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右归丸含药血清对骨髓间充质干细胞成骨及成脂分化的影响
目的:通过观察右归丸含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨与成脂分化的影响,为阐明中医肾主骨理论的科学内涵奠定基础.方法:体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,传二代后分为对照组、成骨诱导组、右归丸1组;对照组、成脂诱导组和右归丸2组.显微镜下观察细胞形态变化,碱性磷酸酶(ALP)染色及油红0染色,RT-PCR法测定成骨各组及对照组Runx2、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达,成脂各组及对照组过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPARγ)、C/EBP α及脂肪酸结合蛋白(aP2)的表达.Western blot法测定成骨与成脂相关蛋白的表达.结果:成骨诱导组和右归丸1组在加入诱导培养液3-4d后ALP活性明显增强.14d后,与对照组比较,Runx2、BMP-2、Col Ⅰ mRNA及蛋白表达显著上调(P＜0.05),成脂诱导组和右归丸2组PPAR γ、C/EBP α及aP2 mRNA及蛋白表达显著下调(P＜0.05),且右归丸组比单纯诱导组更明显.结论:右归丸含药血清可以诱导成骨并显著增强成骨诱导剂诱导BMSCs向成骨细胞分化,并促进成骨细胞成熟作用,同时可以抑制成脂分化.
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活性氧介导铁过载对正常及辐射损伤小鼠骨髓间充质干细胞的影响
目的 探讨铁过载对正常及病态骨髓间充质干细胞(MSCs)的损伤作用及其机制.方法 将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、铁剂组、照射组、及照射加铁剂组,给予铁剂4周.分离培养MSCs,普鲁士蓝铁染色检测MSCs内铁颗粒、流式细胞仪检测可变铁池(LIP)及活性氧(ROS)水平,CCK8检测MSCs增殖能力,油红-O染色检测MSCs成脂定向分化能力、茜素红染色检测成骨定向分化能力,实时定量-PCR(real-time PCR)检测成骨相关基因表达.结果 与对照组及照射组相比,铁剂组及照射加铁剂组MSCs内明显存在铁颗粒,LIP水平明显增高(P ＜0.05);ROS水平明显增加(P＜0.05);细胞增殖能力明显下降(P＜0.05);成骨分化能力下降(P＜0.05),向成脂细胞分化能力增强.结论 铁过载可介导ROS升高影响正常及病态骨髓MSCs的增殖、定向分化能力,降低其造血支持作用,并间接引起骨损害.
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短端粒小鼠与正常小鼠间充质干细胞的分离培养比较
目的 建立从小鼠微粒骨中获取间充质干细胞(MSC)方法,并观察比较野生型小鼠(WT鼠)和端粒酶基因敲除小鼠(Terc-/-鼠)MSC生物学特性的差异.方法采用体外细胞培养技术,从小鼠自体微骨片中分离纯化WT鼠和Terc -/-鼠的同充质干细胞,通过培养和传代,研究其增殖及生长特征.结果 原代培养及传代培养显示,WT鼠自体骨间充质干细胞比Terc -/ -鼠具有活跃的增殖倍增能力.结论 从鼠的微骨片获取MSC的方法重复性好,细胞纯度和细胞数量优于以往从骨髓获取MSC的方法,Terc -/ -鼠MSC生长增殖能力明显弱于WT鼠,其机制的研究有待深入.
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间充质干细胞在急性肺损伤中的作用及机制
急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是由感染、氧中毒、机械刺激等多种原因引起的肺部弥漫性损害,病死率高,目前尚无特效的治疗方法.研究表明间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)可通过toll样受体的调节向肺损伤部位定向移行,并通过分泌可溶性细胞因子改变组织微环境,促进肺损伤的修复.随着对MSC在ALI中的作用及机制的深入研究,将为ALI找到新的治疗策略.
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间充质干细胞的免疫调节作用
间充质干细胞(MSC)已成功从动物体尤其骨髓中分离获得.干细胞,具有向多种组织和细胞如骨、脂肪、成软骨细胞等分化的潜能,这种潜能越来越引起人们关注,它可向受损的组织定向迁移以修复受损组织.体外资料研究表明,不管协同刺激信号存在与否,都具有低免疫原性.在体外MSC还具有免疫抑制活性,可抑制同种异体抗原或丝裂霉素刺激的T细胞扩增,阻止细胞毒性T细胞增殖,同时还具有调节炎性细胞的免疫活性使其向抗炎细胞分化的作用.因此,系统了解.MSC的生物学、免疫学特性将为人们深入阐明其免疫调节机制,并将其用于治疗自身免疫性病、组织修复及移植提供依据.
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诱导分化的骨髓间充质干细胞不同途径移植治疗慢性肝损伤的研究
目的 探讨诱导分化的骨髓间充质干细胞(MSC)不同途径移植治疗慢性肝损伤的可行性.方法 密度梯度离心法联合贴壁培养分离、扩增骨髓MSC,体外诱导向肝系细胞分化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学法检测肝系细胞标志,电镜观察超微结构的变化.清洁级Wistar大鼠120只,其中114只建立慢性肝损伤模型(实验组),另6只作为正常对照组.实验组8周内自然死亡12只,将剩余96只根据三种移植途径及体质量分层随机均分为门静脉移植实验组、门静脉移植对照组、脾脏移植实验组、脾脏移植对照组、尾静脉移植实验组和尾静脉移植对照组,各移植实验组移植4',6-二脒基-2'-苯基吲哚(DAPI)标记诱导分化14 d的MSC,观察移植后细胞的迁徙、定位,血清肝功能指标,肝脏组织病理学及移植效果.结果 诱导后第7、14天均检测到甲胎蛋白(AFP)mRNA表达,第14、21天检测到白蛋白(ALB)mRNA、兔抗鼠细胞角蛋白18(CK18)和肝细胞抗原表达.诱导后MSC胞体增大,胞质中含有较多线粒体、粗面内质网、高尔基体、溶酶体和糖原颗粒等.各移植实验组大鼠均发现DAPI标记细胞且丙氨酸转氨酶等肝功能指标及肝脏病变程度均较其移植对照组改善,以脾内移植途径更为显著[(98.13±8.22)U/L比(145.85±15.88)U/L,P＜0.05].结论 诱导分化的骨髓MSC通过三种移植途径均对慢性肝损伤具有修复作用,且脾内移植优于门静脉及尾静脉移植.
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肝细胞生长因子基因修饰的间充质干细胞治疗兔股骨头坏死
目的 探讨间充质干细胞(Mesenchymal stem cell, MSCs)和肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor, HGF)在治疗股骨头坏死骨缺损中的作用.方法 贴壁法分离培养兔骨髓MSCs,体外鉴定成骨和成脂肪能力.利用外科手术法建立兔双侧股骨头坏死骨缺损模型,将复合细胞的骨基质明胶材料填塞缺损区.治疗后3个月,取材进行组织学检查.MSCs和携带肝细胞生长因子基因的腺病毒载体感染的间充质干细胞(MSC/HGF)经荧光染料二醋酸琥珀酰酯羟基荧光素标记后,氯化钴处理72h,流式细胞仪分析细胞增殖情况.结果 培养的细胞在适当条件诱导下,可分化为成骨细胞和成脂肪细胞.组织学显示,单纯支架对照组仅见疏松的纤维肉芽组织填充;MSC组可见致密的纤维肉芽组织填充,其间有较多新生血管,但未见新生骨组织;基因转染细胞组多为软骨样组织填充,周围可见新骨带形成.Lane-Sandhu骨组织学评分显示,MSC/HGF具备佳的骨修复能力.三组差异显著(p<0.01).培养体系中加入氯化钴后,已增殖的MSC/HGF比例显著高于MSCs(p<0.001),提示MSC/HGF具有更强的抗低氧损伤能力.结论 在该模型中,MSC/HGF体内成骨能力优于MSCs,这种现象可能与MSC/HGF具有更强的抗低氧损伤能力有关.结果 提示肝细胞生长因子基因修饰是间充质干细胞应用于缺血性骨坏死治疗的有效途径.
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大鼠TCF4和ΔTCF4重组腺病毒载体的构建和鉴定
目的:构建腺病毒表达载体Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4(缺失了β-catenin结合位点),并初步鉴定其在间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)中的表达,为进一步研究Wnt/β-catenin信号通路在MSCs中的功能以及应用MSCs进行干细胞移植和基因治疗奠定基础.方法:以MSCs的cDNA为模板,扩增TCF4和ΔTCF4基因,将基因序列定向克隆至穿梭质粒载体pShuttle-CMV后,转化含pAdEasy-1的BJ5183感受态细胞进行同源重组,获得重组腺病毒载体Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4.PCR以及Pac Ⅰ酶切鉴定后,Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4转染QBI-293A进行包装和扩增.检测重组载体的病毒滴度以及感染MSCs的适病毒复数(multiplicity of infection,MOI),并探讨Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4在MSCs中的表达以及对迁移的影响.结果:成功构建Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4,病毒滴度分别为1.1×107 pfu/mL和1.3×107 pfu/mL,150 MOI病毒感染MSCs的效率达到90％以上;蛋白质印迹和TOPFlash/FOPFlash报告基因检测显示TCF4在MSCs中表达增加,并具有调节下游靶基因转录的活性;Boyden小室迁移实验发现感染Ad-ΔTCF4能显著抑制MSCs向LiCl的迁移能力,而感染Ad-TCF4并不能提高MSCs的迁移能力.结论:成功构建Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4,能高效感染MSCs并正确表达.
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异基因造血干细胞-间充质干细胞协同移植治疗急性粒细胞白血病(附2例报道)
目的 探讨急性粒细胞白血病异基因造血干细胞-间充质干细胞协同移植的效果.方法 培养扩增供者骨髓间充质细胞,经形态学及细胞表面分子加以鉴定,并与外周血造血干细胞协同移植给患者.结果 输注供者的MSC总数分别为2×106/kg和7.7×106/kg,中性粒细胞＞0.5×109/L以及血小板＞20×109/L的中位时间分别是12d和14d.例1出现了Ⅰ度aGVHD,Ⅱ度cGVHD,已存活11个月;例2未出现急、慢性GVHD,现已存活6个月余.结论 异基因造血干细胞-间充质干细胞协同移植可加速造血功能恢复,对GVItD的发生及严重程度有一定抑制作用,但还需加大病例数进一步观察.
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间充质干细胞移植治疗心肌梗死的研究进展
近年来,尽管对缺血性心脏病的认识、预防和治疗都取得了一些进展,但冠心病的发病率及死亡率仍居高不下.心室重构、心肌细胞数量减少是导致心力衰竭和死亡的主要原因.现有的治疗方法如药物、溶栓、经皮冠状动脉内成形和支架植入术(PTCA+S)以及外科手术等都有一定的局限性和并发症,仅能部分改善心肌血供、减少坏死心肌细胞的数量、缩小梗死范围,对已形成的瘢痕组织无能为力.
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MSCs来源exosoms与急性肾损伤研究进展
间充质干细胞来源的囊泡(mesenchymal stem cells-derived exosomes,MSCs-Exosomes)是直径大约为30～ 100 nm的双层脂质膜活性分子,可通过转移特定蛋白质、mRNA、microRNA促进急性肾损伤组织修复.Exosomes一方面参与修复受损组织信号通路的调控,另一方面其携带的RNA对促进肾小管上皮细胞增生、抑制凋亡起重要的作用,其作用机制目前尚未阐明.Exosomes内含丰富的蛋白种类,具有成为生物学标志的潜能.本文就近年来关于MSCs-exosomes生物学特性、与肾脏生理关系以及在急性肾损伤修复、调控免疫炎性反应、生物学标志等方面的研究进行总结及展望.
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不同抗肿瘤机制药物对大鼠肝癌细胞成瘤性的影响
目的 研究骨髓间充质干细胞与肝癌细胞药敏与肝癌细胞成瘤能力的相关性.方法 30只雌性清洁级SD大鼠应用二乙基亚硝胺饲喂法建立大鼠原发性肝癌模型,选取诱癌成功大鼠10只分别原代培养肿瘤细胞与间充质干细胞,MTT法用于不同作用机制抗肿瘤药物的药物敏感实验,药物作用后接种至裸鼠,观察其成瘤实验的差异,对模型大鼠间充质于细胞、肿癌细胞抑制率与化疗药物作用后肿瘤细胞移植裸鼠后的成瘤质量分别进行相关性分析.结果 5种药物药敏结果显示肝癌癌细胞与间充质干细胞药物敏感无明显相关性(P＜0.05).间充质细胞药敏实验与成瘤实验正相关.结论 间充质干细胞耐药机制与肿瘤干细胞相似,有希望代替普通肝癌肿瘤细胞进行药物敏感实验.
