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针刺介入时机对缺血性中风大鼠神经功能评分和Bcl-2、Bax表达的影响
目的：研究不同时间点介入针刺治疗对缺血性中风大鼠神经功能评分和对缺血脑组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2, Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associat-ed X protein,Bax)阳性表达的细胞数量的影响,探讨针刺治疗机制及介入时机。方法将200只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、2小时针刺组、72小时针刺组和168小时针刺组5组,除假手术组外,均采用线栓法制备大鼠局灶性永久性脑缺血模型,在术后1、3、7、14天,4个时间点采用Garcia复合评分法评价大鼠神经功能,用酶联免疫分析法探查缺血脑组织中的Bcl-2、Bax蛋白表达情况,并在显微镜下记录阳性细胞数目进行比较。结果针刺各组缺血性中风大鼠神经功能评分得到明显改善,优于模型组(P<0.001)；2小时针刺组分别优于72小时、168小时组(P<0.01),差异有统计学意义。缺血性中风大鼠术后不同时间点脑组织中的Bcl-2,Bax表达均增高,1天达到高峰,随后下降,与假手术组比较有统计学意义(P<0.001,P<0.01)。术后2小时与模型组、72小时、168小时针刺组比较,可明显提高Bcl-2蛋白的表达、抑制Bax蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.001)；72小时与168小时针刺组比较可明显提高Bcl-2蛋白的表达、抑制Bax蛋白的表达,差异有统计学意义( P<0.01)。结论针刺可明显提高缺血性中风大鼠的Garcia评分,改善其运动、感觉和协调功能；针刺可通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达来抑制神经细胞凋亡,挽救缺血半暗带神经细胞的功能,而且在缺血性中风后越早介入针刺治疗疗效越好,存在一个佳治疗时间窗。
关键词： 缺血性中风 针刺 神经功能评分 B细胞淋巴瘤/白血病-2 Bcl-2相关X蛋白 大鼠 -
当归红芪超滤膜提取物对阿霉素致心肌细胞凋亡的影响
目的:研究当归红芪超滤膜提取物(UFE-AH)对阿霉素所致心肌细胞凋亡的影响.方法:取新生1～2d的Wistar乳鼠,用差速贴壁法原代提取心肌细胞,调整细胞密度1×106/mL,于37℃5％ CO2培养箱中密闭培养48 h.用2.5 mg·L-1阿霉素作用于心肌细胞24 h成功建立心肌细胞凋亡模型.实验分5组:正常对照组、阿霉素组(2.5 mg·L-1)、UFE-AH低、中、高剂量干预组(阿霉素造模前2h预先分别给予3.75,7.5,15 g·L-1当归红芪超滤膜提取物).四氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞生长抑制率,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤,Western blot(蛋白印迹法)检测B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bel-2),Bel-2相关X蛋白(Bax)表达水平.结果:与正常组相比,阿霉素组心肌细胞生长抑制率明显增加,且头部DNA含量占总含量的百分数(HDNA％),尾部DNA含量占总含量的百分数(TDNA％),尾长(TL),尾短(TM),尾距(OTM)均明显升高,Bcl-2蛋白表达水平下降、Bax表达水平升高,均有统计学意义(P＜0.01)；UFE-AH干预组的心肌细胞生长抑制率明显降低,且HDNA％,TDNA％,TL,TM,OTM数值均降低,Bcl-2蛋白表达水平上调,Bax表达水平下调,有显著性差异(P＜0.01).结论:UFE-AH可减轻阿霉素对心肌细胞DNA的损伤,上调Bcl-2/Bax而抑制心肌细胞的凋亡,具有抗心肌细胞凋亡的保护作用.
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补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢Bcl-2/Bax表达的影响
目的:观察补肾调冲方对雷公藤多苷片所致卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)雌性大鼠卵巢性激素水平和卵巢中B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2),促进凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 assaciated Xprotein,Bax)蛋白及mRNA表达的影响,探讨补肾调冲方的预防作用.方法:SD雌性大鼠42只,随机分为正常组,模型组,结合雌激素组,补肾调冲方预防高、中、低剂量组.运用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中雌二醇(estradiol,E2),卵泡刺激素(follicule-stimulating hormone,FSH),黄体生成素(luteinizing hormone,LH),孕酮(progesterone,P)水平.蛋白质免疫印迹(Western blot)法和逆转录-聚合酶链式方应(RT-PCR)法检测卵巢组织中Bcl-2,Bax蛋白和mRNA的表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠FSH,LH含量明显升高,E2的含量明显降低,卵巢组织中Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显降低,Bax蛋白及mRNA的表达明显升高(P＜0.01);补肾调冲方各给药组和结合雌激素组E2的含量均高于模型组(P＜0.01),其中补肾调冲方低、中、高剂量和结合雌激素组E2含量与正常组比较,差异无统计学意义.补肾调冲方各给药组和结合雌激素组FSH,LH的含量均低于模型组(P＜0.01);低、中、高剂量组和结合雌激素组FSH,LH含量与正常组比较,差异无统计学意义.各组与正常组P含量比较差异无统计学意义.补肾调冲方预防低、中、高剂量组和结合雌激素组Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显高于模型组(P＜0.01);Bax蛋白及mRNA的表达明显低于模型组(P＜0.01).结论:补肾调冲方对卵巢具有一定的保护作用,可以预防卵巢早衰的发生.其作用机制可能与补肾调冲方中某些中药能够调节卵巢性激素水平,维持Bcl-2,Bax的平衡,降低卵泡闭锁的速度,抑制卵泡的过度凋亡,改善卵巢的功能.
关键词： 补肾调冲方 卵巢早衰 性激素 B细胞淋巴瘤/白血病-2 Bcl-2相关X蛋白 -
威灵仙水提物对阿霉素耐药的人甲状腺未分化癌细胞株HTh74Rdox的作用机制
目的:探讨威灵仙水提物对阿霉素诱导耐药的人甲状腺未分化癌细胞株HTh74Rdox增殖的影响及机制.方法:用不同浓度威灵仙水提物处理HTh74Rdox后观察细胞形态;噻唑蓝(MTT)比色法检测威灵仙水提物对HTh74Rdox细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测HTh74Rdox细胞凋亡;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及其活性片段(cleaved-Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达.结果:威灵仙水提物对HTh74Rdox细胞的增殖有明显抑制作用,联合阿霉素后可减少阿霉素剂量;威灵仙水提物可显著诱导细胞凋亡(P＜0.01);且能明显提高cleaved-Caspase-3/Caspase-3,Bax/Bcl-2(P＜0.05).结论:威灵仙水提物可以抑制HTh74Rdox细胞的增殖,其机制可能与提高cleaved-Caspase-3/Caspase-3,Bax/Bcl-2有关;联合化疗药物使用具有减毒增效的作用.
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丫蕊花甾体皂苷YB16对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响
目的:探讨丫蕊花甾体皂苷YB16对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:体外培养PC-3细胞,给予不同浓度的YB16(0.125～ 16 μmol·L-1),以噻唑蓝(MTT)比色法检测YB16对PC-3的细胞毒性,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,吖啶橙(AO)染色、流式细胞术检测YB16对PC-3的凋亡影响,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测YB16对PC-3细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),B细胞淋巴瘤-xl(Bcl-xl),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2,Bcl-xl,Bax,激活型Caspase-3(cleaved-Caspase-3)蛋白表达,并对结果进行分析.结果:YB16能显著抑制PC-3细胞的生长,具有剂量依赖性(P ＜0.05);YB16能促进细胞的凋亡,相差显微镜,AO染色法观察可见细胞具凋亡特征性改变;YB16能下调Bcl-2,Bcl-xl,上调Bax,Caspase-3 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05).结论:YB16能抑制PC-3细胞增殖,促进PC-3发生凋亡,其机制可能与促进Caspase-3表达有关,具有良好的抗肿瘤作用.
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苦参碱抑制Akt信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡
目的:研究苦参碱对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及其可能的分子机制.方法:噻唑蓝比色法(MTT)测定苦参碱对SW480细胞株增殖的影响;Hoechst33258染色检测苦参碱对SW480细胞凋亡的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测苦参碱对SW480细胞中总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),B细胞淋巴瘤-2 (Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的干预作用.结果:苦参碱(0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 g·L-1)能浓度和时间依赖性地抑制SW480细胞增殖.作用24,48,72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为1.72,1.08,0.67 g·L-1,Hochest33258染色和流式细胞术结果显示苦参碱能显著诱导细胞凋亡(P＜0.01),随着药物质量浓度的提高,细胞凋亡率逐渐上升.Western blot检测显示,SW480细胞加入苦参碱后,胞内总Akt的含量无显著变化,但p-Akt的生成被显著抑制,凋亡抑制性蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增高(P＜0.05).结论:苦参碱能够诱导SW480细胞凋亡,该药理作用可能与苦参碱对Akt信号通路的抑制有关.
关键词： 苦参碱 结肠癌 凋亡 总蛋白激酶B信号通路 B细胞淋巴瘤-2 Bcl-2相关X蛋白 -
灵芝多糖对小鼠胃肿瘤活性的体内外抑制作用
目的:通过体外肿瘤细胞抑制实验及体内抗肿瘤实验,探讨灵芝多糖体内外抗肿瘤作用,并阐明其作用机制.方法:体外实验,使用胃癌细胞株MKN45及AGS,分为空白组、顺铂组、灵芝多糖(20,10,5 g·L-1)组,加入药物孵育24,48 h后,使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化.体内实验,60只BALB/c裸鼠随机分为模型组、阿霉素组、灵芝多糖高、中、低剂量(200,100,50 mg·kg-1)组,除空白组外,其余各组使用Walker-256肿瘤细胞移植法建立胃肿瘤模型.1周后,除空白和模型组灌胃蒸馏水外,其余各组给予相应药物灌胃.4周后测量肿瘤大小,并取部分胃组织,采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因的表达.结果:与空白组比较,灵芝多糖高、中、低剂量组作用24,48 h后,均可以明显抑制胃癌细胞株MKN45和AGS的生长(P＜0.05);灵芝多糖高、中剂量组作用24 h均可以有效促进胃癌细胞MKN45和AGS的凋亡(P＜0.05),可以抑制AGS胃癌细胞的细胞周期,使其停留在G1期(P＜0.05).体内实验表明,灵芝多糖高、中剂量组可以有效抑制胃部肿瘤的生长,同时增加Bax基因表达量,抑制Bcl-2基因表达(P＜0.05).结论:灵芝多糖具有体内外抑制胃肿瘤细胞生长的作用,其作用与增加Bax基因表达,抑制Bcl-2基因表达,从而促进肿瘤细胞凋亡有关.
关键词： 灵芝多糖 胃肿瘤 细胞凋亡 B淋巴细胞瘤-2 Bcl-2相关X蛋白 -
萱草花总黄酮对小鼠急性酒精性肝损伤保护作用及机制探讨
目的:观察萱草花总黄酮对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法:60只小鼠随机分为正常组、模型组、联苯双酯组和萱草花总黄酮低、中、高剂量组.采用一次性灌胃乙醇的方法建立急性酒精性肝损伤模型.观察萱草花总黄酮对各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性以及肝组织超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)以及还原型谷胱甘肽(GSH)水平的影响,并观察肝组织病理改变;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肝细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达.结果:与模型组比较,萱草花总黄酮可明显降低血清ALT,AST活性(P＜0.05);降低肝组织中MDA含量,提高SOD,GPX,GSH活性(P＜0.05,P＜0.01).病理学检查可见,与模型组比较,萱草花总黄酮中、高剂量组可明显减轻肝细胞变性和坏死的程度,改善肝组织的病理学改变.Western blot结果可见萱草花总黄酮组Bel-2蛋白表达增加(P＜0.05,P＜0.01);Bax蛋白表达减少,Bax/ Bcl-2降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:萱草花总黄酮对乙醇所致小鼠急性酒精性肝损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用及调节凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax的表达有一定关联.
关键词： 萱草花总黄酮 酒精性肝损伤 抗氧化作用 B淋巴细胞瘤-2 Bcl-2相关X蛋白 -
平喘宁对哮喘大鼠Bcl-2,Bax,EGF mRNA及PDGF mRNA表达的影响
目的:观察平喘宁对寒性哮喘大鼠的肺功能、气道形态学、肺组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),表皮生长因子(EGF)mRNA及血小板衍生生长因子(PDGF) mRNA表达的影响.方法:将105只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、桂龙咳喘宁组、地塞米松组、平喘宁高、中、低剂量组,每组15只.以卵蛋白致敏及寒冷刺激复制大鼠寒哮模型,造模21 d后,各给药组分别给予桂龙咳喘宁组(10 9·kg-1·d-1),地塞米松组(0.4 mg·kg-1·d-1),平喘宁高、中、低剂量组(19.6,9.8,4.9 g·kg-1 ·d-1),ig给药,正常组、模型组每天ig给予等量蒸馏水,连续给药4周,处死前测定肺功能,处死后解剖大鼠并取出肺组织.采用免疫组化法测定肺组织中Bcl-2及Bax的表达.采用苏木素和伊红(HE)染色行病理形态学改变观察,采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量检测EGF mRNA,PDGF mRNA表达丰度.结果:与正常组比较,模型组大鼠支气管炎性细胞浸润明显,显著变窄,平滑肌增厚;肺功能下降(P＜0.01).Bcl-2表达升高,Bax表达降低(P＜0.01);EGF mRNA,PDGF mRNA表达升高(P＜0.01).与模型组比较,各给药组的肺组织病理改变减轻;肺功能有不同程度的好转(P＜0.01,P＜0.05).各给药组肺组织中Bcl-2表达降低,Bax表达增加(P＜0.01,P＜0.05).各给药组EGF mRNA,PDGF mRNA表达水平降低(P＜0.01,P＜0.05).结论:平喘宁可降低哮喘大鼠Bcl-2蛋白的表达,升高Bax蛋白的表达;抑制EGF mRNA,PDGF mRNA表达,从而抑制细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通路活化,减轻炎性反应,改善肺功能,抑制气道平滑肌增生,延缓气道重塑而治疗哮喘.
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扶正抗癌方诱导H1650细胞凋亡的分子机制
目的:观察扶正抗癌方对H1650细胞凋亡的影响,并探讨其诱导H1650细胞凋亡的分子机制.方法:以人肺腺癌细胞株H1650细胞为研究对象,用0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0g·L-1扶正抗癌方处理H1650细胞24,48,72 h,另设空白组,四氮唑蓝盐化合物(MTS)法检测细胞增殖;用0.5,1.0,1.5 g·L-1扶正抗癌方处理H1650细胞24 h,另设空白组,Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡;用0.5,1.0,2.0 g·L-1扶正抗癌方处理H1650细胞24 h,另设空白组,半胱氨酸蛋白酶-3/7(Caspase-3/7)活力检测试剂盒检测Caspase-3/7活力;蛋白免疫印迹法检测扶正抗癌方对proCasapse-3,聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达.结果:与空白组比较,扶正抗癌方能明显抑制H1650细胞的增殖(P＜0.05),且呈浓度和时间依赖性.与空白组比较,扶正抗癌方明显诱导H1650细胞的早期凋亡,增强Caspase-3/7的活力(P＜0.05),且呈浓度依赖性.与空白组比较,扶正抗癌方明显下调proCasapse-3和PARP的表达(P＜0.05),呈浓度依赖性,明显上调Bax的表达(P＜0.05),且呈时间依赖性.结论:扶正抗癌方可通过激活Caspase-3和Bax诱导H1650细胞的凋亡.
关键词： 扶正抗癌方 细胞凋亡 半胱氨酸蛋白酶-3/7 Bcl-2相关X蛋白 -
山茱萸提取物抗肿瘤作用及机制探讨
目的:研究山茱萸提取物的抗肿瘤作用及其作用机制.方法:取生长良好接种10 ～ 14 d的Lewis肺癌C57BL小鼠,制备Lewis肺癌细胞,通过噻唑蓝(MTT)法检测山茱萸提取物对癌细胞的抑制情况,流式细胞仪检测山茱萸提取物对细胞周期和细胞凋亡的影响;激光共聚焦显微镜检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)及p53蛋白表达;用健康C57BL小鼠腋下接种Lewis肺癌细胞悬液,接种成功后按山茱萸提取物100,200,400 mg·kg-1剂量ig给药2周,检测小鼠体内瘤的质量、肺转移灶数;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定小鼠血清中癌胚抗原的含量.结果:与空白组比较,山茱萸提取物可明显抑制肿瘤细胞的增殖(P＜0.05),山茱萸提取物对Lewis肺癌细胞处理48 h后,细胞周期阻滞在G0/G1期(P＜0.05,P＜0.01);与空白组比较,山茱萸提取物400 mg·kg-1组Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax及p53蛋白表达显著升高(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,山茱萸提取物400 mg·kg-1组小鼠体内瘤的质量、肺转移灶数均显著降低,小鼠血清中癌胚抗原含量明显降低(P＜0.05).结论:山茱萸提取物在体内外对Lewis肺癌细胞均有抑制作用,其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡和干扰细胞周期分布有关.
关键词： 山茱萸 Lewis肺癌 细胞周期 B细胞淋巴瘤/白血病-2 Bcl-2相关X蛋白 P53 癌胚抗原 -
环磷酰胺联合柿叶乙酸乙酯部位对H22小鼠瘤组织抗氧化能力及Bcl-2,Bax蛋白表达的影响
目的:通过研究环磷酰胺(CTX)联合柿叶乙酸乙酯部位(PE)对H22荷瘤小鼠瘤组织的抗氧化作用和对瘤组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白表达的影响,探讨两药联合应用的效果.方法:昆明种小鼠,取H22荷瘤鼠腹水接种于昆明种小鼠右前肢腋窝皮下,建立H22荷瘤小鼠模型,将荷瘤小鼠随机分为模型组,CTX组(0.1 g·kg-1),CTX联合PE高、中、低剂量组(2,1,0.5 g·kg-1),连续ig给药10 d,处死小鼠后计算抑瘤率,采用金氏q值法判断两者合用的效果,检测瘤组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力,丙二醛(MDA)含量,采用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2和Bax蛋白表达情况.结果:与模型组比较,各给药组抑瘤率明显升高,SOD水平和Bax蛋白表达均明显升高,MDA水平和Bcl-2蛋白表达明显降低(P ＜0.05,P＜0.01);CTX联合PE各剂量组的抑瘤率均高于CTX组,0.85 ＜q ＜1.15,两药合用作用相加;与CTX组比较,联合用药各剂量组SOD水平和Bax蛋白表达均升高,MDA水平,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax均降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论:CTX联合PE能使抑瘤作用相加,其机制可能与两药合用能明显增强H22小鼠机体抗氧化能力,下调Bcl-2蛋白及上调Bax蛋白的表达有关.
关键词： 柿叶 乙酸乙酯部位 H22荷瘤小鼠 抗氧化 B细胞淋巴瘤/白血病-2 Bcl-2相关X蛋白 -
青蒿琥酯对硼替佐米耐药骨髓瘤细胞株的耐药逆转作用及机制
目的:探讨青蒿琥酯对硼替佐米耐药骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞株的增殖抑制作用,并探讨其逆转骨髓瘤细胞耐药的作用机制.方法:采用硼替佐米浓度梯度递增法,以人MM细胞株NCI-H929为亲本,建立硼替佐米耐药的NCI-H929细胞株NCI-H929BR.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测青蒿琥酯对NCI-H929BR的增殖抑制及对硼替佐米的耐药逆转作用;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测核转录因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)蛋白,磷酸化核转录因子-κB p65(phospho-nuclear factor-κB p65,NF-κB p-p65)蛋白,P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp),B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)蛋白以及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达变化.结果:采用浓度梯度递增法成功建立了硼替佐米耐药的NCI-H929细胞株NCI-H929BR,其耐药倍数为20.2倍.青蒿琥酯对NCI-H929BR有明显的增殖抑制作用,抑制效应呈浓度依赖性;硼替佐米(50 nmol·L-1)单药对NCI-H929BR无明显增殖抑制作用,青蒿琥酯(12.5 mg·L-1)单药的抑制率为(23.53 ±2.21)％ (P ＜0.05),两药联合的抑制率为(60.71±3.43)％(P＜0.01);青蒿琥酯处理后,NCI-H929BR的凋亡率上升,NF-κB p65,NF-κB p-p65,P-gp,Bcl-2表达下降,Bax表达上升,呈浓度依赖性.结论:青蒿琥酯可抑制NCI-H929BR的增殖,促进细胞凋亡,逆转其对硼替佐米的耐药性,下调NF-κB p65,p-p65,P-gp以及Bcl-2的表达,上调Bax的表达可能为其逆转肿瘤细胞耐药的作用机制.
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蓝布正对大鼠梗死灶周围大脑皮质神经元凋亡和蛋白表达的影响
目的:观察蓝布正对局灶脑缺血大鼠梗死灶周围大脑皮质神经元凋亡及蛋白表达的影响,探讨其促脑卒中后神经功能恢复作用及机制.方法:72只SD大鼠采用线栓法建立脑缺血损伤模型(pMCAO),随机分成假手术组,模型组,蓝布正高、中、低剂量组(7.00,3.50,1.75 g·kg-1),银杏叶片组(0.007 g·kg-1),连续培给药3d.进行神经功能评分,四氮唑红(TTC)染色观察大鼠的脑梗死范围,苏木素-伊红(HE)染色观察梗死灶周围大脑皮质的病理形态学改变,原位细胞凋亡检测(TUNEL)梗死灶周围大脑皮质神经元凋亡,免疫组化检测梗死灶周围大脑皮质中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达的情况.结果:模型组一侧大脑中动脉永久性栓塞3d大鼠神经功能评分增加,脑梗死范围增多,梗死灶周围大脑皮质部分神经元变性,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白水平升高,与假手术组比较,差异具有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,蓝布正高、中、低剂量组均能不同程度减少神经功能评分,缩小脑梗死范围,改善梗死灶周围大脑皮质的病理形态学改变;抑制梗死灶周围大脑皮质神经元凋亡,促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制促凋亡蛋白Bax表达(P＜0.05).结论:蓝布正对大鼠脑缺血性损伤具有一定的保护作用,机制可能与其促进梗死灶周围大脑皮质Bcl-2水平增加,抑制Bax活性,提高脑组织抗缺血损伤的能力和抑制神经细胞凋亡有关.
关键词： 蓝布正 缺血性脑卒中 细胞凋亡 B细胞淋巴瘤/白血病-2 Bcl-2相关X蛋白 -
山精胶囊对心肌缺血大鼠NF-κB信号通路调控机制探讨
目的:探讨山精胶囊对心肌缺血大鼠能量代谢、氧自由基及细胞凋亡相关基因的作用及其机制.方法:选取Wista大鼠采用冠状动脉结扎法,建立慢性心肌缺血模型.将筛选出来的大鼠随机分为山精胶囊低、中、高剂量组(283.5,850.5,1 701.0 mg·kg-1)和阳性药组(心安胶囊324.0 mg·kg-1),假手术组和模型组灌胃给予同等剂量的0.9％的氯化钠注射液,给药10 d.紫外可见分光光度计检测血清及组织中乳酸(LD),游离脂肪酸(NEFA),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),一氧化氮(NO)及三磷酸腺苷酶(ATP)水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌组织中核转录因子-κB(NF-κB),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组大鼠LD,NEFA,MDA明显升高(P＜0.05),NO,Na+-K+-ATP,Ca2+-ATP酶,SOD,GSH-Px明显降低(P＜0.05),心肌NF-κB,Caspase-3,Bax mRNA及蛋白表达明显上调(P＜0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调(P＜0.05);与模型组比较,山精胶囊能显著降低LD,NEFA,MDA(P ＜0.05),NO,Na+-K+-ATP,Ca2+-ATP酶,SOD,GSH-Px显著升高(P＜0.05),明显下调NF-κB,Caspase-3,Bax mRNA及蛋白表达(P＜0.05),明显上调Bcl-2的mRNA及蛋白表达(P＜0.05).结论:山精胶囊可能通过调控NF-κB信号通路,提高心肌缺血大鼠清除氧自由基能力,改善心肌细胞能量代谢,调节凋亡相关蛋白和基因的表达,从而抑制了心肌细胞凋亡,减少缺血缺氧对心肌细胞的病理损害,起到保护心肌的作用.
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复方半枝莲抑制人结肠癌COLO205细胞增殖
目的:探讨复方半枝莲对人结肠癌细胞COLO205体内外生长的抑制作用及机制.方法:体外培养COLO205细胞,分为空白组,顺铂(0.15 g·L-1)组,复方半枝莲高、中、低剂量(0.60,0.30,0.15 g·L-1)组.利用噻唑蓝(MTT)法检测复方半枝莲对COLO205细胞增殖抑制率的影响.采用免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞内凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),细胞凋亡调控因子(PUMA)的表达情况.选用SPF级裸鼠,于背部接种结肠癌COLO205细胞,待瘤体长到肉眼可见时,测量瘤体大小,根据瘤体大小区间随机分为复方半枝莲高、低浓度组,紫杉醇组和空白组,应用结肠癌移植瘤裸鼠模型体内实验检测复方半枝莲对COLO205细胞体内生长的影响.结果:体外细胞实验表明,经复方半枝莲作用后的人结肠癌细胞COLO205细胞出现了变形,并有细胞膜破损,细胞数逐渐减少,脱落而死亡的现象.48 h时复方半枝莲对COLO205细胞的抑制作用强.其高、中、低剂量组抑制率分别为68.46％,63.11％,54.91％;且经复方半枝莲干预,COLO205细胞内的Bax,PUMA表达上调,Bcl-2表达下调;体内移植瘤实验显示,与空白组肿瘤体积比较,给药组的肿瘤体积明显减小.结论:复方半枝莲在体外内对人结肠癌细胞COLO205的生长均具有抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关.
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通络化痰胶囊对脑缺血损伤大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2,Bax的影响
目的:探讨通络化痰胶囊对脑缺血损伤大鼠神经细胞凋亡的影响和机制.方法:98只SD大鼠通过永久性大脑中动脉闭塞(pMCAO)制备脑缺血损伤模型,待大鼠清醒后,根据Longa评分(≥2分)随机分为7组,分别为正常对照组、假手术组、模型组、尼莫地平组、通络化痰高、中、低剂量组.于术后第1天开始分别给予蒸馏水(正常对照组、假手术组、模型组)、尼莫地平(32.4 mg·kg-1)和通络化痰胶囊高、中、低剂量组(648,324,162 mg·kg-1)灌胃治疗,并于术后第1,2,3,5,7天行Narrow-Alley Corner Test检测脑缺血损伤大鼠神经功能的改变,术后第8天行4％多聚甲醛(pH 7.0)灌注固定后断头取脑,观察脑组织病理学的改变,利用TUNEL法检测缺血半暗带神经细胞凋亡水平的变化,利用免疫组化技术测定缺血半暗带Bcl-2相关x蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达水平的改变.结果:模型组大鼠Narrow-Alley Corner Test得分较正常对照组和假手术组显著增加(P＜0.01),尼莫地平组和通络化痰胶囊组得分较模型组降低(P＜0.01,P＜0.05).缺血后大鼠脑组织损伤明显,尼莫地平组和通络化痰胶囊组的损伤减轻.模型组较正常对照组和假手术组神经细胞凋亡增多、缺血半暗带Bax和Bcl-2表达增加(P＜0.01).尼莫地平组和通络化痰胶囊组较模型组神经细胞凋亡减轻、缺血半暗带Bax表达减少,Bcl-2表达增强(P＜0.01).结论:通络化痰胶囊可促进脑缺血损伤大鼠损伤后神经功能障碍的恢复,减轻神经元病理损害,其机制可能与其促进缺血半暗带Bcl-2表达,抑制Bax表达,从而减少细胞凋亡水平有关.
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温下方含药血清诱导A549/DDP细胞凋亡及对BCl-2,Bax,p53蛋白表达的影响
目的:研究温下方含药血清诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡及对Bcl-2,Bax,p53蛋白表达的影响.方法:制备温下方含药血清,高效液相色谱法(HPLC)定性检测含药血清中人参皂苷Rb1、大黄素和乌头碱.A549/DDP细胞分为DDP干预组,含药血清+DDP干预组,正常血清+DDP干预组.孵育24h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜检测Bcl-2,Bax及p53蛋白表达.结果:HPLC结果显示含药血清中含有人参皂苷Rb、大黄素及乌头碱.含药血清作用后,与DDP干预组比较,含药血清+DDP干预组细胞凋亡率增高至(21.82±3.27)%(P＜0.05);细胞内Bcl-2蛋白表达降低至2.81±0.02(P＜0.05);Bax蛋白表达增高至2.90±0.08(P＜0.05);p53蛋白表达增高至3.58±0.09(P＜0.05).结论:温下方含药血清明显诱导A549/DDP细胞凋亡,显著降低Bcl-2蛋白表达,提高Bax,p53蛋白表达,可能从诱导耐药细胞凋亡角度逆转耐药.
关键词： 温下方 含药血清 人肺腺癌耐药细胞株 凋亡 B细胞淋巴瘤/白血病-2 Bcl-2相关X蛋白 P53 -
健脾消癌方及其拆方对肠癌模型裸鼠体质量、瘤体、转移率及Caspase-3,Bcl-xL,Bax蛋白表达的影响
目的:观察健脾消癌方及其拆方对肠癌模型裸鼠体质量、瘤体、转移率及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-xL(B-cell lymphoma/leukemia-xL,Bcl-xL)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达的影响.方法:建立裸鼠肠癌原位瘤模型,分为模型组,健脾益气组(15 g·kg-1),化瘀解毒组(15 g·kg-1),健脾消癌方组(全方组,15 g·kg-1),5-氟尿嘧啶组(5-Fu,20 mg·kg-1),共5组.分别予以相应药物干预4周,观察裸鼠体重、瘤体抑制率、转移率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Caspase-3,Bcl-xL,Bax蛋白表达.结果:健脾益气组、全方组体重下降低于模型组(P＜0.05),化瘀解毒组体重下降高于模型组(P＜0.05);健脾益气组对瘤体的抑制与模型组比较无统计学差异,与空白组比较,化瘀解毒组、全方组对瘤体均有较好抑制作用(P＜0.05);各组均出现不同程度地转移,其中模型组、健脾益气组总体转移率达90％,化瘀解毒组、全方组转移率分别为70％,60％,低于模型组(P＜0.05);与模型组比较,化瘀解毒组及全方组能够上调Bax蛋白表达,下调Caspase-3,Bcl-xL蛋白表达(P＜0.01).结论:健脾消癌方中健脾益气组优势在于稳定体重,化瘀解毒组优势在于抑制肿瘤,抑制转移;全方组能够稳定体质量,抑制肿瘤,抑制转移,全方配伍疗效优,其抗肿瘤机制可能是上调凋亡相关蛋白Bax及下调Caspase-3,Bcl-xL,诱导肿瘤细胞凋亡.
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瑶族药铜钻总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的:探讨瑶族药铜钻(定心藤,Mappianthus iodoies)总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,为瑶族药铜钻在心血管领域的临床用药研究奠定基础.方法:将72只雄性SD大鼠随机分为6个组,分别为假手术组(假手术组)、模型组(模型组)、阳性药组(复方丹参滴丸)、定心藤总黄酮低、中、高剂量组(60,120,240 mg·kg-1)组.6组大鼠分别ig相应药物10 d,ig后对大鼠造模,即缺血30 min,再灌注24 h,然后对造模成功的大鼠取血和心脏,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理形态改变;股动脉取血离心取上清,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清心肌酶谱肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bel-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清中CK,LDH水平明显增加,大鼠Bel-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高(P＜0.05),心肌组织病理形态学损伤交明显;与模型组比较,定心藤总黄酮低、中、高剂量组大鼠血清中CK,LDH水平明显降低,能明显降低Bax蛋白表达、升高Bcl-2蛋白表达(P＜0.05).定心藤总黄酮可显著改善大鼠心肌组织病理形态学损伤.结论:定心藤总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与它对细胞凋亡的抑制有关.
关键词： 定心藤 总黄酮 心肌缺血再灌注 B细胞淋巴瘤/白血病-2 Bcl-2相关X蛋白
