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JNK基因RNAi对镉致293细胞凋亡的影响
目的 利用RNAi技术探讨JNK基因在镉致293细胞凋亡过程中的作用.方法 细胞转染siRNA-JNK后染镉,用rt-PCR、Western blotting法测JNK基因表达,流式细胞术测细胞凋亡,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测细胞活力.结果 30 μmol/L氯化镉可使293细胞JNK基因Mrna和蛋白表达明显增高,细胞凋亡增加.siRNA-JNK可抑制这些效应,而错义siRNA-JNK和单纯转染试剂无效.结论 JNK基因在镉致293细胞凋亡过程中起到关键作用.
关键词： 镉 c-Jun氨基末端激酶 基因沉默 -
HSF1/HSP70通路抑制c-Jun氨基末端激酶的活化保护UVA诱导的HaCaT细胞凋亡
目的 观察热休克转录因子1( HSF1)与热休克蛋白70( HSP70)对紫外线A(UVA)诱导HaCaT细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 建立8mJ/cm2 UVA辐射损伤HaCaT细胞的病理模型.将细胞随机分为对照组、8mJ/cm2 UVA照射组、HSP70转录抑制剂组(50 μmol/L槲皮素).Honechst 33258荧光染色观察细胞凋亡；蛋白质印迹法检测UVA辐射HaCaT细胞后p-HSF1和HSP70蛋白的经时变化及UVA辐射后孵育6h JNK(c-Jun氨基末端激酶)、p-JNK的蛋白表达；Real-Time PCR检测HSP70 mRNA的表达.结果 UVA辐射后HaCaT细胞内p-HSF1、HSP70蛋白表达量均出现先增加后减少的时间依赖性趋势,其中p-HSF1于lh开始增加,3h达高峰,HSP70于6h达高峰,24h基本恢复原始水平；UVA辐射前预先加入HSP70转录抑制剂槲皮素能显著抑制HSP70 mRNA的表达,增加p-JNK的表达量,同时Honechst 33258荧光染色观察其与UVA辐射组比较凋亡率明显升高.结论 8mJ/cm2 UVA辐射HaCaT细胞在一定时间内可使HSF1活化致HSP70表达增加.HSFl/HSP70通路对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡具有保护作用,其机制与HSP70大量表达后抑制JNK的活化有关.
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益肾解毒方对肺腺癌骨转移裸鼠JNK/Bcl-2信号传导通路的影响
目的 探讨益肾解毒方对肺腺癌骨转移裸鼠JNK/Bcl-2信号传导通路的影响.方法 本研究在前期成功建立的裸鼠肺腺癌转移模型的基础上,运用免疫组织化学染色法检测各组JNK、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,图像分析使用MIA 4.0图像分析软件,观察和测量显微镜400倍视野下表达的阳性物质的光密度值.结果 模型组与益肾解毒方高剂量组JNK蛋白的表达低,两者无统计学差异(P＞0.05);帕米磷酸二钠组JNK蛋白的表达高,低剂量组、中剂量组及中+西药组次之,与模型组和高剂量组相比都有统计学差异(P＜0.05);模型组Bcl-2蛋白的表达高,其次是益肾解毒方高剂量组、中剂量组、帕米磷酸二钠组,Bcl-2蛋白表达低的是低剂量组与中+西药组,与模型组比较得出,各实验组Bcl-2蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组Bax蛋白表达低,与其他实验组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),中+西药组Bax蛋白表达高,其次是帕米磷酸二钠组、低剂量组、高剂量组、中剂量组;益肾解毒方高剂量组与中剂量组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);益肾解毒方低剂量组Caspase-3蛋白表达高,其次是中剂量组、中+西药组、帕米磷酸二钠组,益肾解毒方高剂量组和模型组Caspase-3蛋白表达低;与模型组相比,除高剂量组外其余各实验组均有统计学差异(P＜0.05).结论 肺腺癌骨转移与JNK/Bcl-2信号传导通路密切相关.本实验结果表明益肾解毒方对该信号通路上的关键分子JNK、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白有明显的调控作用,证实了这可能是其促进肿瘤细胞凋亡的关键环节,为中医药临床有效防治恶性肿瘤提供了一定的理论依据.
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芪蓟肾康方对AngII所致大鼠肾小球系膜细胞增殖变化中JNK-AP1影响
目的：探讨芪蓟肾康方通过JNK信号通路对大鼠肾小球系膜细胞的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞，用血管紧张素Ⅱ刺激系膜细胞增生，给予芪蓟肾康方黄酮干预，用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肾小球系膜细胞上清液 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）、活化蛋白1（AP-1）、纤维粘连蛋白（FN）蛋白表达；实时定量 PCR 法检测 JNK、AP-1 mRNA 的表达。结果：与正常组比较，模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN 蛋白表达明显升高（P约0.05或 P约0.01）；与模型组比较，治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN 蛋白表达明显降低（P约0.05或 P约0.01）。与正常组比较，模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN mRNA 表达明显升高（P约0.05或 P约0.01）；与模型组比较，治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN mRNA明显降低（P约0.05）。结论：芪蓟肾康方可以通过下调肾小球系膜细胞JNK、AP-1 mRNA及蛋白的表达水平，抑制 JNK 信号转导，降低 AP-1的活性，减少 FN 的增殖，从而减轻 GMC 增生，延缓肾小球的损伤，防止肾小球的硬化。
关键词： c-Jun氨基末端激酶 活化蛋白1 纤维粘连蛋白 血管紧张素Ⅱ -
电针"环跳"穴不同组织对坐骨神经损伤大鼠脊髓JNK、c-jun磷酸化表达的影响
目的:观察电针刺激"环跳"穴不同组织(神经干与肌肉层)对坐骨神经损伤大鼠L4-L5脊髓c-jun氨基末端激酶(JNK)与c-jun磷酸化表达的影响,探讨"环跳"穴深刺或浅刺对周围神经损伤修复的作用机制.方法:将清洁级SD大鼠按随机数字表随机分为正常组、模型组、环跳浅刺组、环跳深刺组,每组12只.采用横断法复制大鼠坐骨神经横断模型.电针"环跳"穴治疗,深刺组针刺触及神经干,以大鼠下肢出现瞬间抽动为度;浅刺组针刺非神经干肌肉层,以穴区肌肉出现轻微颤动为宜.每次治疗时间为20 min,每日1次,连续治疗10 d.苏木素-伊红(HE)染色法观察L4-L5脊髓病理形态学变化;免疫组化法检测大鼠L4-L5脊髓磷酸化JNK(p-JNK)和磷酸化c-jun(p-c-jun)蛋白表达.结果:模型组脊髓神经元胞体出现肿胀、变性凋亡,经电针治疗后,神经元细胞凋亡数量减少,环跳深刺组L4-L5脊髓组织病理形态学变化改善程度明显优于浅刺组.模型组L4-L5脊髓p-JNK和p-c-jun表达升高,经电针治疗后,二者表达水平均降低(均P＜0.01),且环跳深刺组p-JNK和p-c-jun表达下降程度明显高于环跳浅刺组(P＜0.01).结论:针刺对坐骨神经损伤大鼠脊髓病理形态学变化有明显改善作用,电针刺激"环跳"穴不同组织可以不同程度下调坐骨神经损伤大鼠L4-L5脊髓p-JNK和p-c-jun表达水平,抑制JNK信号转导通路激活,保护神经元细胞,这可能是环跳穴深刺触及神经干疗效优于浅刺非神经干肌肉层的机制之一.
关键词： 坐骨神经损伤 深刺 "环跳"穴 c-Jun氨基末端激酶 C-Jun -
针刺对四氯化碳致肝纤维化大鼠血小板衍生生长因子信号通路的影响
目的:观察针刺对肝纤维化模型大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)信号通路蛋白和mRNA表达的影响,探讨针刺抗肝纤维化的可能机制.方法:将46只SD大鼠分为空白组10只,模型组、非穴组、针刺组,每组12只.采用50％四氯化碳(CCl4)和橄榄油腹腔注射复制肝纤维化模型.针刺“太冲”“期门“肝俞”,电针“足三里”.采用Western blot和Real-time PCR方法检测各组大鼠PDGF信号通路蛋白及其mRNA表达.结果:与空白组相比较,模型组大鼠血清PDGF含量及肝脏PDGF信号通路相关蛋白、mRNA表达明显升高(P＜0.01,P＜0.05)；与模型组相比,针刺组则能够抑制PDGF-β R及其下游细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白与mRNA的表达(P＜0.01,P＜0.05)；而针刺对Jun细胞核激酶(JNK)、P 38蛋白的表达无明显调节作用(P＞0.05).非穴组与模型组相比,各指标蛋白与mRNA的表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:针刺通过抑制CCl4致肝纤维化大鼠的PDGF信号通路,减少胶原沉积,促进细胞外基质的降解,从而起到治疗肝纤维化的作用.
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针刺对强迫游泳应激大鼠海马c-jun氨基末端激酶信号通路的影响
目的:观察针刺对强迫游泳应激大鼠海马c-jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路影响,探讨针刺抗抑郁的作用机制.方法:SD大鼠随机分为空白组、空白+JNK通路阻断剂(SP 600125,以下简称SP)组、模型组、模型+SP组、针刺组、针刺+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组,每组6只.采用强迫游泳应激结合孤养法造模.针刺干预选取"百会""印堂"穴,每次20 min,每天1次,共治疗2d;阳性对照药物给予氟西汀1.8 mg/kg灌胃,每天1次,共治疗2d.通过游泳不动时间对大鼠进行行为学评价;采用Western blot法检测海马中JNK上游激酶MKK 4和MKK 7、JNK、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达.结果:与空白组比较,空白+SP组游泳不动时间差异无统计学意义(P＞0.05),模型组游泳不动时间显著增加(P＜0.01);与模型组比较,模型+SP组、针刺组、针刺+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组游泳不动时间明显缩短(P＜0.05,P＜0.01).不同组别之间JNK蛋白表达水平差异无统计学意义(均P＞0.05).与空白组比较,模型组海马中MKK 4、MKK 7、p-JNK蛋白表达显著升高(均P＜0.01);与模型组比较,氟西汀+SP组MKK 4、MKK 7蛋白表达显著降低(均P＜0.05),其余组有降低趋势,但差异无统计学意义(均P＞0.05),模型+SP组、针刺组、针刺+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组p-JNK蛋白表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:针刺治疗能降低急性应激模型大鼠海马JNK的磷酸化水平及蛋白表达,有效抑制JNK信号转导通路活性,进而改善强迫游泳应激抑郁模型大鼠的行为学症状,这可能是针刺发挥抗抑郁效应的分子机制之一.
关键词： 针刺 海马 强迫游泳应激 抑郁样行为反应 c-Jun氨基末端激酶 -
敷胸膏对流感病毒肺炎大鼠肺组织JNK,MKK4表达的影响
目的:探讨清肺通络敷胸膏对流感病毒肺炎大鼠肺组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK),丝裂原活化蛋白激酶激酶4(MKK4)表达的影响,并探讨其作用机制.方法:幼龄Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、敷胸膏高、中、低剂量组(21.0,10.5,5.25g·kg-1),每组10只.除正常组外,其余各组采用甲型流感病毒鼠肺适应株A/FM/47(H1N1)0.1 mL滴鼻建立流感病毒肺炎模型,造模成功后各治疗组给予不同剂量敷胸膏治疗5d.苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肺组织病理变化,免疫组化检测大鼠肺组织中JNK及MKK4的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)进一步检测肺组织中JNK及MKK4 mRNA表达水平.结果:HE染色结果提示,与模型组比较,敷胸膏高、中、低剂量组能明显改善流感病毒肺炎大鼠肺组织损伤程度,随剂量增大而逐渐增强.免疫组化与Resl-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组JNK,MKK4蛋白及mRNA表达显著增强(P＜0.05);与模型组比较,敷胸膏高、中、低剂量组JNK,MKK4蛋白及mRNA表达均显著减弱(P＜0.05).结论:敷胸膏对流感病毒肺炎大鼠的保护作用机制可能与下调MAPKs信号通路中JNK,MKK4的表达有关.
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大黄酸通过MAPK信号转导通路诱导HK-2细胞凋亡
目的:研究大黄酸诱导人肾小管上皮细胞系HK-2细胞凋亡作用及其凋亡机制.方法:将密度为4×104个/mL的HK-2细胞悬液接种于96孔板,培养24 h后分别加入不同浓度大黄酸(0,25,50,100 μmol· L-1)作用12,24,48 h,MTT法检测大黄酸对HK-2细胞活性的抑制作用;利用Hoechst 33258染色法和流式细胞术检测大黄酸诱导HK-2细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测细胞原癌基因c-jun,活化转录调控因子2(ATF-2),半胱天冬氨酸酶3(Caspase-3)基因表达水平;Western blotting检测细胞磷酸化c-jun氨基末端激酶(p-JNK),c-jun氨基末端激酶(JNK),磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK),p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和活化型半胱天冬氨酸酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白的变化,并利用JNK抑制剂SP600125,p38抑制剂SB203580进一步验证JNK和p38所介导的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在HK-2细胞凋亡中的作用.结果:大黄酸能够呈剂量依赖性和时间依赖性抑制HK-2细胞活性.大黄酸作用下HK-2细胞凋亡率明显增加.大黄酸作用于HK-2细胞c-jun,ATF-2及Caspase-3基因的mRNA均明显上调;p-p38,p-JNK及CleavedCaspase-3蛋白表达显著性增加,JNK和p38总蛋白表达无明显变化.JNK特异性抑制剂SP600125与p38特异性抑制剂SB203580均能显著降低大黄酸诱导的HK-2细胞的凋亡率.结论:大黄酸能够诱导HK-2细胞凋亡,其作用机制可能是通过影响MAPK信号转导通路实现的.
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左归丸对庆大霉素所致肾小管损伤大鼠c-Jun氨基末端激酶的影响
目的:探讨左归丸对庆大霉素所致肾小管损伤大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)的影响.方法:将40只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组(C组),模型组(M组),c-Jun氨基末端激酶特异性抑制剂(SP600125)组(S组),左归丸组(Z组),每组10只,对照组ip给予0.9％生理盐水2.5 mL·kg-1·d-1,模型组ip硫酸庆大霉素100 mg·kg-1·d-1,SP600125组左侧ip硫酸庆大霉素100 mg·kg-1·d-1,2h后右侧ip SP600125 15 mg·kg-1·d-1,左归丸组ip硫酸庆大霉素100 mg·kg-1 ·d-1和ig左归丸水溶液10 g·kg-1·d-1,4组大鼠连续给药10 d.第11日测量各组大鼠尿N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)；HE染色观察各组大鼠肾脏病理状况；免疫组化技术检测各组大鼠肾脏JNK,c-Jun的表达；以Western blot方法检测各组大鼠肾脏c-Jun氨基末端激酶(JNK),c-Jun蛋白的表达.结果:尿NAG酶结果显示:与C组比较,M组尿NAG酶显著升高(P＜0.01)；与M组比较,S组和Z组尿NAG酶下降(P＜0.05).HE染色结果显示:C组肾小管、间质无特殊改变；M组肾小管上皮细胞出现空泡变性、管腔出现损伤,有大量的炎性细胞浸润；S组与Z组肾小管少量炎性细胞浸润,轻微肿胀变性.免疫组化结果显示:与C组比较,M组JNK,c-Jun在肾小管大量表达(P＜0.01)；与M组比较,S组和Z组JNK,c-Jun在肾小管表达较少(P＜0.01).免疫印迹杂交结果显示:M组JNK,c-Jun蛋白灰度值较对照组明显升高(P＜0.01),S组与Z组较M组灰度值下降(P＜0.01或P＜0.05).结论:左归丸对庆大霉素所致肾小管损伤大鼠的保护作用可能与抑制c-Jun氨基末端激酶的激活有关.
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艳山姜挥发油抑制JNK1/2/3磷酸化对ox-LDL诱导的HAECs损伤的影响
目的:研究艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人主动脉内皮细胞(HAECs)损伤的保护作用,并分析可能的作用机制.方法:实验分为空白组(无血清内皮细胞培养基),模型组(200 mg·L-ox-LDL),艳山姜挥发油高剂量组(200mg·L-1ox-LDL+100 μg·L-1艳山姜挥发油)和低剂量组(200 mg·L-1ox-LDL+10 μg·L-1艳山姜挥发油)共4组.艳山姜挥发油预保护1h,继续加入ox-LDL共同作用24 h,采用噻唑盐(MTT)法分析细胞存活率,苏木精-伊红(HE)染色法进行形态学观察;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)外漏量,Western blot分析c-Jun氨基末端激酶(JNK)1/2/3,p-JNK1/2/3蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应分析JNK1/2/3 mRNA表达水平.结果:艳山姜挥发油能显著提高HAECs的存活率,改善细胞的病理损伤,减少LDH外漏量,抑制JNK1/2/3蛋白磷酸化,但对JNK1/2/3蛋白和mRNA水平无显著影响.结论:艳山姜挥发油改善ox-LDL诱导的HAECs损伤,其作用机制与抑制JNK1/2/3蛋白磷酸化相关.
关键词： 艳山姜 挥发油 氧化低密度脂蛋白 人主动脉内皮细胞 c-Jun氨基末端激酶 -
黄芪注射液通过调节JNK和NF-κB通路抑制视网膜神经节细胞凋亡
目的:观察黄芪注射液对视神经牵拉伤大鼠视神经保护作用并探讨其作用机制.方法:将66只SPF级健康Wistar雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组、视神经牵拉伤模型组及黄芪注射液治疗组3组各22只大鼠;横向定量牵拉法制作大鼠视神经损伤模型,假手术组仅暴露视神经不予牵拉;术后治疗组给予黄芪注射液腹腔注射,模型组给予生理盐水腹腔注射;治疗14 d后取大鼠视网膜组织,利用蛋白免疫印迹法检测JNK和NF-κB表达变化,并采用real time-PCR方法检测p75NTR的mRNA水平.结果:与假手术组比较,视神经牵拉伤模型大鼠视网膜组织p75NTR mRNA水平及JNK蛋白表达明显上升,NF-κB蛋白表达显著下降;给药14d后与模型组比较,黄芪注射液治疗组大鼠视网膜组织p75 NTR mRNA水平及JNK蛋白表达显著减少,NF-κB蛋白表达明显升高.结论:黄芪注射液具有视神经保护作用,其机制可能与抑制p75NTR mRNA的表达及JNK蛋白水平、促进NF-κB的蛋白表达有关.
关键词： 视神经损伤 黄芪 p75神经营养因子受体 c-Jun氨基末端激酶 核因子κB -
人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠海马p-ERK1/2与p-JNK表达的影响
目的 探讨人参皂苷Rg1抗脑缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)损伤大鼠海马神经元凋亡的可能机制.方法 成年健康雌性SD大鼠120只随机分为脑缺血再灌注模型组(模型组)、人参皂苷Rg1低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高剂量(40 mg/kg)组及假手术组,每组1 8只.各组均腹腔注射给药,假手术组及模型组腹腔注射等量生理盐水,每天1次,连续7天,末次给药后30 min,大鼠右侧大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)2 h再灌注24 h制备I/R模型.以Longa EZ法评定神经功能,尼氏染色、TUNEL染色观察海马锥体神经细胞的损伤情况,并计算神经细胞凋亡率.采用Western blot法检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)及磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2,p-ERK 1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK)及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinases,p-JNK)表达.结果 与假手术组比较,模型组神经功能评分、细胞凋亡率、p-JNK、p-ERK 1/2蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01),锥体细胞存活数减少(P＜0.01)；与模型组比较,人参皂苷Rg1各剂量组神经功能评分、细胞凋亡率降低(P＜0.05,P＜0.01),人参皂苷Rg1中、高剂量组大鼠锥体细胞存活数增加,海马CA1区p-JNK蛋白表达降低,p-ERK1/2表达升高(P ＜0.05,P＜0.01).假手术组海马CA1区有3-4层锥体细胞,排列整齐、紧密,高倍镜下细胞核大而圆,有1～2个核仁.脑组织缺血损伤后,海马区神经细胞受损严重,CA1区失去正常结构,细胞排列散乱,细胞数量减少.部分神经元皱缩,核固缩、深染,呈三角形、长条形、梭形或不规则形,核染色聚集,核仁不清晰.与人参皂苷Rg1低剂量组比较,人参皂苷Rg1中、高剂量组神经功能评分、细胞凋亡率及p-JNK蛋白表达降低(P＜0.05,P ＜0.01),锥体细胞存活数增加,p-ERK1/2表达升高(P ＜0.05,P＜0.01).人参皂苷Rg1中、高剂量能够改善缺血神经细胞形态,减少神经细胞的丢失,其中,高剂量组作用强于低剂量组.JNK蛋白条带分为两个亚带,JNK1是分子量为46 kD的蛋白,JNK2分子量为54 kD.ERK蛋白条带也分为两个亚带,ERK1是分子量为44 kD的蛋白,ERK2分子量为42 kD的蛋白.结论 人参皂苷Rg1对I/R大鼠的保护作用与抑制海马神经元凋亡,调节p-JNK及p-ERK1/2表达水平有关.
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通络益肾方对高糖诱导肾小球系膜细胞GRP78mRNA及JNK mRNA表达的影响
目的 探讨通络益肾方治疗糖尿病肾病的可能作用机制. 方法 35只SD大鼠随机分为空白组、西药组及中药大、中、小剂量组,每组7只.中药大、中、小剂量组小鼠每日分别给予6.20、3.10、1.55 g/ml的通络益肾方2 ml灌胃;西药组小鼠每日灌胃洛汀新(0.09 mg/ml)、糖适平(0.27 mg/ml)混合液2ml.每日1次,连续给药10天.于末次灌胃2h后制备含药血清.大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1细胞分正常组、模型组、西药组及中药大、中、小剂量组,同步化24 h后,正常组加5.6 mmol/L低糖+10％的胎牛血清100 μl,模型组加30 mmol/L高糖+10％的空白血清100μl,中药大、中、小剂量组加30 mmol/L 高糖及10％的中药大、中、小剂量含药血清100μl,西药组加30 mmol/L高糖+10％的西药血清100μl.分别培养12h、24h、48h和72h后,采用流式细胞术检测系膜细胞凋亡情况,RT-PCR检测各组系膜细胞葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、c-Jun氨基末端激酶(JNK) mRNA的表达水平.结果 与正常组同时间点比较,模型组系膜细胞在24h、48h和72h凋亡率持续增加(P＜0.01).与模型组同时间点比较,各给药组24h、48h和72h时系膜细胞凋亡率均明显下降(P＜0.01);中药大、中、小剂量组在各时间点系膜细胞凋亡率随着药物剂量升高而降低,呈剂量依赖性(P＜0.01).与正常组同时间点比较,模型组GRP78 mRNA 在24 h、48 h持续升高,而72h明显下降,JNK mRNA表达在48、72 h时明显增加(P＜0.05或P＜0.01).与模型组同时间点比较,各给药组系膜细胞GRP78 mRNA、JNK mRNA在48h、72h时明显减低,且以中药大剂量组低(P＜0.05或P＜0.01). 结论 通络益肾方可抑制肾小球系膜细胞凋亡,其作用机制可能与延缓GRP78 mRNA增幅、下调JNK mRNA表达有关.
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黄芪注射液对低氧低糖/复氧复糖大鼠海马神经元JNK3表达的影响
目的 观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元C-JUN氨基末端激酶(JNK3)表达的影响.方法 取原代培养8d大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组(模型组)、黄芪注射液组和溶媒对照组.模型组缺氧缺糖0.5h再复氧复糖,于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、72和120h用免疫组化法和免疫印迹法检测海马神经元JNK3表达.结果除120 h之外,模型组JNK3阳性神经元数目和蛋白平均吸光度值在各个时间点均比对照组明显增多(29.3±1.3 vs 3.1±0.8,P＜0.05;0.765±0.06 vs 0.448±0.06,P＜0.05);黄芪注射液组JNK3阳性神经元数目和蛋白平均吸光度值均比模型组明显减少(18.2±1.5 vs 29.3±1.3,P＜0.05;0.658±0.04vs 0.765±0.06,P＜0.05).结论 黄芪注射液可抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元JNK3表达,并因此抑制神经元凋亡.
关键词： 缺氧缺糖/复氧复糖 黄芪注射液 c-Jun氨基末端激酶 海马神经元 -
JNK抑制剂对D-氨基葡萄糖衍生物诱导人食管癌Eca-109细胞周期阻滞和凋亡的影响
目的 观察特异性C-JUN氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)诱导的Eca-109细胞凋亡和细胞周期阻滞的影响,并探讨COPADG诱导Eca-109细胞凋亡的潜在分子机制.方法 体外培养Eca-109细胞,以COPADG及SP600125与细胞作用;Western blot法检测P-JNK蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期.结果 COPADG显著增加Eca-109细胞P-JNK蛋白的表达和细胞凋亡率,且诱导Eca-109细胞发生G0/G1期细胞阻滞,SP600125明显减少Eca-109细胞凋亡,并使G0/G1期细胞阻滞向G2/M期细胞阻滞发展.结论 COPADG可能通过激活JNK信号通路诱导Eca-109细胞凋亡.
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JNK信号通路介导高糖诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖
目的 明确C-JUN氨基末端激酶(JNK)信号通路在高糖诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖中的作用.方法 提取大鼠原代心肌成纤维细胞,观察不同糖浓度(12、18和25 mmol/L葡萄糖)和不同刺激时间(0、12、24和48 h)对JNK通路的影响.实验分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、JNK抑制剂SP600125组(25 mmol/L葡萄糖+SP600125 10、20μmol/L)和高渗组(5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇)培养48 h,应用MTT测定细胞增殖、Weastern blot测定JNK磷酸化水平和增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达、RT-PCR检测C-JUN基因表达.结果 高糖呈时间和剂量依赖性增加JNK磷酸化水平.与对照组比较,高糖显著地促进了心肌成纤维细胞的增殖(0.44±0.02 vs 0.31±0.02,P＜0.01),并上调了C-JUN的基因表达和PCNA蛋白水平.SP600125能够浓度依赖性地抑制高糖诱导的细胞增殖和JNK通路的激活.结论 JNK信号通路部分地介导了高糖诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖.
关键词： 葡萄糖 心肌成纤维细胞 增殖 c-Jun氨基末端激酶 -
阿米卡星致毒豚鼠耳蜗中p-JNK表达增强
目的 研究阿米卡星(AMK)对豚鼠耳蜗磷酸化C-JUN氨基末端激酶(JNK)表达的影响及其耳毒性机制.方法 将豚鼠分为对照组、AMK 3、7和11d组.AMK组分别每日肌肉注射AMK(400 mg/kg),对照组肌肉注射等量0.9%氯化钠注射液.用听脑干反应(ABR)测试和耳蜗铺片异硫氰酸四甲基罗丹明(TRITC)标记的鬼笔环肽荧光染色,观察豚鼠听觉功能及耳蜗毛细胞形态;用免疫组织化学法和显微图像技术以及蛋白质印迹技术检测p-JNK在耳蜗中的表达.结果 AMK对豚鼠耳蜗毛细胞的损伤由底转向顶转发展.AMK 3、7和11 d组耳蜗外毛细胞p-JNK阳性反应的平均吸光度值分别为169.40±1.18、153.87±2.05和145.23±2.98,AMK组p-JNK表达明显增强(P＜0.01).在4、12和24kHz刺激频率下,AMK 7和11d组ABR阈移(dBSPL)分别为6.25±1.96、10.58±2.90、16.13±3.80和49.19±7.48、58.42±7.56、63.54±8.72,比对照组显著增大(P＜0.01).结论 JNK信号通路可能参与了AMK的耳毒性损伤.
关键词： c-Jun氨基末端激酶 阿米卡星 豚鼠 耳蜗 -
JNK/c-Jun信号通路在大鼠胸主动脉瘤模型中的表达及意义
目的 探讨c -Jun氨基末端激酶(JNK)及c-Jun在实验性大鼠胸主动脉瘤中的表达及其意义. 方法 将20只成年雄性Wistar大鼠随机分为两组,即对照组和手术组.采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,于术后4周取外敷CaCl2段胸主动脉.用免疫组织化学和Western blotting方法检测动脉瘤壁JNK和c-Jun的表达. 结果 免疫组织化学显示,磷酸化JNK(p-JNK)和磷酸化c-Jun( p-c-Jun)主要表达于动脉瘤中膜,而对照组表达很弱.Western blotting显示,动脉瘤组织中p-JNK和p-c-Jun表达均强于对照组. 结论 p-JNK和p-c-Jun在动脉瘤中表达强于对照组,JNK/c-Jun信号通路可能在动脉瘤形成过程中起重要作用.
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芹菜素改善棕榈酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡与氧化应激
目的 探讨芹菜素对棕榈酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用及其作用机制.方法体外培养大鼠H9c2心肌细胞,分为对照组、棕榈酸组、芹菜素组、棕榈酸+芹菜素组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)激动剂组、JNK激动剂组+棕榈酸组,JNK激动剂+棕榈酸+芹菜素组.对照组加入0.5％二甲基亚砜(DMSO);棕榈酸组加入500μmol/L棕榈酸;芹菜素组加入20μmol/L芹菜素;棕榈酸+芹菜素组先加入20μmol/L芹菜素处理H9c2细胞2 h,之后再加入500μmol/L棕榈酸;JNK激动剂+棕榈酸+芹菜素组是在棕榈酸+芹菜素组的基础之上加用20 mg/kg JNK激动剂处理;JNK激动剂组只用20 mg/kg JNK激动剂处理;JNK激动剂+棕榈酸组用20 mg/kg JNK激动剂和500μmol/L棕榈酸共同刺激.经上述处理24 h后,光学显微镜下观察细胞形态;原位末端标记法(TUNEL)染色和分裂化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(C-caspase3)免疫荧光观察细胞凋亡;免疫印记检测凋亡相关蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路;RT-PCR检测超氧化物歧化酶(SOD1、2、3)的表达;DCFH-DA荧光探针检测活性氧簇(ROS)水平;氧化应激相关试剂盒检测丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的活性.结果光学显微镜下观察和TUNEL染色显示,相比对照组,棕榈酸显著诱导H9c2细胞凋亡,而芹菜素预处理可以显著降低棕榈酸诱导的细胞凋亡.免疫荧光染色显示,相比对照组,棕榈酸组C-caspase3聚积增加,而芹菜素可以抑制棕榈酸诱导的C-caspase3的聚积.免疫印记结果表明,和对照组相比,棕榈酸促进Bax和C-caspase3的表达(均P<0.05),而相对棕榈酸组,芹菜素提前干预2 h能抑制棕榈酸促进的Bax和C-caspase3的表达(均P<0.05).细胞内活性氧检测及实时定量PCR显示,和对照组相比,棕榈酸显著诱导细胞内ROS增加,转录水平SOD1、SOD2及SOD3减少,GPX产生减少,MDA产生增加(均P<0.05),和棕榈酸组相比,芹菜素+棕榈酸组,芹菜素预处理抑制了棕榈酸诱导的细胞内ROS的增加,抑制MDA的产生及恢复SOD和GPX的活性(均P<0.05).后借助JNK激动剂证实了相比对照组,棕榈酸增加JNK的磷酸化水平(P<0.05),而相比棕榈酸组,棕榈酸+芹菜素组,芹菜素预处理抑制了棕榈酸诱导的JNK的磷酸化(P<0.05).结论芹菜素可通过抑制JNK通路改善棕榈酸诱导的H9c2凋亡与氧化应激.
