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补肾活血颗粒对帕金森病模型大鼠黑质纹状体bcl-2、bax表达的影响
目的：探讨补肾活血颗粒对帕金森病模型大鼠黑质纹状体中B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2, bcl-2)、bax表达的影响。方法33只雄性SD大鼠随机分为生理盐水正常组、6-羟基多巴胺模型组和补肾活血颗粒治疗组,应用免疫组织化学染色技术观察大鼠黑质纹状体中bcl-2、bax表达的变化情况。结果模型组bcl-2在黑质和纹状体的细胞阳性表达率增殖指数( pro-liferation index,PI)分别为0．43±0．022、1．14±0．057,均低于正常组(均P<0．01)和治疗组(均P<0．01)。模型组bax在黑质和纹状体的PI值分别为2．07±0．104、2．86±0．143,均高于正常组(均P<0．01)和治疗组(均P<0．01)。结论补肾活血颗粒治疗帕金森病的疗效机制可能与上调帕金森病大鼠黑质纹状体系统bcl-2蛋白表达及下调bax蛋白表达有关。
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益肾解毒方对肺腺癌骨转移裸鼠JNK/Bcl-2信号传导通路的影响
目的 探讨益肾解毒方对肺腺癌骨转移裸鼠JNK/Bcl-2信号传导通路的影响.方法 本研究在前期成功建立的裸鼠肺腺癌转移模型的基础上,运用免疫组织化学染色法检测各组JNK、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,图像分析使用MIA 4.0图像分析软件,观察和测量显微镜400倍视野下表达的阳性物质的光密度值.结果 模型组与益肾解毒方高剂量组JNK蛋白的表达低,两者无统计学差异(P＞0.05);帕米磷酸二钠组JNK蛋白的表达高,低剂量组、中剂量组及中+西药组次之,与模型组和高剂量组相比都有统计学差异(P＜0.05);模型组Bcl-2蛋白的表达高,其次是益肾解毒方高剂量组、中剂量组、帕米磷酸二钠组,Bcl-2蛋白表达低的是低剂量组与中+西药组,与模型组比较得出,各实验组Bcl-2蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组Bax蛋白表达低,与其他实验组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),中+西药组Bax蛋白表达高,其次是帕米磷酸二钠组、低剂量组、高剂量组、中剂量组;益肾解毒方高剂量组与中剂量组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);益肾解毒方低剂量组Caspase-3蛋白表达高,其次是中剂量组、中+西药组、帕米磷酸二钠组,益肾解毒方高剂量组和模型组Caspase-3蛋白表达低;与模型组相比,除高剂量组外其余各实验组均有统计学差异(P＜0.05).结论 肺腺癌骨转移与JNK/Bcl-2信号传导通路密切相关.本实验结果表明益肾解毒方对该信号通路上的关键分子JNK、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白有明显的调控作用,证实了这可能是其促进肿瘤细胞凋亡的关键环节,为中医药临床有效防治恶性肿瘤提供了一定的理论依据.
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威灵仙水提物对阿霉素耐药的人甲状腺未分化癌细胞株HTh74Rdox的作用机制
目的:探讨威灵仙水提物对阿霉素诱导耐药的人甲状腺未分化癌细胞株HTh74Rdox增殖的影响及机制.方法:用不同浓度威灵仙水提物处理HTh74Rdox后观察细胞形态;噻唑蓝(MTT)比色法检测威灵仙水提物对HTh74Rdox细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测HTh74Rdox细胞凋亡;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及其活性片段(cleaved-Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达.结果:威灵仙水提物对HTh74Rdox细胞的增殖有明显抑制作用,联合阿霉素后可减少阿霉素剂量;威灵仙水提物可显著诱导细胞凋亡(P＜0.01);且能明显提高cleaved-Caspase-3/Caspase-3,Bax/Bcl-2(P＜0.05).结论:威灵仙水提物可以抑制HTh74Rdox细胞的增殖,其机制可能与提高cleaved-Caspase-3/Caspase-3,Bax/Bcl-2有关;联合化疗药物使用具有减毒增效的作用.
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丫蕊花甾体皂苷YB16对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响
目的:探讨丫蕊花甾体皂苷YB16对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:体外培养PC-3细胞,给予不同浓度的YB16(0.125～ 16 μmol·L-1),以噻唑蓝(MTT)比色法检测YB16对PC-3的细胞毒性,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,吖啶橙(AO)染色、流式细胞术检测YB16对PC-3的凋亡影响,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测YB16对PC-3细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),B细胞淋巴瘤-xl(Bcl-xl),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2,Bcl-xl,Bax,激活型Caspase-3(cleaved-Caspase-3)蛋白表达,并对结果进行分析.结果:YB16能显著抑制PC-3细胞的生长,具有剂量依赖性(P ＜0.05);YB16能促进细胞的凋亡,相差显微镜,AO染色法观察可见细胞具凋亡特征性改变;YB16能下调Bcl-2,Bcl-xl,上调Bax,Caspase-3 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05).结论:YB16能抑制PC-3细胞增殖,促进PC-3发生凋亡,其机制可能与促进Caspase-3表达有关,具有良好的抗肿瘤作用.
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二冬膏延缓胃癌发生的作用机制
目的:通过分析大鼠胃组织细胞凋亡和血浆差异代谢产物,探讨二冬膏延缓胃癌发生的作用机制.方法:大鼠随机分为正常组、模型组、维甲酸(12 ×10-3g·kg-1)组、二冬膏低、高剂量(6,12 g·kg-1)组,除正常组外,其余大鼠igN-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)0.2 g·kg-1建立模型,10 d/次,共9次.各组每天ig相应药物,正常组ig等体积生理盐水,治疗3个月后处理动物,苏木素伊红(HE)染色分析胃癌程度及病理变化的改善;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定胃组织中凋亡抑制基因B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2) mRNA表达;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测胃组织细胞凋亡;血浆代谢组学寻找差异代谢产物.结果:与模型组比较,二冬膏低、高剂量组病变主要在良性的乳头状瘤和乳头状增生,说明二冬膏能够改善胃癌病变程度;低剂量组能明显降低胃组织Bcl-2 mRNA的表达(P＜0.01),TUNEL显示二冬膏低、高剂量组胃组织细胞凋亡数比模型组高.二冬膏低剂量血浆代谢产物中发现的鞘氨醇-1-磷酸(Sphingosine-1-phosphate),20-羟基-二十烷四烯酸(20-HETE),甘氨胆酸(Glycocholic acid)等与细胞凋亡相关.结论:二冬膏能够促进胃癌变大鼠胃组织发生细胞凋亡,延缓胃癌发生.
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灵芝多糖对小鼠胃肿瘤活性的体内外抑制作用
目的:通过体外肿瘤细胞抑制实验及体内抗肿瘤实验,探讨灵芝多糖体内外抗肿瘤作用,并阐明其作用机制.方法:体外实验,使用胃癌细胞株MKN45及AGS,分为空白组、顺铂组、灵芝多糖(20,10,5 g·L-1)组,加入药物孵育24,48 h后,使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化.体内实验,60只BALB/c裸鼠随机分为模型组、阿霉素组、灵芝多糖高、中、低剂量(200,100,50 mg·kg-1)组,除空白组外,其余各组使用Walker-256肿瘤细胞移植法建立胃肿瘤模型.1周后,除空白和模型组灌胃蒸馏水外,其余各组给予相应药物灌胃.4周后测量肿瘤大小,并取部分胃组织,采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因的表达.结果:与空白组比较,灵芝多糖高、中、低剂量组作用24,48 h后,均可以明显抑制胃癌细胞株MKN45和AGS的生长(P＜0.05);灵芝多糖高、中剂量组作用24 h均可以有效促进胃癌细胞MKN45和AGS的凋亡(P＜0.05),可以抑制AGS胃癌细胞的细胞周期,使其停留在G1期(P＜0.05).体内实验表明,灵芝多糖高、中剂量组可以有效抑制胃部肿瘤的生长,同时增加Bax基因表达量,抑制Bcl-2基因表达(P＜0.05).结论:灵芝多糖具有体内外抑制胃肿瘤细胞生长的作用,其作用与增加Bax基因表达,抑制Bcl-2基因表达,从而促进肿瘤细胞凋亡有关.
关键词： 灵芝多糖 胃肿瘤 细胞凋亡 B淋巴细胞瘤-2 Bcl-2相关X蛋白 -
萱草花总黄酮对小鼠急性酒精性肝损伤保护作用及机制探讨
目的:观察萱草花总黄酮对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法:60只小鼠随机分为正常组、模型组、联苯双酯组和萱草花总黄酮低、中、高剂量组.采用一次性灌胃乙醇的方法建立急性酒精性肝损伤模型.观察萱草花总黄酮对各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性以及肝组织超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)以及还原型谷胱甘肽(GSH)水平的影响,并观察肝组织病理改变;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肝细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达.结果:与模型组比较,萱草花总黄酮可明显降低血清ALT,AST活性(P＜0.05);降低肝组织中MDA含量,提高SOD,GPX,GSH活性(P＜0.05,P＜0.01).病理学检查可见,与模型组比较,萱草花总黄酮中、高剂量组可明显减轻肝细胞变性和坏死的程度,改善肝组织的病理学改变.Western blot结果可见萱草花总黄酮组Bel-2蛋白表达增加(P＜0.05,P＜0.01);Bax蛋白表达减少,Bax/ Bcl-2降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:萱草花总黄酮对乙醇所致小鼠急性酒精性肝损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用及调节凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax的表达有一定关联.
关键词： 萱草花总黄酮 酒精性肝损伤 抗氧化作用 B淋巴细胞瘤-2 Bcl-2相关X蛋白 -
芪玉三龙汤平衡肺癌小鼠Th1/Th2漂移相关机制
目的:探讨芪玉三龙汤对肿瘤细胞的促凋亡作用以及对肺癌小鼠辅助T细胞(Th cells)因子免疫生物调节作用.方法:采用Lewis肺癌细胞培养移植法(LLC)建立肺癌荷瘤小鼠模型,模型成功后随机分为模型组、化疗组、芪玉三龙汤组、联合组,每组8只,另设8只正常小鼠为空白组;观察小鼠的生存状态,称取瘤重,计算抑瘤率;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化,判断芪玉三龙汤是否可诱导肿瘤细胞凋亡;采用酶联免疫(ELISA)法检测各组小鼠脾脏中白细胞介素(IL)-2,干扰素-γ(IFN-γ),IL-4,IL-10含量的变化;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肿瘤组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA的转录水平.结果:中药组、联合组生存状态明显优于化疗组.与模型组比较,芪玉三龙汤组、化疗组和联合组能显著抑制肿瘤生长(P＜0.01).芪玉三龙汤组电镜下可见肿瘤细胞的变化以凋亡为主,亦有坏死,化疗组电镜下可见多个凋亡小体,联合组电镜下可见典型坏死细胞.各组Bcl-2 mRNA表达水平显著低于模型组(P＜0.01);与化疗组比较,芪玉三龙汤组和联合组Bcl-2 mRNA表达水平显著降低(P＜0.01).各组Bax mRNA表达水平较模型组明显升高(P＜0.05).与模型组和化疗组比较,芪玉三龙汤组IL-2,中药组、联合组的IFN-γ含量显著增加(P＜0.01).芪玉三龙汤组及联合组IL-4,IL-10较模型组明显降低(P＜0.05),而联合组较化疗组IL-4,IL-10浓度显著降低(P＜0.01).结论:芪玉三龙汤可以改善肺癌小鼠的生存状态,诱导肺癌细胞凋亡,凋亡机制可能与下调Bcl-2,上调Bax有关.芪玉三龙汤能够增加IL-2,IFN-γ,降低IL-4,IL-10表达,从而平衡Th1/Th2漂移,改善免疫功能,抑制肿瘤细胞的免疫逃逸.
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复方半枝莲抑制人结肠癌COLO205细胞增殖
目的:探讨复方半枝莲对人结肠癌细胞COLO205体内外生长的抑制作用及机制.方法:体外培养COLO205细胞,分为空白组,顺铂(0.15 g·L-1)组,复方半枝莲高、中、低剂量(0.60,0.30,0.15 g·L-1)组.利用噻唑蓝(MTT)法检测复方半枝莲对COLO205细胞增殖抑制率的影响.采用免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞内凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),细胞凋亡调控因子(PUMA)的表达情况.选用SPF级裸鼠,于背部接种结肠癌COLO205细胞,待瘤体长到肉眼可见时,测量瘤体大小,根据瘤体大小区间随机分为复方半枝莲高、低浓度组,紫杉醇组和空白组,应用结肠癌移植瘤裸鼠模型体内实验检测复方半枝莲对COLO205细胞体内生长的影响.结果:体外细胞实验表明,经复方半枝莲作用后的人结肠癌细胞COLO205细胞出现了变形,并有细胞膜破损,细胞数逐渐减少,脱落而死亡的现象.48 h时复方半枝莲对COLO205细胞的抑制作用强.其高、中、低剂量组抑制率分别为68.46％,63.11％,54.91％;且经复方半枝莲干预,COLO205细胞内的Bax,PUMA表达上调,Bcl-2表达下调;体内移植瘤实验显示,与空白组肿瘤体积比较,给药组的肿瘤体积明显减小.结论:复方半枝莲在体外内对人结肠癌细胞COLO205的生长均具有抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关.
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黄芪-莪术联合顺铂诱导肝癌细胞凋亡及其对miR-122a,miR-221,miR-151表达的影响
目的:探讨黄芪-莪术联合顺铂(DDP)抗肝癌的作用机制.方法:构建人肝癌裸鼠原位移植瘤模型.成瘤后,将其随机分为模型组、顺铂组(DDP,2 mg·kg-1,ip),黄芪-莪术高、中、低剂量(H,M,L,12,6,3 g·kg-1 ·d-1,ig)组,黄芪-莪术高剂量+顺铂组(H+ DDP),黄芪-莪术中剂量+顺铂组(M+DDP),黄芪-莪术低剂量+顺铂组(L+DDP),每组8只.采用TdT-mediated dUTP nick end labeling(TUNEL)法观察黄芪-莪术联合顺铂对人肝癌细胞HepG2的原位诱导凋亡作用,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其对凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的影响,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)观察人肝癌裸鼠肿瘤组织中microRNA (miR)-122a,miR-221,miR-151的表达.结果:H,H+DDP,M+DDP,L+DDP组均有肿瘤细胞凋亡,镜下观察肿瘤细胞核内呈棕黄色,核高度凝聚,部分细胞脱落,与模型组比较有明显的凋亡现象发生(P ＜0.05,P＜0.01),以H+DDP组诱导凋亡作用为显著.与模型组比较,H,M,H+DDP,M+DDP,L+DDP组血清中Bcl-2含量均显著降低(P＜0.01),以H+ DDP组降低为显著.与DDP组比较,H,M,L,H+DDP,M+DDP,L+DDP均能显著上调miR-122a的表达(P＜0.01),H+DDP对miR-221,miR-151的表达有显著抑制作用(P＜0.01).结论:黄芪-莪术能显著诱导人肝癌细胞HepG2凋亡,且诱导凋亡作用与剂量有一定的正相关性,其机制可能与显著下调Bcl-2表达,上调miR-122a,下调miR-221,miR-151的表达有关,与DDP合用表现为协同增效作用.
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九味通窍汤对人脑胶质瘤的体外药效学研究及组方分析
目的:对九味通窍汤进行组方拆分,并对各组进行体外抗脑胶质瘤药效学分析,对其体外药效学可能的作用机制进行探索,为探究全方起效的物质基础提供实验依据.方法:根据君臣佐使组合原理将九味通窍汤拆分成7个组方,选用人源脑神经胶质瘤U251细胞进行体外药效筛选,采用噻唑蓝(MTT)法测定各个组方对细胞活力的影响;采用流式细胞术比较所得体外药效佳组方Ⅳ与全方(10,4,1 g·L-1)作用U251细胞24 h对细胞的凋亡影响;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测全方及组方Ⅳ对凋亡蛋白p53和抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达影响;组方Ⅳ的醇提物用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯及水饱和正丁醇梯度萃取,采用MTT法测定各萃取部位对U251细胞增殖的抑制作用.结果:组方Ⅳ对细胞的抑制作用为明显,且具有浓度依赖性;细胞经10,4,1g·L-1组方Ⅳ,全方处理24 h后凋亡率显著高于空白组(P＜0.01);细胞经4 g·L-1组方Ⅳ,全方处理后Bcl-2蛋白表达水平较空白组显著降低(P＜0.01),p53蛋白表达较空白组显著提高(P＜0.01);组方Ⅳ梯度萃取后部位Ⅲ对细胞活力的抑制作用为明显,且具有浓度依赖性.结论:组方Ⅳ细胞活力抑制作用明显,诱导细胞凋亡明显,并可以降低Bcl-2,并提高p53蛋白的表达;部位Ⅲ抑制脑胶质瘤细胞活力明显.
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藏花素对H2O2诱导氧化应激细胞模型凋亡的影响
目的:文章通过观察藏花素对H2O2诱导的PC12细胞的保护作用和对凋亡的影响,探讨藏花素对阿尔茨海默病(AD)细胞模型保护作用的机制.方法:乳酸脱氢酶(LDH)活性测定观察藏花素对PC12细胞模型的影响,RT-PCR检测PI3K、AKT、Bcl-2和Bax mRNA表达水平,Western blotting检测PI3K、p-AKT、Bcl-2和Bax的蛋白表达.结果:藏花素预保护浓度在0.625μmol/L和5.000μmol/L之间,细胞存活率随着藏花素浓度的升高而升高;藏花素组和维生素E组与模型组相比,PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05),Bax mRNA和蛋白表达降低(P＜0.05).结论:藏花素可能是通过上调PI3K、p-AKT和Bcl-2的表达,从而介导PC12细胞发挥抗氧化和细胞凋亡的生物学功能.
关键词： 藏花素 氧化应激 凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B B淋巴细胞瘤-2 -
清心开窍方有效成分对AD大鼠学习记忆能力及其海马区Bax、 Bcl-2、 Caspase-3和βAPP表达的影响
目的 探讨清心开窍方中皂苷、挥发油及多糖有效成分对淀粉样蛋白(Aβ)1-40海马注射诱导痴呆(Alzheimer's disease,AD)大鼠海马区Bax、Bcl-2、Caspase-3及βAPP表达的影响.方法 选取1 12只雄性SD大鼠,随机分为7组,每组16只,分别为正常组、假手术组、模型组、安理申组、皂苷组、挥发油组、多糖组.采用海马注射A β1-40诱导AD大鼠模型.造模后第2天开始灌胃,正常组、假手术组、模型组给予等量双蒸水灌胃,安理申组[盐酸多奈哌齐片,1.67 mgl(kg·d)]、皂苷组[9 mL/(kg·d)]、挥发油组[3.33 mL/(kg·d)]、多糖组[8.33 mL/(kg·d)]灌胃,每天1次,连续2周(上午10:00).灌胃结束后,采用Morris水迷宫测试大鼠的空间学习记忆能力;采用TUNEL染色检测海马CA1区细胞凋亡;采用免疫组化、实时定量荧光PCR及WB法检测AD大鼠海马区Bax、Bcl-2、Caspase-3及βAPP表达.结果 造模前各组大鼠同一时间点的逃避潜伏期、穿台次数比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),且逃避潜伏期随时间推移逐渐缩短.造模后,与模型组比较,除挥发油组、多糖组外,安理申组、皂苷组逃避潜伏期均缩短,穿台次数显著增多(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,皂苷组、挥发油组、多糖组大鼠海马CA1区凋亡细胞数量明显减少(P ＜0.05,P＜0.01);Bcl-2表达上调,Bax、CaspaseG、BAPP表达下调,Bcl-2/Bax比值明显提高(P＜0.05,P＜0.01).结论 清心开窍方3种有效成分能不同程度地改善AD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与降低海马区Bax、Caspase-3及βAPP表达,提高Bcl-2表达,抑制AD大鼠海马区内细胞凋亡有关.
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低频电针对多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织Bax、Bcl-2表达的影响
目的 探讨低频电针对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢组织中Bax、Bcl-2表达的影响.方法 24只3周龄雌性SD大鼠等量随机分成模型组(M组)、针刺组(A组)与正常对照组(C组),每组8只.通过注射睾酮和高脂饲料喂养进行造模.从1 1周龄开始,A组连续5周,每周5次,每次30 min低频电针,M组和C组不干预.在治疗前后,空腹取血检测睾酮(T)、胰岛素(FINS)、血糖(FBG),比较胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).卵巢组织通过HE染色观察结构,采用荧光定量PCR及Western blot检测卵巢组织中Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白表达,并计算Bax/Bcl-2比值.结果 自8周龄起,M组体重均重于C组(P ＜0.05,P＜0.01);自14周龄起,A组体重明显低于M组(P＜0.05).1 1周及16周,M组血清T、FINS及HOMA-IR水平较C组显著升高(P＜0.01);16周龄A组血清T、FINS及HOMA-IR水平较M组及治疗前明显降低(P ＜0.05,P＜0.01).A组卵巢切片HE染色可见多个黄体存在,囊性卵泡减少,颗粒细胞层比M组明显增厚;M组Bax蛋白及mRNA表达高于C组,Bcl-2蛋白及mRNA表达低于C组(P ＜0.05,P＜0.01);A组Bax蛋白及mRNA表达低于M组(P＜0.05),Bax/Bcl-2比值低于M组(P＜0.01).结论 低频电针可能通过降调卵巢组织中Bax mRNA及蛋白表达和降低Bax/Bcl-2比值,抑制颗粒细胞凋亡,改善卵巢局部微环境,促进黄体生成,恢复正常排卵周期.
关键词： 多囊卵巢综合征 电针 Bcl-2相关X蛋白 B淋巴细胞瘤-2 -
喉鳞癌组织中Survivin、Bcl-2与S100A4的表达水平与其临床病理意义
目的 探究喉鳞癌组织中凋亡抑制蛋白(Survivin)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)与S100A4的表达水平与其临床病理意义.方法 选取2013年12月至2015年12月期间收治的、符合纳入标准的喉鳞癌患者50例,所有患者经手术切除后,共获得50份喉鳞癌标本,将其分为高分化组(n=22)、中分化组(n=8)以及低分化组(n=20);另在同一时期将23例喉部声带息肉标本,作为对照组.观察4组Survivin、Bcl-2与S100A4的表达水平以及Survivin、Bcl-2与S100A4的表达水平与淋巴结转移的关系;并观察S100A4与Bcl-2、Survivin与S100A4以及Survivin与Bcl-2之间的表达关系.结果 ①4组Survivin、Bcl-2与S100A4的阳性表达率:与对照组相比,高分化组、中分化组以及低分化组的Survivin、Bcl-2与S100A4的阳性表达率均较高,且差异具有统计学意义(P<0.001).②淋巴结转移关系:Survivin、Bcl-2、S100A4表达水平与在有无淋巴结转移患者之间无显著差异(P>0.05).③相关性分析:S100A4阳性表达率与Bcl-2无明显关系(χ2=0.004,P=0.947).Survivin与S100A4阳性表达两者具有统计学差异(χ2=4.861,P=0.027),呈正相关关系(r=0.541,P<0.05).Survivin与Bcl-2阳性表达具有统计学差异(χ2=8.026,P=0.005),呈正相关关系(r=0.482,P<0.05).结论 Survivin、Bcl-2与S100A4可作为喉鳞癌早期诊断的重要三个指标,可为喉鳞癌的诊断、治疗以及预后提供依据.
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扁塑藤素对胃癌细胞MGC803及SGC7901增殖和凋亡的影响
目的:研究扁塑藤素对胃癌MGC803和SGC7901细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法:体外培养MGC803和SGC7901细胞,细胞接受0-50 μmol/L药物处理之后,采用CCK-8实验、Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测及细胞周期检测实验研究扁塑藤素对胃癌MGC803细胞增殖及凋亡的影响;采用罗丹明123测定细胞线粒体跨膜电位变化,后采用Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关x蛋白(Bcl-associated x protein,Bax)表达水平.同时用人胃癌细胞系MGC803进行裸鼠成瘤实验,观察扁塑藤素对裸鼠成瘤的影响.结果:扁塑藤素可以抑制MGC803和SGC7901细胞增殖,其IC50值分别为8.5 μmol/L和12.6μmol/L;Annexin V-FITC/PI双染实验显示随着药物浓度的增加,出现凋亡的细胞明显增加;细胞周期实验显示扁塑藤素可以诱导MGC803细胞出现G1期阻滞;细胞经过药物处理后,细胞线粒体跨膜电位明显下降.Western blot实验显示随着药物浓度的增加,细胞中Bax蛋白表达水平上升,Bcl-2蛋白表达水平下降,呈现一定的浓度依赖性.裸鼠成瘤实验显示,扁塑藤素可以抑制裸鼠种植瘤的生长.结论:扁塑藤素能显著抑制胃癌MGC803和SGC7901细胞增殖并诱导其凋亡,认为扁塑藤素可能通过增强线粒体通透性来诱导细胞凋亡.
关键词： 扁塑藤素 胃癌细胞 Bcl-2相关X蛋白 B淋巴细胞瘤-2 -
Bcl2促进UMR-106细胞BMP-2、OPG表达及补肾健脾活血方对其影响
目的 基于构建Bcl2沉默和过表达腺病毒观察Bcl2对成骨细胞骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)蛋白的调节作用及补肾健脾活血方对其影响.方法 将培养的UMR-106细胞分为空载腺病毒组(沉默Bcl2空载腺病毒NC-bcl2,过表达Bcl2空载腺病毒WT-bcl2)、Bcl2腺病毒组(沉默Bcl2腺病毒sh-bcl2,过表达Bcl2腺病毒Ad-bcl2),空载腺病毒+空白血清组(NC-bcl2,WT-bcl2)、空载腺病毒+补肾健脾活血方含药血清组(NC-bcl2+ME,WT-bcl2+ ME)、腺病毒+空白血清组(sh-bcl2,Ad-bcl2)、腺病毒+补肾健脾活血方血清组(sh-bcl2+ ME,Ad-bcl2+ ME),用RT-qPCR检测Bcl2、OPG mRNA的变化、应用免疫印迹(Western Blot)检测Bcl2、OPG、BMP-2的变化.结果 ①荧光倒置显微镜观察包装腺病毒转染UMR-106细胞;②在正常培养基中,与NC-bcl2比较,sh-bcl2可以降低Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均＜0.05),与WT-bcl2比较,Ad-bcl2可以提高Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均＜0.05);③与NC-bcl2比较,RT-qPCR显示sh-bcl2可以降低Bcl2 mRNA的表达,但OPG mRNA无统计学意义;④在大鼠血清干预中,与空载腺病毒比较,补肾健脾活血方含药血清均可以增加BMP-2、OPG蛋白表达(P均＜0.05);在sh-bcl2干预的细胞中,补肾健脾活血方含药血清提高BMP-2、OPG蛋白的表达(P均＜0.05);在Ad-bcl2干预的细胞中,中药干预后,BMP-2、OPG未见明显变化.结论 Bcl2可以影响BMP-2、OPG蛋白的表达,补肾健脾活血方可能通过作用于Bcl2影响成骨细胞成骨相关蛋白的表达.
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β-榄香烯对兔VX2喉癌生长及肿瘤相关因子的影响
目的 建立喉癌动物模型以探讨β-榄香烯对兔VX2喉癌生长的抑制作用,并初步探究其作用机制.方法 新西兰大白兔66只,接种VX2肿瘤组织块悬液建立喉癌兔动物模型,随机数字表法分为对照组、顺铂组和β-榄香烯组,给予相应药物干预后处死动物,测量肿瘤体积,计算抑瘤率;免疫组化染色检测肿瘤组织增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、血管内皮生长因子D(VEGF-D)表达水平.结果 β-榄香烯组和顺铂组的抑瘤率分别为48.5％和51.4％;β-榄香烯组和顺铂组Bcl-2表达差异无统计学意义,但均低于对照组(P值均＜0.05);与对照组相比,β-榄香烯组PCNA表达明显少(P ＜0.05);β-榄香烯组VEGF-D表达水平均低于对照组和顺铂组(P值均＜0.05).结论 β-榄香烯对兔VX2喉肿瘤的生长有明显抑制作用,其机制可能与抑制PCNA、VEGF-D和Bcl-2表达有关.
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Slit2/Robo1的在宫颈癌细胞异常低表达与对细胞凋亡的影响
目的 研究Slit2及其受体Robo1在人宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞凋亡的影响和潜在机制.方法 分别用实时荧光定量聚合酶链式反应(re-al time PCR)和免疫印迹实验检测Slit2、Robo1、Bcl-2的mRNA和蛋白在20例正常宫颈上皮(NCE)、40例宫颈上皮内瘤变(CIN)、60例宫颈鳞癌(SCC)组织中的表达情况.在转染试剂Lipofectamine2000 作用下,对HeLa细胞进行转染siRNA(沉默组)、质粒(过表达组)和单纯转染pCMV-HA质粒( pCMV-HA对照)及单纯转染无关siRNA序列的对照组(阴性对照),于特定时间后收集细胞用于后续实验.经Annexin V/PI染色后,用流式细胞术检测Robo1 过表达和Slit2沉默后对细胞凋亡的影响;用免疫印迹法检测细胞凋亡指标PARP-1的剪切形式及Bcl-2的表达.结果 Slit2 mRNA在NCE、CIN、SCC中的相对表达水平分别为 2.48 ±0.36, 1.78 ±0.22, 1.45 ±0.17, Robo1 mRNA 分别为2.69 ±0.31,1.94 ±0.21,1.48 ±0.15,Bcl-2分别为1.61 ±0.21,2.22 ±0.23, 2.85 ±0.28,差异均有统计学意义(均P＜0.05).过表达组和pCMV-HA对照组的Robo1相对表达水平分别为3.48 ±0.51,1.00 ±0.14,差异有统计学意义(P＜0.05).过表达组早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率分别为(7.81 ±0.80 )%, (14.22 ±1.80 )%和(23.11 ±2.02)%,pCMV-HA组早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率分别为(2.60 ±0.82 )%,(7.33 ±0.81 )%和(9.91 ±1.72 )%,差异有统计学意义( P ＜0.05 ).沉默组和阴性对照组 Slit2 分别为 1.00 ±0.11, 0.51 ±0.12,差异有统计学意义(P＜0.05);阴性对照细胞早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率分别为(4.91 ±1.12 )%,(7.90 ±1.01 )%,(12.80 ±1.70 )%;沉默组分别为(2.82 ±1.01)%,(5.13 ±2.10 )%,(7.92 ±1.90 )%,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 Slit2/Robo1在宫颈癌组织中呈异常低表达,有利于抵抗细胞凋亡,在宫颈癌发生发展中发挥重要作用.
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莪术醇通过下调Bcl-2蛋白表达介导抗乳腺癌的机制研究
目的 研究莪术醇体内外诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制.方法 (1)细胞实验:体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,空白对照组给予不含药物的培养基,溶媒对照组给予1％无水乙醇,实验组分别给予25,50,100 μmol·L-1莪术醇,处理24,48,72 h.用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测莪术醇对细胞的增殖抑制作用;以流式细胞术检测细胞凋亡率;以实时荧光定量PCR法检测细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关Ⅹ蛋白(Bax)蛋白的表达.(2)动物实验:建立荷人乳腺癌MCF-7移植瘤裸鼠模型,模型组给予0.9％ NaCl,空白组给予不含药物的脂质体,对照组给予榄香烯口服乳125 mg·kg-1,实验组给予莪术醇脂质体100 μmol·kg-1,进行荷瘤裸鼠体内药效实验.结果 (1)细胞实验:莪术醇可抑制MCF-7细胞的增殖.3个浓度(25,50,100 μmol·L-1)莪术醇处理MCF-7细胞24h后,细胞凋亡率分别为(12.80±2.41)％,(22.10±1.46)％和(33.10±3.25)％,与空白对照组(5.36±0.81)％相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).莪术醇可下调Bcl-2蛋白的表达并上调Bax蛋白的表达,实验组与空白对照组相比,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).(2)动物实验:莪术醇可抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长.结论 莪术醇体内外诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制可能下调Bcl-2/Bax比例有关.
关键词： 莪术醇 乳腺癌 细胞凋亡 B淋巴细胞瘤-2 B淋巴细胞瘤-2-相关Ⅹ蛋白
