-4,IL-10较模型组明显降低(P＜0.05),而联合组较化疗组IL-4,IL-10浓度显著降低(P＜0.01).结论:芪玉三龙汤可以改善肺癌小鼠的生存状态,诱导肺癌细胞凋亡,凋亡机制可能与下调Bcl-2,上调Bax有关.芪玉三龙汤能够增加IL-2,IFN-γ,降低IL-4,IL-10表达,从而平衡Th1/Th2漂移,改善免疫功能,抑制肿瘤细胞的免疫逃逸.
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芪玉三龙汤对Wnt信号通路拮抗基因SFRP-2的影响
目的:探讨中药复方芪玉三龙汤(Qinyu Sanlong decoction)对Wnt(Wingless,Int1的合称)信号通路拮抗基因分泌型Frizzled相关蛋白(SFRP)-2的影响.方法:基于前期研究基础,采用LLC细胞培养移植法,构建小鼠移植肺癌模型,将荷瘤小鼠随机分为模型组、芪玉三龙汤组(低、中、高剂量组)、化疗组、联合组、芪玉三龙汤组,小鼠分别按20.12,40.24,80.48 g·kg-1 ·d-灌胃给药,化疗组以顺铂0.4 mL腹腔注射给药(1次/周),联合组以芪玉三龙汤80.48 g·kg-1 ·d-1灌胃和腹腔注射顺铂联合给药,模型组以等体积0.9％氯化钠溶液灌胃,1次/d,连续给药21 d;称取瘤质量,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织β-链蛋白(β-catenin),SFRP-2蛋白表达.结果:与模型组相比,各用药组均可下调β-catenin蛋白表达(P＜0.01);与芪玉三龙汤20.12 g·kg-1 ·d-1组比较,其他各用药组亦可下调β-catenin蛋白表达(P＜0.01);与化疗组比较,芪玉三龙汤40.24,80.48 g·kg-1d-1组、联合组下调较明显(P ＜0.05,P＜0.01).与模型组相比,芪玉三龙汤40.24,80.48 g·kg-1 ·d-1组均可促进SFRP-2蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01);与芪玉三龙汤20.12 g·kg-1 ·d-1组比较,其他各用药组亦可上调SFRP-2蛋白表达水平(P＜0.01);与化疗组比较,芪玉三龙汤40.24,80.48 g·kg-1 ·d-1组均可促进SFRP-2蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01).用药组电镜下可见凋亡现象,以芪玉三龙汤80.48 g·kg-1 ·d-组、化疗组及联合组明显.结论:芪玉三龙汤可一定程度抑制肺癌生长,诱导其镜下凋亡,促进SFRP-2表达,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路.
关键词： 芪玉三龙汤 肺癌 分泌型卷曲相关蛋白-2 Wnt/β-连环蛋白 -
芪玉三龙汤对荷瘤小鼠肿瘤组织PI3K/Akt/mTOR通路分子表达的影响
目的:进一步研究芪玉三龙汤对荷瘤小鼠移植瘤PI3K/Akt/mTOR通路相关分子表达的影响.方法:无菌培养LLC细胞,收集细胞悬液接种C57BL/6小鼠腋部皮下构建肺癌模型,接种第11天将荷瘤小鼠随机分为6组:模型组,化疗组,芪玉三龙汤高、中、低剂量组,联合组,每组8只.称取瘤质量,计算抑瘤率;RT-qPCR法检测肿瘤组织PIK3CA、Akt、mTOR mRNA转录水平;Western blot法检测肿瘤组织p-Akt、p-mTOR、PDK1、p-PDK1蛋白表达水平.结果:芪玉三龙汤可温和抑制肺肿瘤生长,以高剂量组抑瘤作用优,但无明显量效关系,与化疗药联用暂无明显协同作用;芪玉三龙汤可下调PIK3CA、Akt、mTOR基因转录水平并且同时下调p-Akt、p-mTOR、PDK1、p-PDK1蛋白表达.结论:芪玉三龙汤温和的抑瘤作用与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路相关.
关键词： 芪玉三龙汤 肺癌 PI3K/Akt/mTOR -
芪玉三龙汤对肺癌小鼠肿瘤组织Wnt系列蛋白表达的影响
目的:探讨中药复方芪玉三龙汤对荷肺癌小鼠的抑瘤效应.方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,化疗组,芪玉三龙汤高、中、低剂量组,联合组,每组8只;造模第2天开始芪玉三龙汤低、中、高剂量组小鼠分别按20.12、40.24、80.48g·kg-1·d-1灌胃给药,化疗组按照0.4mL顺铂腹腔注射给药,联合组以芪玉三龙汤高剂量灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量0.9％氯化钠溶液给药,1次/d,连续给药21d;称取瘤质量,计算抑瘤率;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织Wntl、Wnt2、Wnt5a蛋白水平.结果:与模型组比较,各用药组Wntl、Wnt2、Wnt5a蛋白水平均显著降低(P＜0.01);与化疗组比较,芪玉三龙汤中、高剂量组Wntl、Wnt2、Wnt5a蛋白水平均显著降低(P＜0.01).芪玉三龙汤高剂量组、联合组生存状态优于化疗组;其高剂量抑制肿瘤生长作用较优,但量效关系不明显,其与顺铂联用有一定增效作用.芪玉三龙汤对肺癌移植瘤具有温和的抑制作用,其高剂量抑瘤效应较优.结论:芪玉三龙汤和化疗药联用具有协同效应,对肺肿瘤具有一定的抑制作用.
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芪玉三龙汤调节肺癌组织核转录蛋白表达抑制荷瘤小鼠瘤体生长的作用机制研究
目的 观察芪玉三龙汤对肺癌荷瘤小鼠瘤体的抑瘤效应及对Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路中糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、磷酸化GSK3β(p-GSK3β)、β-catenin蛋白表达的影响.方法 采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,按随机数字表法分为模型组、化疗组和芪玉三龙汤低、中、高剂量组以及联合组,每组8只.制模第2天开始,芪玉三龙汤低、中、高剂量组小鼠分别按20.12、40.24、80.48 g·kg-1·d-1灌胃中药,化疗组每周腹腔注射0.4 mL顺铂,联合组给予高剂量中药灌胃和顺铂腹腔注射联合用药,模型组给予等量生理盐水,连续给药21 d.实验结束后处死小鼠取肺组织,称取瘤质量,计算抑瘤率;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肿瘤组织GSK3β、p-GSK3β、β-catenin的蛋白表达水平.结果 与模型组比较,各药物组瘤质量、GSK3β、β-catenin的蛋白表达水平均明显降低,抑瘤率、p-GSK3β的蛋白表达水平明显升高,联合组瘤质量、抑瘤率的变化较芪玉三龙汤低、中、高剂量组更显著 〔瘤质量(g):1.48±0.71比4.53±1.34、4.27±0.62、3.45±1.05,抑瘤率:73.23％比13.51％、18.32％、33.86％,均P<0.01〕,联合组瘤质量、抑瘤率与化疗组相当〔瘤质量(g):1.48±0.71比1.49±0.68,抑瘤率:73.23％比73.01％,均P>0.05〕;而联合组GSK3β、p-GSK3β的蛋白表达水平变化也较芪玉三龙汤低、中、高剂量组和化疗组更显著〔GSK3β/β-肌动蛋白(β-actin):0.58±0.03比1.02±0.02、1.06±0.04、0.96±0.04、0.78±0.05,p-GSK3β/β-actin:1.93±0.05比1.40±0.09、1.41±0.06、1.60±0.06、1.79±0.02,均P<0.05〕,但对β-catenin蛋白表达的影响以芪玉三龙汤高剂量组的降低程度较化疗组和芪玉三龙汤低中剂量组及联合组更显著(β-catenin/β-actin:0.16±0.01比0.80±0.05、1.33±0.04、0.74±0.05、0.73±0.02).结论 芪玉三龙汤对肺癌移植瘤具有温和的抑制作用,高剂量抑制肿瘤生长作用较优,且量效关系明显.芪玉三龙汤和化疗药联用具有协同效应,对肺癌具有一定的抑制作用.
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芪玉三龙汤对肺肿瘤的抑制效应及对肺脏的影响
目的:研究芪玉三龙汤对荷肺癌小鼠的抑瘤效应及对小鼠肺脏的影响.方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、化疗组、芪玉三龙汤高、中、低剂量组、联合组,每组8只;实验第11天开始芪玉三龙汤低、中、高剂量组小鼠分别按(20.12、40.24、80.48)g/(kg·d)灌胃给药,化疗组按照0.4 mL顺铂腹腔注射给药,联合组以高剂量中药灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量生理盐水给药,1次/d,连续给药10 d;称取瘤质量,计算抑瘤率;实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测肿瘤组织PI3K mRNA的转录水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测肿瘤组织PI3K p85α、PI3K p110α蛋白水平;免疫组化检测肿瘤组织VEGF蛋白表达,HE染色法观察小鼠肺脏的病理形态变化.结果:与模型组比较,中药高剂量组能够抑制肺癌移植瘤生长,抑瘤率为23.86％,联合组与化疗组抑瘤率相当;芪玉三龙汤能够明显降低肿瘤组织PI3K mRNA的转录水平和PI3K p85α、PI3K p110α蛋白水平,与顺铂联用有一定协同增效作用;并且能够降低VEGF阳性细胞率;光镜下观察肺脏示芪玉三龙汤高、中剂量组以及联合组小鼠肺组织内未见肿瘤转移灶.结论:芪玉三龙汤可温和抑制肺癌移植瘤生长,可能与降低PI3K mRNA转录水平、PI3Kp85α、PI3K p110α蛋白表达有关,并可能通过降低VEGF表达减少肺脏的肿瘤转移.
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芪玉三龙汤对肺癌p70S6激酶和真核翻译起始因子4E的影响
目的:研究芪玉三龙汤对肺癌生长的关键合成蛋白p70S6激酶(p70S6K)和真核翻译起始因子4E(eIF4E)表达的影响.方法:基于前期研究基础,采用LLC细胞培养移植法构建移植肺癌模型,荷瘤成功后随机分为模型组(M),化疗组(C),中药组(低、中、高剂量组,分别命名为QL、QM、QH),联合组(CQH),低、中、高剂量组小鼠分别按(20.12、40.24、80.48)g/(kg·d)灌胃给药,化疗组以0.4 mL顺铂腹腔注射给药,联合组以中药高剂量灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组以等量生理盐水给药,1 次/d,连续给药10 d;称取瘤质量,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化;RT-qPCR法检测Ras mRNA表达水平;Westem Blot法检测肿瘤组织eIF4E、p-eIF4E、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达.结果:芪玉三龙汤可抑制肺癌移植瘤生长,电镜下可见凋亡小体,用药各组均可下调Ras转录水平,但中药各组之间无明显差异(P＞0.05),联合组与化疗组之间相比无统计学意义(P＞0.05).同时,该复方均可降低肿瘤组织eIF4E、p-eIF4E、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达.结论:芪玉三龙汤可抑制肺癌生长,诱导其镜下凋亡,与下调肺癌生长的关键合成蛋白p70S6K和eIF4E表达相关.
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芪玉三龙汤对荷肺癌小鼠免疫功能的影响
目的：研究芪玉三龙汤对荷肺癌小鼠皮下移植瘤生长，以及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法采用LLC细胞株培养移植法构建荷肺癌小鼠模型，随机分成模型组、化疗组、中药高、中、低剂量组、联合组，每组8只，另设8只正常小鼠为空白组；观察各组小鼠的生存状态，称取瘤质量，计算抑瘤率；透射电镜观察肿瘤组织内癌细胞超微结构的变化；流式细胞术检测小鼠外周血T细胞亚群( CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)的变化；酶联免疫吸附试验( ELISA)法检测小鼠脾脏IL-2、IL-10浓度。结果芪玉三龙汤高剂量组、联合组的生存状态优于化疗组；芪玉三龙汤具有温和的抑制肺癌移植瘤的作用，但与顺铂联用无明显增效作用；电镜下观察肿瘤细胞超微结构可见中药组肿瘤细胞有凋亡发生，以高剂量组凋亡坏死明显，化疗组可见多个凋亡小体，联合组肿瘤细胞严重坏死；芪玉三龙汤能明显增加CD4+水平，升高IL-2浓度，降低CD8+的水平和IL-10含量，提高CD4+/CD8+比值，联合组与化疗组比较有显著差异( P<0．01)。结论芪玉三龙汤能改善行化疗的荷瘤小鼠生存状态，可温和抑制肺癌移植瘤生长，诱导肺癌细胞凋亡，并具有改善荷瘤小鼠以及化疗药导致免疫功能低下的作用。
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芪玉三龙汤对肺癌移植瘤小鼠PI3K/Akt/mTOR通路PI3K、Akt、mTOR表达的影响
目的 研究芪玉三龙汤对小鼠皮下移植瘤生长及对PI3K/Akt/mTOR信号通路调节的影响.方法 采用Lewis肺癌细胞培养移植法复制肺癌荷瘤小鼠模型,荷瘤成功后随机分为模型组,化学治疗组,芪玉三龙汤高、中、低剂量组,联合组;观察小鼠的生存状态,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率;Western blot 法检测荷瘤小鼠肿瘤组织PI3K、Akt、mTOR蛋白表达.结果 芪玉三龙汤高剂量组、联合组生存状态优于化学治疗组;芪玉三龙汤对肺肿瘤具有温和的抑制作用,其高剂量抑制肿瘤生长作用较优,但量效关系不明显,其与顺铂联用无明显增效作用;芪玉三龙汤可以下调PI3K、Akt和mTOR表达水平,和顺铂联用对下调关键分子Akt的表达具有明显的协同作用.结论 芪玉三龙汤对肺癌移植瘤的抑制作用可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子有关,与化学治疗药联用可协同下调关键蛋白Akt的表达.
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芪玉三龙汤治疗中晚期非小细胞肺癌临床观察
目的:观察芪玉三龙汤治疗中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的临床疗效与中医证型的关系.方法:选择NSCLC患者31例,在常规治疗的基础上予以芪玉三龙汤口服及对症治疗,观察治疗后患者的临床疗效、生存质量评分、临床症状改善情况、中位生存期、无疾病进展期及1年生存率,以生存质量评价表(FACT-L)对患者生存质量信息进行采集、整理并录入数据库.结果:中晚期非小细胞肺癌患者中医辨证分型中以阴虚热毒型、气虚痰湿型较多,且随着患者患病时间的延长,气阴两虚型所占比重不断增加,芪玉三龙汤对该证型的治疗有效率和生存质量较高,存在优势.卡氏评分越高者临床疗效越好.治疗后,患者临床症状改善明显,生存时间延长,且与芪玉三龙汤干预时间呈正相关.结论:芪玉三龙汤对中晚期NSCLC瘤体稳定有一定作用,对患者的生存质量具有一定的改善作用.
关键词： 非小细胞肺癌(NSCLC) 芪玉三龙汤 中医证型 生存质量 -
芪玉三龙汤降低肺癌荷瘤小鼠程序性死亡蛋白1及配体(PD-1/PD-L1)的水平
目的 研究芪玉三龙汤在Lewis肺癌小鼠体内的抑瘤效应及对共刺激分子程序性死亡蛋白1及配体(PD-1/PD-L1)表达的影响.方法 采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,荷瘤成功后随机分为模型组、化疗组、中药高、中、低剂量组、联合组,每组8只;实验第11天开始中药低、中、高剂量组小鼠分别按(20.12、40.24、80.48)g/(kg·d)灌胃给药,化疗组按照0.4 mL顺铂腹腔注射给药,联合组以高剂量中药灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量生理盐水给药,1次/d,连续给药10d;检测各组荷瘤小鼠肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;称取瘤质量,计算抑瘤率;实时定量PCR和Western blot法分别检测荷瘤小鼠脾脏PD-1及肿瘤组织PD-L1的mRNA和蛋白水平.结果 与模型组比较,中药高剂量组能够抑制肺癌移植瘤生长,抑瘤率为23.86％,联合组与化疗组抑瘤率相当;中药高剂量组能明显降低脾脏组织PD-1 mRNA及PD-1蛋白表达,抑制肿瘤组织PD-L1 mRNA及蛋白表达.联合组PD-1、PD-L1蛋白水平明显低于化疗组,但对其他指标的交互作用无统计学意义.结论 芪玉三龙汤能通过降低PD-1/PD-L1水平温和抑制肺癌移植瘤生长.
