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人牙槽骨骨髓间充质干细胞成骨诱导分化
干细胞是一类具有自我更新与增殖分化能力的细胞,根据来源不同可以分为胚胎干细胞、造血干细胞、神经干细胞、间充质干细胞、上皮干细胞等.干细胞在理论上可以无限增殖分裂,而且特定的条件下可以定向分化.人牙槽骨骨髓干细胞是较为容易取得的骨髓干细胞,拔牙或种植牙时即可取得骨屑,进行体外培养,尤其是定向成骨分化方面的研究,取得了显著的成果.本文就人牙槽骨骨髓间充质干细胞成骨分化进展进行综述.
关键词： 人牙槽骨骨髓间充质干细胞 成骨分化 -
炎症环境下组蛋白去乙酰化对牙周膜干细胞影响的研究现状
牙周炎是口腔常见疾病,目前无有效根治办法,牙周组织中牙周膜干细胞(PDLSCs)具有较高的增值能力和多分化潜能,但是在炎性微环境下PDLSCs再生能力减弱,而组蛋组蛋白去乙酰化酶(HDACs)可以调控基因表达,维持细胞正常功能,所以,检测炎性微环境下PDLSCs中HDACs的表达和HDACs对PDLSCs免疫调节特性的影响,并利用组蛋白去乙酰化抑制剂(HDACIs),检测其在炎症微环境下骨形成能力、PDLSCs成骨分化的变化.
关键词： 牙周炎 牙周膜干细胞 组蛋组蛋白去乙酰化酶 组蛋白去乙酰化抑制剂 成骨分化 -
N-乙酰氨基葡萄糖转移酶调节O-GlcNAc修饰在牙髓干细胞成骨分化中的作用
糖尿病能抑制成骨细胞分化,是牙周炎引起牙槽骨吸收的常见因素.本研究发现高糖状态下N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(N-acetyl glucosamine transferase,OGT)表达增加,对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)进行O-GlcNAc修饰.所以我们提出在糖尿病发病过程中,OGT可通过催化DPSCs的O-GlcNAc修饰,影响成骨分化的靶基因Runx2表达,调节了DPSCs成骨发生的假说.为糖尿病引起牙槽骨缺失的靶向治疗提供了重要的临床意义.
关键词： N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 牙髓干细胞 糖尿病 成骨分化 -
补肾、健脾和补肾健脾3方对尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响
目的:观察补肾、健脾和补肾健脾3方对尾部悬吊模拟失重大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响.方法:大鼠随机分为正常组、模型组、补肾组、健脾组和补肾健脾组共5组.后4组大鼠头低位-30°尾部悬吊连续21天,补肾、健脾和补肾健脾组大鼠从实验第1天开始分别给予补肾、健脾和补肾健脾方灌胃,其余各组大鼠灌服等容积的生理盐水.实验第22天处死各组大鼠,全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),取第3代细胞进行成骨分化诱导实验,成骨分化诱导第4、7、10天采用p-NPP法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,成骨分化诱导第7、14、21天采用ELISA法检测细胞上清液中骨钙素(OC)含量,成骨分化诱导第21天茜素红染色法检测钙结节形成情况.结果:与正常组比较,模型组大鼠BMSCs经成骨诱导4、7、10天ALP活性均显著降低(P＜0.01),经成骨诱导7、14、21天细胞上清OC含量显著降低(P＜0.01),经成骨诱导21天后钙结节形成显著减少(P＜0.01);与模型组比较,补肾组和补肾健脾组大鼠BMSCs经成骨诱导4、7、10天ALP活性均明显升高(P＜0.05或P＜0.01),健脾组大鼠BMSCs经成骨诱导7、10天ALP活性均明显升高(P＜0.05),补肾、健脾和补肾健脾组大鼠BMSCs经成骨诱导7、14、21天细胞上清OC含量明显升高(P＜0.05或P＜0.01),经成骨诱导21天后钙结节形成显著增多(P＜0.01);与补肾组比较,健脾组大鼠BMSCs经成骨诱导7天ALP活性降低、经成骨诱导21天细胞上清OC含量明显降低(P＜0.05),而补肾健脾组明显升高(P＜0.05),经成骨诱导21天后补肾健脾组钙结节形成明显增多(P＜0.05).结论:补肾、健脾和补肾健脾3方具有促进尾部悬吊模拟失重大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的作用,以补肾健脾方作用为优.
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羟基红花黄色素A对激素诱导骨髓间充质干细胞成骨分化的影响
目的：观察羟基红花黄色素A（HSYA）对激素诱导兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）内成骨标志物碱性磷酸酶、Cbfαl及Ⅰ型胶原表达的影响，探讨其防治激素性股骨头缺血性坏死的作用机制。方法：健康成年新西兰大白兔15只，体重0．9～1．3 kg，腹腔注射麻醉后，无菌条件下作胫骨和髂前上棘骨髓腔穿刺抽取骨髓血，分离出BMSCs，体外培养并传代，取第3代生长状态良好的BMSCs随机分为空白组，模型组及羟基红花黄色素A低、中、高剂量组。模型组用大剂量地塞米松诱导BMSCs成脂分化，抑制其成骨分化；羟基红花黄色素A低、中、高剂量组加入地塞米松作用的同时给予羟基红花黄色素A干预；空白组无特殊处理。1周后检测各组细胞内成骨标志物碱性磷酸酶活性、Cbfαl及Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果：模型组兔BMSCs内碱性磷酸酶活性较空白组明显下降（P＜0．01），Cbfαl及Ⅰ型胶原mRNA的表达也明显降低（P＜0．01），而HSYA各组较模型组均有明显升高（P＜0．05或P＜0．01）。结论：羟基红花黄色素A治疗激素性股骨头缺血坏死的机制可能与对抗激素诱导下的BMSCs成骨分化减少有关。
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Hedgehog信号通路与骨质疏松症
Hedgehog信号通路是一条保守而重要的信号通路,涉及到多种细胞的增殖和分化活动.近年研究发现,Hedgehog信号通路可以通过上调Runx2和Osx等主要转录因子的表达促进间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向成骨细胞分化,并且抑制MSCs向脂肪细胞分化.Hedgehog信号通路还可以通过调节细胞周期蛋白促进成骨细胞增殖.本文综述总结了Hedgehog信号通路调节成骨细胞增殖分化的作用机制,认为Hedgehog信号通路通过促进成骨细胞增殖分化参与调节骨代谢,为骨质疏松症的治疗提供一种新思路.
关键词： Hedgehog信号通路 成骨分化 骨质疏松症 -
左归丸与右归丸对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响
目的:比较左归丸与右归丸促成骨分化的影响及作用机制.方法:无菌培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),分别制备左归丸和右归丸高、低剂量含药血清,分为对照组(CON组)、左归丸低剂量组(ZD组)、左归丸高剂量组(ZG组)、右归丸低剂量组(YD组)和右归丸高剂量组(YG组).采用CCK8、碱性磷酸酶(AKP)试剂盒、ALP染色检测各组细胞增殖、成骨活性和分化能力,RT-qPCR检测FNDC5、Runx2、Osterix、 BMP2、Tgif2和PPARγ mRNA表达,Western blot检测FNDC5、Runx2、BMP2蛋白表达.结果:CCK8显示各组细胞7d内增殖呈上升趋势;含药血清干预3d,ZG组AKP活性明显高于其余各组(P＜0.01);干预7d,ZD、ZG、YG组AKP活性明显高于CON组(P＜0.01),且ZG组AKP活性明显高于YD、YG组(P＜0.05,P＜0.01);ALP染色显示干预3、7d各含药血清组ALP染色阳性率均高于CON组,其中ZG组更为明显(P＜0.01).PT-qPCR显示,含药血清干预第3天ZG、YG组BMP2表达高于CON组(P＜0.05),第7天ZG组Runx2、Osterix显著高于CON组(P＜0.05,P＜0.01),各组Tgif2和ZG、YG组PPARγ表达显著低于CON组(P＜0.05,P＜0.01);Western blot显示,干预3d时ZG组FNDC5蛋白表达水平高于CON、YD和YG组(P＜0.05);各组BMP2、Runx2蛋白表达水平明显高于CON组(P＜0.05),ZG和YG组Runx2蛋白表达水平较ZD和YD组明显升高(P＜0.05);干预7d时,ZG组FNDC5蛋白表达水平明显高于CON、ZD、YD组(P＜0.05);各组BMP2、Runx2蛋白表达水平较CON组均明显升高(P＜0.05),ZG组BMP2、Runx2蛋白表达水平均高于YD和YG组(P＜0.05).结论:左归丸和右归丸均能一定程度促BMSCs成骨分化,其中左归丸在促进成骨活性及成骨分化能力略强于右归丸.二者促成骨分化的差异可能与其上调FNDC5、BMP2、Runx2表达程度相关.
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补肾中药血清联合骨形态发生蛋白-2对人脐血间充质干细胞成骨分化的影响
目的:探讨补肾中药血清联合骨形态发生蛋白-2(BMP-2)诱导人脐血间充质干细胞定向成骨分化的可行性.方法:取第3代人脐血间充质干细胞,随机分为4组,即对照组(单纯LG-DMEM全培)、补肾中药血清组、BMP-2组及补肾中药血清组联合BMP-2组(简称联合组).诱导后7、14、21d行碱性磷酸酶(ALP)染色,3、6、9、12d后检测ALP及骨钙素(BGP)表达,14d后Von Kossa染色测定矿化结节.结果:诱导后第14天ALP阳性表达为明显,以联合组及BMP-2组较为显著,且联合组优;诱导后第3、6、9、12天,联合组及BMP-2组的ALP活性与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),诱导第6天时,联合组与BMP-2组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);诱导后第9、12天,与对照组比较,联合组、BMP-2组均能提高BGP含量(P＜0.05);诱导第14天后Von Kossa染色可见细胞间散在黑色颗粒,以联合组为显著.结论:补肾中药血清联合BMP-2可有效诱导脐血间充质干细胞定向成骨分化,且具有协同效应.
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桃红四物汤含药血清对骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化的影响
目的:分析桃红四物汤含药血清对体外培养的骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的影响.方法:采用5倍等效剂量桃红四物汤灌服大鼠14d,制备含药血清,以灌服等体积0.9％氯化钠溶液制得对照血清;采用贴壁筛选法培养大鼠骨髓间充质干细胞,同时进行细胞表型鉴定,并以含药血清干预第3代BMSCs.MTT法检测细胞增殖情况,于干预后的第3、6、9、12天分别测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、干预后6d、11d、16d分别测定骨钙素(BGP)、Ⅰ型胶原(CoL-Ⅰ)、钙盐沉积量及钙化结节数,并比较两组间差异.结果:桃红四物汤含药血清明显促进外源性骨髓间充质干细胞增殖及促进骨髓间充质干细胞成骨性分化,表现在该组的ALP活性、BGP、CoL-Ⅰ、钙盐沉积量和钙化结节数高于对照组(P＜0.05).结论:桃红四物汤含药血清具有促进rBMSCs增殖和成骨性分化活性的作用.
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右归丸含药血清对骨髓间充质干细胞成骨及成脂分化的影响
目的:通过观察右归丸含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨与成脂分化的影响,为阐明中医肾主骨理论的科学内涵奠定基础.方法:体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,传二代后分为对照组、成骨诱导组、右归丸1组;对照组、成脂诱导组和右归丸2组.显微镜下观察细胞形态变化,碱性磷酸酶(ALP)染色及油红0染色,RT-PCR法测定成骨各组及对照组Runx2、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达,成脂各组及对照组过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPARγ)、C/EBP α及脂肪酸结合蛋白(aP2)的表达.Western blot法测定成骨与成脂相关蛋白的表达.结果:成骨诱导组和右归丸1组在加入诱导培养液3-4d后ALP活性明显增强.14d后,与对照组比较,Runx2、BMP-2、Col Ⅰ mRNA及蛋白表达显著上调(P＜0.05),成脂诱导组和右归丸2组PPAR γ、C/EBP α及aP2 mRNA及蛋白表达显著下调(P＜0.05),且右归丸组比单纯诱导组更明显.结论:右归丸含药血清可以诱导成骨并显著增强成骨诱导剂诱导BMSCs向成骨细胞分化,并促进成骨细胞成熟作用,同时可以抑制成脂分化.
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补肾中药促进骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展
骨组织工程为骨缺损的修复、重建的治疗带来了新的契机,目前,骨髓间充质干细胞被认为是组织工程学中首选的种子细胞.如何更有效地促进骨髓间充质干细胞的增殖与分化,对于骨组织的修复重建具有极其关键的作用.相关研究表明,基于中医学“肾主骨生髓”理论的补肾中药可促进骨髓间充质干细胞增殖以及成骨分化,为骨组织缺损的修复和重建研究提供了新的思路.文章就近年来采用补肾中药干预骨髓间充质干细胞成骨分化的相关研究作一综述.
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补肾化痰法影响骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究
目的:研究补肾化痰法对BMSCs成骨分化的影响,探讨补肾化痰法治疗骨质疏松症的可能作用机制.方法:运用全骨髓贴壁法分离培养纯化Wsitar大鼠BMSCs,诱导BMSCs成骨分化,观察补肾中药、化痰中药和补肾化痰中药分别对BMSCs成骨分化后茜素红染色及定量、碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)mRNA表达影响.结果:补肾化痰中药能促进BMSCs成骨诱导后细胞体外钙化,提高细胞内ALP活性,上调OCN-mRNA表达.结论:补肾化痰法可以促进BMSCs向成骨细胞分化.
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益肾通络复方含药血清对兔骨髓间充质干细胞体外增殖和成骨分化的影响
目的:观察益肾通络含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化的影响.方法:分离BMSCs分为对照组(A组)、低浓度组(B组)、中浓度组(C组)、高浓度组(D组)、阳性对照组(E组),干预后检测细胞增殖和成骨分化情况.结果:CCK-8:干预24 h、72 h后B、C、D组均高于A组,干预120 h后B组高于A、C、D组.ALP活性干预7、14d后B、C、D组高于A组,但低于E组.结论:益肾通络含药血清能促进BMSCs体外增殖并诱导其成骨分化.
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黄芪多糖对X线辐射骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的影响
目的 观察黄芪多糖(APS)对X线辐射骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨方向分化的影响,探讨其相关作用机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度APS对2 Gy X线辐射BMSCs细胞增殖能力的影响,以筛选佳药物浓度.将细胞分为空白组、APS组、辐射组、辐射+APS组.APS组、辐射+APS组用佳药物浓度APS提前干预3 d,辐射组、辐射+APS组用2 Gy X线进行辐射,辐射后各组细胞均加2 mL成骨诱导液继续培养,每3 d换液1次.诱导15 d后,镜下观察细胞形态,茜素红染色检测细胞中钙结节面积,Western blot检测细胞中特异性标记蛋白骨桥蛋白(OPN)和骨钙蛋白(OCN)的表达.结果 与空白组比较,辐射组细胞增殖水平明显降低(P<0.05);与辐射组比较,辐射+APS组细胞增殖水平明显升高(P<0.05);APS浓度为50μg/mL时其促进增殖作用强,为佳药物浓度.形态学观察显示,辐射组细胞中钙结晶沉积较空白组和APS组明显减少,辐射+APS组细胞中钙结晶沉积较辐射组明显增加.在成骨能力方面,与空白组比较,APS组细胞中钙结节面积有一定降低,而辐射组细胞中钙结节面积显著降低(P<0.05);与辐射组比较,辐射+APS组细胞中钙结节面积明显增多(P<0.05).在成骨特异性标记蛋白表达方面,与空白组比较,APS组细胞中OPN表达略下降,OCN表达略升高;辐射组细胞中OPN和OCN表达均明显下调(P<0.05);与辐射组比较,辐射+APS组细胞中OPN和OCN表达均显著升高(P<0.05).结论 黄芪多糖对X线辐射BMSCs向成骨方向分化的潜能具有保护作用.
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杜仲干预骨髓间充质干细胞成骨分化研究进展
杜仲是治疗骨质疏松症常用和有效的中药之一,其对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的作用机制逐渐被认识.BMSCs是成骨细胞、破骨细胞多潜能分化前体细胞,除具有多向分化潜能外,还具有免疫抑制调节特性.本文就杜仲对BMSCs成骨分化的影响进行综述,为进一步研究提供新思路.
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金叶子异槲皮苷对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响
该研究对从金叶子中分离得到的异槲皮苷的成骨活性进行了系统评价.在1×10-4,1×10-5,1×10-6,1×10-7mol·L-1异槲皮苷浓度作用下检测了MC3T3-E1细胞增殖活力和碱性磷酸酶活性;在异槲皮苷作用的第3天对MC3T3-E1碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原以及转录因子Runx2和Osterix的基因表达水平进行了检测;并通过茜素红染色的方法在第21天对MC3T3-E1进行了胞外基质矿化能力的评价.结果显示,异槲皮苷在1×10-7～1 ×10-5mol·L-1能促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化及矿化能力,上调成骨相关基因的表达,而且该作用呈现出一定的浓度依赖性,在浓度为1×10-6mol·L-1时促进作用强.在1×10 4mol·L-1时表现出明显的细胞毒性.因此,从金叶子中分离得到的异槲皮苷有一定的成骨活性,这可能是传统中药金叶子治疗骨折的主要药效成分.
关键词： 异槲皮苷 MC3T3-E1细胞 增殖 成骨分化 -
松果菊苷含药血清促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化及ZHX3表达的影响
探讨松果菊苷含药血清促进大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的作用及可能的机制.采用全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞分为3组:空白对照组、经典成骨诱导组、10％松果菊苷含药血清组.ELISA测定碱性磷酸酶和骨钙素的表达;免疫荧光和Western blot检测ZHX3蛋白的表达,RT-PCR检测ZHX3mRNA的表达.结果显示,经典成骨诱导组和10％松果菊苷含药血清组的碱性磷酸酶和骨钙素表达明显增强,与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01);10％松果菊苷含药血清组的碱性磷酸酶和骨钙素表达与经典成骨诱导组比较明显增强,有显著性差异(P＜0.01).经典成骨诱导组和10％松果菊苷含药血清组的ZHX3蛋白及mRNA表达明显增强,与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01);10％松果菊苷含药血清组的ZHX3蛋白及mRNA表达与经典成骨诱导组比较明显增强,有显著性差异(P＜0.01).10％松果菊苷含药血清可以促进体外培养的骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,其作用机制与ZHX3表达增加有关.
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淫羊藿总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程BMP-2/RunX2/OSX通路的影响
目的 探讨淫羊藿总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化过程中BMP-2/RunX2/OSX信号通路的影响.方法 将培养的第3代BMSCs随机分为对照组、实验组及抑制剂组,对照组细胞予0.2％二甲基亚砜加OS液加DMEM/F12培养基培养,实验组加入20 μg/mL淫羊藿总黄酮进行干预,抑制剂组予20 μg/mL淫羊藿总黄酮加1μg/mL NOGGIN重组蛋白干预,9天后测定碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红染色法染色并观察钙结节密度,RT-PCR法检测成骨相关蛋白(Ⅰ型胶原、骨钙蛋白及骨桥蛋白)及B MP-2/RunX2/OSX信号通路相关因子的转录表达.结果 与对照组比较,实验组经定向成骨诱导后BMSCs ALP活性增强,钙结节密度显著增大,Ⅰ型胶原、骨钙蛋白和骨桥蛋白表达量增加,成骨相关转录因子BMP-2、RunX2和OSX的表达量亦增加(P＜0.05).与实验组比较,抑制剂组BMSCs ALP活性降低(P＜0.05),钙结节密度降低,Ⅰ型胶原、骨钙蛋白及骨桥蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论 20 μg/mL淫羊藿总黄酮能通过BMP-2/RunX2/OSX信号通路促进BM-SCs定向成骨分化的进程.
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龟鹿二仙胶诱导大鼠骨髓基质干细胞成骨分化作用及对Wnt通路的影响
目的 观察龟鹿二仙胶合药血清对SD大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)成骨分化的作用及其对Wnt信号通路相关因子的影响.方法 100只3月龄雌性SD大鼠经腹腔入路切除双侧卵巢,按随机数字表法分为低剂量组、中剂量组、高剂量组和空白组,每组25只.按体表面积换算龟鹿二仙胶剂量并灌胃给药,连续7天后腹主动脉采血制备含药血清.1月龄SD大鼠全骨髓贴壁法分离BMMSCs,流式细胞法(flow cytometry,FCM)法检测F3代细胞CD45和CD90表达;不同浓度龟鹿二仙胶合药血清干预F3代BMMSCs 72 h后,FCM法检测细胞周期的影响并计算增殖指数,确定佳干预浓度.F3代细胞分为FBS组、空白组、龟鹿二仙胶组和经典诱导组,诱导培养21天后,茜素红(alizarin red staining,ARS)染色法观察BMMSCs成骨分化,RT-PCR检测成骨分化相关基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和骨钙素(osteocalcin,OC)mRNA的表达;RT-PCR和Westernblot检测Wnt5a、β-连环蛋白(β-catenin)、淋巴样增强因子-1(lymphoid enhancer factor-1,Lef-1)mRNA和蛋白的表达.结果 F3代细胞CD45阳性表达率为1.46％±0.23％,CD90阳性表达率为96.97％±3.21％;浓度为10％的龟鹿二仙胶中剂量组合药血清能显著促进BMMSCs增殖;龟鹿二仙胶组和经典诱导组ARS染色可见橘红色钙结节.与空白组及FBS组比较,龟鹿二仙胶组和经典诱导组OC和ALP mRNA表达上调(P＜0.05),Wnt5a、β-catenin mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05);与空白组、FBS组和经典诱导组比较,龟鹿二仙胶组Lef-1 mRNA和蛋白表达均升高(P＜0.05);与FBS组和空白组比较,经典诱导组Lef-1蛋白表达上调(P＜0.05).结论 龟鹿二仙胶合药血清具有促进BMMSCs增殖,诱导BMMSCs向成骨细胞分化的作用,其机制可能与调控Wnt信号通路相关因子的表达有关.
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淫羊藿苷促前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的实验研究
目的 探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)促进前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的机制.方法 采用不同浓度(10-10 ～10-5 mol/L)的ICA干预前成骨细胞MC3T3-E1 3、6、9天后采用碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性检测试剂盒测定ALP活性,确定ICA适促分化浓度.适ICA浓度干预前成骨细胞MC3T3-E1 7天后应用实时定量PCR法(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测骨形态发生蛋白(BMP)和Wnt/β-catenin信号通路相关分子(BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclinD1)基因表达.ICA分别与BMP、Wnt/β-catenin信号通路抑制剂(Noggin、DKK-1)联合干预前成骨细胞MC3T3-E1后,茜素红钙结节染色观察钙化程度以及Western blot检测BMP-2蛋白表达变化.结果 ICA促进前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化,且10-9mol/L ICA促进分化的能力强.与对照组比较,ICA能明显上调BMP和Wnt/β-catenin信号通路相关分子(BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclinD1) mRNA表达(P＜0.01).Noggin或DKK-1能抑制前成骨细胞MC3T3-E1钙化,且两者联合作用时抑制更加明显.与ICA单独作用比较,ICA与DKK1联合干预后BMP-2蛋白表达水平下降(P＜0.01).结论 ICA可能通过Wnt/β-catenin/BMP-2信号通路调控前成骨细胞MC3T3-E1的成骨分化.
