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补肾健脾活血方对骨质疏松大鼠的治疗作用
目的:探讨补肾健脾活血方对卵巢切除所致大鼠骨质疏松症的治疗作用机制.方法:将60只雌性Wistar大鼠随机分为4组,即空白对照组、假手术组、卵巢切除组、补肾健脾活血方组,每组15只.术后灌胃给予补肾健脾活血方药液,共给药3个月.采用骨组织形态计量学的方法对大鼠胫骨不脱钙骨切片进行形态计量;结果:补肾健脾活血方组大鼠胫骨TBV％比卵巢切除组显著增高,TRS％、TFS％、MAR、OSW和mAR均显著降低.结论:运用补肾健脾活血方治疗卵巢切除所致的骨质疏松疗效显著,说明补肾健脾活血方具有治疗骨质疏松症的机理.
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补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨组织TNF-α表达的影响
目的观察复方中药补肾健脾活血方对绝经后骨质疏松症大鼠模型骨组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响.方法将84只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、中药对照组、西药对照组、补肾健脾活血方大、小剂量组共7组,采用卵巢切除的方法建造绝经后骨质疏松症动物模型,灌药90 d后取腰椎骨用免疫组化的方法检测TNF-α的表达.结果补肾健脾活血方能明显减少TNF-α表达的阳性细胞数,其作用强于单纯补肾中药和西药治疗,并且与剂量呈正相关.结论补肾健脾活血方通过影响细胞因子TNF-α的表达来减少骨吸收.
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补肾健脾活血方对去卵巢大鼠BMP2/Smad信号通路的影响
目的:研究补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨形态发生蛋白2(BMP2)/Smad信号通路的影响.方法:72只6月龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组(24只),手术组(48只),双侧卵巢切除法造模,术后3个月两组各随机选取12只检测骨密度验证造模成功.手术组剩余的36只大鼠随机分为双侧卵巢切除模型组(OVX),补肾健脾活血方组(BSJPHX,给药剂量2.979 g·kg-1),阿仑膦酸钠维D3片(Ⅱ)组(ALN,给药剂量1.02 mg· kg-),假手术组,OVX组给与等体积生理盐水灌胃.12周后处死各组大鼠,双能X射线法检测大鼠全身骨密度,生物力学试验进行胫骨三点弯曲试验,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BMP2,Smad1,Runt相关转录因子2(Runx2),骨保护素(OPG)基因的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BMP2,p-Smad1,Runx2,OPG蛋白的表达.结果:造模3个月后,与假手术组比较,OVX组大鼠骨密度明显降低,大载荷及刚度均降低,BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);给药3个月后,与OVX组比较,BSJPHX组,ALN组骨密度均明显增高,大载荷及刚度均增加,能显著提高BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平(P＜0.05).结论:补肾健脾活血方既能通过调控BMP2/Smad通路的信号转导,又能上调OPG的表达,这可能是补肾健脾活血方防治绝经后骨质疏松症的机制之一.
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补肾健脾活血方对大鼠骨质疏松骨折愈合的作用及其机理探讨
随着世界人口的老龄化,骨质疏松骨折已成为临床的常见病、多发病,合并严重并发症,严重危害人们的生存质量.中药治疗骨质疏松及骨折历史悠久,疗效确切,是目前治疗骨质疏松及骨折的主要手段之一.
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Bcl2促进UMR-106细胞BMP-2、OPG表达及补肾健脾活血方对其影响
目的 基于构建Bcl2沉默和过表达腺病毒观察Bcl2对成骨细胞骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)蛋白的调节作用及补肾健脾活血方对其影响.方法 将培养的UMR-106细胞分为空载腺病毒组(沉默Bcl2空载腺病毒NC-bcl2,过表达Bcl2空载腺病毒WT-bcl2)、Bcl2腺病毒组(沉默Bcl2腺病毒sh-bcl2,过表达Bcl2腺病毒Ad-bcl2),空载腺病毒+空白血清组(NC-bcl2,WT-bcl2)、空载腺病毒+补肾健脾活血方含药血清组(NC-bcl2+ME,WT-bcl2+ ME)、腺病毒+空白血清组(sh-bcl2,Ad-bcl2)、腺病毒+补肾健脾活血方血清组(sh-bcl2+ ME,Ad-bcl2+ ME),用RT-qPCR检测Bcl2、OPG mRNA的变化、应用免疫印迹(Western Blot)检测Bcl2、OPG、BMP-2的变化.结果 ①荧光倒置显微镜观察包装腺病毒转染UMR-106细胞;②在正常培养基中,与NC-bcl2比较,sh-bcl2可以降低Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均＜0.05),与WT-bcl2比较,Ad-bcl2可以提高Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均＜0.05);③与NC-bcl2比较,RT-qPCR显示sh-bcl2可以降低Bcl2 mRNA的表达,但OPG mRNA无统计学意义;④在大鼠血清干预中,与空载腺病毒比较,补肾健脾活血方含药血清均可以增加BMP-2、OPG蛋白表达(P均＜0.05);在sh-bcl2干预的细胞中,补肾健脾活血方含药血清提高BMP-2、OPG蛋白的表达(P均＜0.05);在Ad-bcl2干预的细胞中,中药干预后,BMP-2、OPG未见明显变化.结论 Bcl2可以影响BMP-2、OPG蛋白的表达,补肾健脾活血方可能通过作用于Bcl2影响成骨细胞成骨相关蛋白的表达.
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补肾健脾活血方干预过表达DKK1骨细胞对细胞活性及BMP2的影响
目的 用补肾健脾活血方干预过表达的DKK1腺病毒转染的成骨细胞,通过观察细胞的活性及BMP2的表达,研究补肾健脾活血方治疗骨质疏松的分子生物学机制.方法 将培养细胞分成NC对照组,Ad-DKK1组两组.NC对照组由空载腺病毒转染;Ad-DKK-1组由包装过表达的DKK1腺病毒转染.每组分别用含药血清和空白血清干预.采用CKK-8检测细胞增殖,蛋白印记法检测BMP2的表达.结果 各组细胞活性变化;空白血清和含药血清干预均能提高细胞活性.与空白血清分别干预的两组比较,含药血清分别干预后的两组,在24 h,48 h,72 h的细胞活性的增加倍数都较多;在采用蛋白印记法检测后,BMP2在含药血清分别干预的两组的相对表达量较空白血清分别干预的两组的相对表达量高(P ＜0.01,P＜0.01),在NC对照组中含药血清干预与空白血清干预无明显差异.结论 补肾健脾活血方含药血清可以提高细胞活性,提高BMP2的相对表达量,有利于成骨细胞的矿化,尤其在过表达DKK1干预后.补肾健脾活血方可能通过调控DKK1进而影响成骨细胞的代谢.
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补肾健脾活血方干预沉默DKK1、Sost骨细胞对细胞活性和相关蛋白的影响研究
目的 用补肾健脾活血方干预沉默Dickkopf(DKK)1、骨硬化蛋白Sclerostin (Sost)转染的成骨细胞,观察其对细胞活性和相关蛋白的影响.方法 将培养好的细胞分为空白对照组(NC组)、沉默DKK1(Ad-shDKK1)组和沉默Sost(Ad-shSost)组,空载腺病毒转染NC组,沉默DKK1和Sost重组腺病毒转染其余两组,再分别给予空白血清和含药血清干预,观察细胞增殖、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性以及骨相关蛋白变化情况.结果 ①三组含药血清干预后的细胞活性强于空白血清干预后的细胞活性.与空白血清干预的三组比较,含药血清干预后的三组细胞活性在24、48、72 h均增加,尤其在72 h时含药血清对Ad-shDKK1组的细胞活性作用更强,与同组空白血清比较,差异有统计学意义(P＜0.05);②三组含药血清干预与空白血清干预比较ALP活性明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).含药血清干预后,与NC组比较,其余两组ALP活性显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01),Ad-shDKK1组和Ad-shSost组比较,ALP活性升高不明显;③与空白血清干预比较,含药血清干预后三组的结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)均升高,与NC组比较,Ad-shDKK1组OPG、OPN差异有统计学意义(P＜0.05和P＜0.01),Ad-shSost组CTGF、OPG、OPN差异有统计学意义(P＜0.05).结论 补肾健脾活血方含药血清可显著促进沉默DKK1、Sost干预后细胞增殖和提高ALP活性,上调沉默DKK1、Sost腺病毒转染细胞CTGF、OPG、OPN的表达.
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补肾健脾活血方含药血清对UMR106细胞成骨分化和骨形成相关蛋白的影响
目的 观察补肾健脾活血方含药血清对UMR106细胞成骨分化和骨形成相关蛋白的影响.方法 将实验动物随机分成空白血清组、低剂量血清组、中剂量血清组、高剂量血清组、阳性对照组,分别予以灌胃制备含药血清,并对其细胞进行加药培养,测定UMR106细胞培养72 h后的检测增殖、ALP活性以及各组细胞OPN、RUNX2、BMP-2蛋白表达情况.结果 与空白血清组比较,低、中、高剂量血清组和阳性对照组加药干预72 h后,细胞吸光度值均较低(P＜0.05),而细胞ALP活性均较高(P＜0.05),且随着中药血清水平升高,ALP 活性提高;与空白血清组相比,经中药含药血清培养后 UMR106 细胞OPN、RUNX2、BMP-2均显著上调(P＜0.05),且呈浓度梯度性变化,各中药含药血清组以高剂量组表达为明显.结论 表明补肾健脾活血方(骨康方)含药血清有促进UMR 106细胞成骨分化和调节骨形成相关蛋白;且随着补肾健脾活血方(骨康方)水平的增高,成骨分化更明显.
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补肾健脾活血方剂配合常规西医在IgA肾病中治疗效果及安全性
目的:探讨分析补肾健脾活血方剂配合常规西医在IgA肾病中治疗效果及安全性.方法:选取2015年5月1日 —2017年5月31日间我院收治56例IgA肾病患者为观察对象,随机分为中西医组(28例)和西医组(28例),西医组患者予以常规西医治疗,中西医组患者在西医组基础上,增加补肾健脾活血方剂配合治疗,两组患者均治疗4个月.结果:中西医组患者的治疗总有效率为92.9％,高于西医组的71.4％,差异有统计学意义(P<0.05).两组治疗前的24h尿蛋白定量与中医症状积分比较,差异无统计学意义(P>0.05);中西医组患者治疗结束后的24h尿蛋白定量(1.85±0.58)g/24h与中医症状积分(6.21±2.13)分皆低于对照组的(2.22±0.51)g/24h和(7.47±2.21)分,差异有统计学意义(P<0.05).结论:补肾健脾活血方剂配合常规西医治疗可以有效提高IgA肾病患者的治疗效果,减低尿蛋白量,改善中医症状,安全性较高,值得在临床上予以推广应用.
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补肾健脾活血方、金水宝胶囊、中药灌肠联合西药治疗慢性肾功能衰竭对照观察
[目的]观察补肾健脾活血方、金水宝、中药灌肠联合西药治疗慢性肾功能衰竭疗效.[方法]使用对照研究方法,将100例慢性肾功能衰竭随机分为两组,均给予优质低蛋白,低磷,低盐饮食,降低血压,控制血糖,纠正水、电解质紊乱,纠正酸中毒,改善贫血,保护肾功能等常规对症治疗.对照组50例爱西特口服(5片/次,3次/d).治疗组50例补肾健脾活血方水煎口服(150 mL/次,2次/d,1剂/d)；金水宝胶囊(0.33g/粒,0.99g/次,3次/d)；中药灌肠(大黄30g,土茯苓20g,煎水150 mL,待温度适宜,保留灌肠30-60 min,1次/d).观察临床疗效、肾功能及血液生化指标.均连续治疗4周为1疗程(28d).治疗1疗程(28d)判定疗效.[结果]治疗组治疗组临床疗效优于对照组(P＜0.05).血肌酐、尿素氮两组均明显下降,治疗组优于对照组,肌酐清除率(Ccr)两组均变化不明显；血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、血浆白蛋白(Alb)两组均明显增加,治疗组优于对照组比较,[结论]补肾健脾活血方、金水宝胶囊、中药灌肠联合西药治疗可延缓慢性肾功能衰竭的进展.
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补肾健脾活血方含药血清提高过表达Sost转染成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性
背景:有研究发现中药可以通过Wnt/β-catenin 信号通路影响成骨细胞,而Sost是Wnt信号通路的抑制因子和骨形成中的抑制蛋白,也是一种调控骨分化的拮抗因子,可调控成骨细胞的分化和增殖.补肾健脾活血方是广州中医药大学附属骨伤科医院临床防治骨质疏松症的经验方,对骨形成有促进作用,治疗骨质疏松症疗效显著.目的:应用补肾健脾活血方含药血清干预过表达骨硬化蛋白 Sclerostin(Sost)重组腺病毒转染的成骨细胞,观察其对细胞增殖、碱性磷酸酶活性和相关蛋白的影响.方法:将培养好的成骨细胞分为空白对照组、过表达Sost组(Ad-Sost组)2组,空白对照组给予空载腺病毒转染,Ad-Sost组予过表达Sost重组腺病毒转染,两组分别给予空白血清和含药血清干预,采用CCK-8检测细胞增殖、碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性,Western Blot检测骨调节蛋白表达情况.结果与结论:①与空白血清干预比较,两组含药血清在24,48,72 h均可以提高细胞活性(P均＜ 0.01);②与空白血清干预比较,两组含药血清均可以提高碱性磷酸酶活性(P ＜ 0.01);③与空白血清干预比较,空白对照组含药血清可以降低低密度脂蛋白受体相关蛋白5、骨保护蛋白的表达(P均＜ 0.01),对骨桥蛋白、肿瘤坏死因子α蛋白的表达无明显影响,Ad-Sost组含药血清也可以降低低密度脂蛋白受体相关蛋白5、骨保护蛋白、骨桥蛋白蛋白的表达(P均＜ 0.01),提高肿瘤坏死因子α蛋白的表达(P ＜ 0.01);④结果说明,补肾健脾活血方含药血清可以提高过表达Sost转染成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性,影响低密度脂蛋白受体相关蛋白5、骨保护蛋白、骨桥蛋白和肿瘤坏死因子α蛋白的表达.
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补肾健脾活血方对高糖环境下MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化影响研究
目的:探讨补肾健脾活血方对高糖环境下MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化的影响.方法:以MC3T3-E1细胞为研究对象,制备补肾健脾活血方含药血清,实验分为空白对照组、高糖组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、二甲双胍组.采用CCK-8法检测补肾健脾活血方对高糖环境下MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响,通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定和骨钙素(OC)含量测定来观察补肾健脾活血方对高糖下MC3T3-E1细胞分化能力的影响.结果:与高糖组相比,中药组一定程度上能提高高糖(25 mmol/L)条件下MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力,以中药中剂量组效果更为显著(P＜0.05或P＜0.01).高糖条件下的中药高、中剂量组更有利于成骨细胞的增殖和分化,与其他组相比P＜0.05;且中药高、中剂量组的骨钙素含量较其他组显著增高,P＜0.05.结论:补肾健脾活血方能够促进高糖环境下MC3T3-E1成骨细胞增殖及分化功能.
关键词： 高糖培养 MC3T3-E1细胞 补肾健脾活血方 增殖功能 分化功能 -
自拟补肾健脾活血方治疗老年性骨质疏松症临床观察
目的:探讨自拟补肾健脾活血方对老年性骨质疏松症治疗的早期临床疗效.方法:将符合纳入标准的60例老年性骨质疏松症患者作为研究对象,依照就诊挂号单双号随机分为对照组和观察组,每组30例,对照组予以维D钙咀嚼片、骨化三醇胶丸治疗,观察组予以口服中药汤剂补肾健脾活血方,4周为1个疗程,观察记录2组患者治疗前及治疗3个疗程后腰椎、股骨颈骨密度值及腰背疼痛症状的临床疗效.结果:治疗前2组腰椎及股骨颈骨密度对比差异不显著,治疗后,观察组患者的骨密度较对照组明显升高,组间对比差异性显著.观察组治疗后有效率96.7％,对照组治疗后有效率80％,观察组较对照组腰背疼痛改善临床效果较好,对比差异性显著.结论:中药汤剂自拟补肾健脾活血方是治疗骨质疏松症的一种有效、安全可靠的中药组方,而且能够显著减轻患者的疼痛、提高患者的生活质量.
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补肾健脾活血法治疗慢性乙型肝炎患者临床研究
目的 观察补肾健脾活血法治疗慢性乙型肝炎的临床疗效.方法 采用补肾健脾活血法治疗50例慢性乙型肝炎患者,疗程6个月.结果 治疗后,患者血清HA、LN、PCIII和IV-C均有下降(P<0.01),脾脏厚度和门静脉直径也缩小(P<0.05);肝功能指标均有明显的改善(P<0.01).结论 补肾健脾活血方对慢性乙型肝炎有较好的疗效.
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补肾健脾活血方治疗绝经后骨质疏松症临床研究
目的:探讨补肾健脾活血方治疗绝经后骨质疏松症的临床疗效.方法:160名绝经后骨质疏松症患者随机分为治疗组与对照组,分别给予口服补肾健脾活血方和阿仑膦酸钠片,观察患者临床症状改善情况以及腰椎骨密度和血IL-6、BGP、ALP,尿Ca/Cr、Hop/Cr的改善情况.结果:补肾健脾活血方较阿仑膦酸钠片能明显提高患者血ALP、BGP、E2,降低IL-6、尿Hop/Cr及Ca/Cr,P《0.05.结论:补肾健脾活血方具有促进骨形成、降低骨吸收的功能,该方对绝经后骨质疏松症有较好临床治疗作用,毒性低,不良反应小.
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补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖的影响
目的:观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖的影响.方法:制备补肾健脾活血方中药含药血清,取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞,用MTT检测成骨细胞增殖率.结果:补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率形成,且与含药血清浓度呈正相关.结论:补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖,并能促进成骨细胞对骨机质的功能.
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补肾健脾活血方对卵巢大鼠血清IGF-1的影响
目的:观察补肾健脾活血方对实验性骨质疏松症大鼠血清胰岛素生长因子1(IGF-1)的影响.方法:将84只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、中药对照组、西药对照组、补肾健脾活血方大、小剂量组共7组,采用卵巢切除的方法建造绝经骨质疏松症动物模型,灌药90天后用放射免疫法检则大鼠血清IGF-1含量.结果:补肾健脾活血方能明显增加血清IGF-1含量,其作用强于单纯补肾中药和西药,且与剂量呈正相关.结论:补肾健脾活血方通过影响细胞因子IGF-1的含量来促进成骨细胞增殖分化和骨形成的功能,从而发挥治疗骨质疏松症的作用.
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补肾健脾活血方治疗原发性骨质疏松症临床观察
目的:观察补肾健脾活血方治疗原发性骨质疏松症的疗效.方法:76例随机分为两组,治疗组采用补肾健脾活血方,对照组采用中成药仙灵骨葆胶囊.结果:治疗组改善骨质密度、血清骨钙素,以及临床症候的疗效,明显优于对照组(P＜0.01).结论:补肾健脾活血方可提高骨密度,促进骨形成,抑制骨吸收,改善骨质疏松的临床症候.
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补肾健脾活血方对去卵巢大鼠血清白细胞介素-6的影响
目的:观察补肾健脾活血方对实验性骨质疏松症大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)的影响.方法:将84只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、中药对照组、西药对照组、补肾健脾活血方大、小剂量组共7组.采用卵巢切除的方法建造绝经后骨质疏松症动物模型,灌药90天后用酶联免疫吸附法检测大鼠血清IL-6含量.结果:补肾健脾活血方能明显降低血清IL-6含量,其作用强于单纯补肾中药和西药治疗,并且与剂量呈正相关.结论:补肾健脾活血方通过影响细胞因子IL-6的含量来抑制破骨细胞的骨吸收功能,从而发挥治疗骨质疏松症的作用.
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补肾健脾活血方对高糖环境下MC3T3-E1细胞的骨分化及凋亡的影响
目的 探讨补肾健脾活血方对高糖环境下MC3T3-E1细胞的成骨分化和凋亡的影响.方法 以MC3T3-E1细胞为研究对象,制备补肾健脾活血方含药血清,实验分为空白对照组、高糖组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、二甲双胍组.采用流式细胞术检测MC3T3-E1成骨细胞凋亡,蛋白质免疫印记技术(Western-blot)检测来观察成骨分化相关蛋白的表达.结果 与高糖组相比,中药组对高糖(25mmol/L)条件下MC3T3-E1细胞能够一定程度上抑制成骨细胞凋亡,以中药中剂量组效果更为显著(P＜0.01);高糖条件下的中药组能够促进成骨分化相关蛋白BMP2和Runx2的表达,以中药高剂量组效果较为显著(P＜0.01).结论 补肾健脾活血方能够促进高糖环境下MC3T3-E1成骨细胞分化和抑制凋亡的作用.
关键词： 高糖培养 MC3T3-E1细胞 补肾健脾活血方 成骨分化 细胞凋亡
