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氟铝联合对MC3T3-E1细胞Runx2、Osterix mRNA表达的影响
目的 观察氟铝单独及联合对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化及Runx2、Osterix mRNA表达的影响.方法 在细胞培养液中加入50μmol/L氟化钠或/和5μmol/L氯化铝,观察MC3T3-E1细胞增殖和分化能力,用RT-PCR法测定MC3T3-E1细胞Runx2和Osterix mRNA表这的情况.结果与对照组相比.氟铝联合染毒可显著提高MC3T3-E1细胞增殖和分化能力(P<0.05),MC3T3-E1细胞Runx2和Osterix mRNA的表达水平也显著提高(P<0.05),且氟铝具有协同作用(P<0.05).结论 氟铝联合通过刺激成骨细胞增殖、分化,提高成骨细胞Runx2和Osterix基因表达水平,从而促进骨形成.
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沉默Cx43基因对左归丸调控MC3T3-E1细胞Runx2、Osterix表达的影响
目的:研究沉默Cx43基因对左归丸含药血清调控MC3T3-E1细胞成骨相关基因Runx2、Osterix表达的影响.方法:采用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默Cx43基因,培养细胞分为正常对照(A)组、基因沉默(B)组、含药血清(C)组、中药加基因沉默(D)组.RT-PCR法检测培养第7、14、21天细胞Runx2、Osterix mRNA表达情况,进行组间对比.结果:左归丸含药血清可以促进MC3T3-E1细胞分化,显著增加分化中后期Runx2,尤其是Osterix mRN A的表达,A、C组比较,P＜0.05或P＜0.01.沉默Cx43基因导致细胞分化中后期Runx2、Osterix mRNA表达显著下降,A、B组比较,P＜0.05;同时导致左归丸上述作用显著下降,C、D组比较,P＜0.05.结论:沉默Cx43基因导致左归丸含药血清促MC3T3-E1细胞Runx2、Osterix mRNA表达的作用显著下降.
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金叶子异槲皮苷对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响
该研究对从金叶子中分离得到的异槲皮苷的成骨活性进行了系统评价.在1×10-4,1×10-5,1×10-6,1×10-7mol·L-1异槲皮苷浓度作用下检测了MC3T3-E1细胞增殖活力和碱性磷酸酶活性;在异槲皮苷作用的第3天对MC3T3-E1碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原以及转录因子Runx2和Osterix的基因表达水平进行了检测;并通过茜素红染色的方法在第21天对MC3T3-E1进行了胞外基质矿化能力的评价.结果显示,异槲皮苷在1×10-7～1 ×10-5mol·L-1能促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化及矿化能力,上调成骨相关基因的表达,而且该作用呈现出一定的浓度依赖性,在浓度为1×10-6mol·L-1时促进作用强.在1×10 4mol·L-1时表现出明显的细胞毒性.因此,从金叶子中分离得到的异槲皮苷有一定的成骨活性,这可能是传统中药金叶子治疗骨折的主要药效成分.
关键词： 异槲皮苷 MC3T3-E1细胞 增殖 成骨分化 -
NR2F2促进小鼠MC3T3-E1前成骨细胞增殖
目的 探讨NR2F2基因对小鼠前成骨细胞增殖的影响.方法 用实时定量PCR检测mRNA表达量.MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,ELISA-Brdu法检测细胞DNA合成速度.结果 在小鼠MC3T3-E1前成骨细胞增殖速度加快时,NR2F2基因的表达增高至对照的4.57±0.30倍(P<0.01).过表达NR2F2基因促使MC3T3-E1细胞增殖速度加快,细胞数量增加(P<0.01),细胞周期中S期细胞比例明显升高,为对照组的2倍,G<,2>/M期比例也有增加(P<0.05).过表达NR2F2基因使MC3T3-E1细胞的Brdu掺入率增高,DNA的合成加速(P<0.01).结论 NR2F2使S期细胞比例增加,促进小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖速度.
关键词： NR2F2 MC3T3-E1细胞 细胞增殖 -
Tmed2促进体外小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖
目的 研究Tmed2基因对小鼠前成骨细胞增殖的影响.方法1)分别在小鼠MC3T3-E1细胞中过表达和抑制Tmed2,检测细胞增殖情况.2)用雌激素处理细胞后,检测细胞的增殖及Tmed2基因的表达量.荧光实时定量PCR检测mRNA水平,MTS法检测细胞活力和增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测蛋白水平.结果 过表达Tmed2使MC3T3 -E1细胞的增殖速度加快,细胞周期中S期细胞比例明显增加,且Cyclin A的表达升高.而抑制Tmed2基因表达使MC3T3-E1细胞的增殖速度减慢.雌激素处理使细胞增殖速度加快的同时,Tmed2基因的表达显著增高.结论 Tmed2通过上调Cyclin A的表达,使S期细胞比例增加,加快小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖.此外,Tmed2的表达受雌激素的调控,可能参与雌激素促进MC3T3-E1细胞增殖的作用.
关键词： Tmed2 MC3T3-E1细胞 细胞增殖 雌激素 -
Txndc5介导雌激素诱导的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖加快
目的 研究Txndc5基因在小鼠前成骨细胞增殖中的作用.方法 用雌激素诱导小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1,或在MC3T3 -E1细胞中分别用质粒载体过表达Txndc5和用siRNA抑制Txndc5的表达后,Western blot检测Txndc5和细胞周期蛋白水平,荧光实时定量PCR检测Cyclin A的mRNA水平,MTS法和细胞计数法检测细胞增殖速度,流式细胞术检测细胞周期.结果 雌激素诱导MC3T3-E1增殖加快时,Txndc5的蛋白水平亦上升.抑制Txndc5的表达阻止雌激素的促细胞增殖作用.过表达Txndc5使MC3T3-E1细胞增殖速度加快,S期细胞比例增加,同步化细胞进入细胞周期18 h时,过表达Txndc5组Cyclin A的表达升高,且S期细胞比例为18.69％±4.08％,而对照组仅为8.15％±3.68％.抑制Txndc5的表达刚使MC3T3-E1细胞增殖速度减慢,S期细胞比例减少,CyclinA的表达下降.抑制Cyclin A的表达减弱Txndc5的促细胞增殖作用.结论 Txndc5通过上调CyclinA的表达介导雌激素的促前成骨细胞增殖作用.
关键词： Txndc5 MC3T3-E1细胞 细胞增殖 雌激素 -
MC3T3-E1细胞与多组分纳米羟基磷灰石基三维复合支架材料的相容性
目的 观察MC3T3-E1细胞在复合支架材料上的黏附、增殖及形态,评价多组分纳米羟基磷灰石基三维复合支架材料的生物相容性.方法 采用仿生学方法,将壳聚糖、羟基磷灰石、明胶、果胶按照一定比例制作成多组分纳米羟基磷灰石基三维复合支架材料.在复合支架材料上接种MC3T3-E1细胞,通过倒置相差显微镜、HE染色、扫描电镜、四甲基偶氮唑盐(MTT)法、荧光素二乙酸酯(FDA)及Hoechst33258荧光染色法检测三维复合支架材料的生物相容性.结果 多组分纳米羟基磷灰石基三维复合支架材料呈三维多孔状,MC3T3-E1细胞接种在材料上培养,贴附生长良好,呈多角形或梭形,形态饱满;MTT结果显示,材料组和空白对照组各时间段的吸光度(A)值无统计学意义.结论 多组分纳米羟基磷灰石基三维复合支架材料具有良好的形态结构、理化特性和优越的细胞相容性,是一种很有潜能的骨组织工程材料.
关键词： 壳聚糖 纳米羟基磷灰石 MC3T3-E1细胞 生物相容性 四甲基偶氮唑盐法 -
柚皮苷对地塞米松诱导的小鼠MC3T3-E1细胞凋亡及线粒体凋亡途径的影响
目的 探讨柚皮苷对地塞米松诱导下MC3T3-E1细胞增殖、凋亡的影响及可能的分子机制.方法 体外培养小鼠MC3T3-E1细胞,实验分5组:空白对照组(NC)、地塞米松组(DEX)、1μmol/L柚皮苷+地塞米松组(1+DEX)、10μmol/L柚皮苷+地塞米松组(10+DEX)和50μmol/L柚皮苷+地塞米松组(50+DEX).药物干预后,采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞技术检测各实验组细胞凋亡情况;qPCR法检测线粒体凋亡通路相关基因Apaf-1、Caspase-9 mRNA相对表达量;Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)及Cleaved-caspase-9蛋白表达.结果 与NC组相比,地塞米松组细胞增殖受到抑制(P<0.05),而不同浓度的柚皮苷以剂量依赖方式促进细胞增殖(P<0.05).流式细胞技术检测结果显示,DEX组细胞早期凋亡率增加(P<0.05),而同时加柚皮苷干预组细胞凋亡率与DEX组相比明显减少(P<0.05).qPCR结果显示,DEX组Apaf-1、Caspase-9 mRNA表达升高(P<0.05),而同时加柚皮苷干预组Apaf-1、Caspase-9 mRNA表达下降.WB结果显示DEX组Cyt-C、Cleaved-Caspase-9表达量增高(P<0.05).相反,同时加柚皮苷干预组Cyt-C及Cleaved-Caspase-9表达量减少(P<0.05).结论 柚皮苷可以抑制地塞米松诱导的小鼠MC3T3-E1细胞凋亡,其机制可能与下调线粒体凋亡途径中Cyt-C、Apaf-1凋亡酶激活因子的表达,抑制Caspase-9凋亡蛋白的激活有关.
关键词： 小鼠 柚皮苷 地塞米松 MC3T3-E1细胞 线粒体凋亡途径 -
Cu2+对MC3T3-E1细胞增殖分化影响及对OPG、MEPE表达的影响
目的 观察Cu2+对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、分化以及OPG与MEPE表达.方法 采用不同浓度1×10(-4～-6)mol/L Cu2+作用于MC3T3-E1细胞,分别在24、48、72、96 h后采用MTT法检测Cu2对细胞增殖的影响；ALP(碱性磷酸酶)试剂盒检测细胞培养液中ALP活性；RT-PCR方法检测1×10(-4～-6) mol/L Cu2+作用下细胞中OPG和MEPE的mRNA表达水平,探讨MC3T3-E1细胞增殖分化的分子机制.结果 作用48 h和96 h时,1×10-6mol/L Cu2+明显促进MC3T3-E1细胞增殖；作用24 h时,此浓度对细胞增殖无影响；作用72 h时,1×10-6mol/L Cu2+明显抑制细胞增殖；1×10-4mol/L、1×10-5mol/L的Cu2+对MC3T3-E1细胞增殖无影响或抑制其增殖.ALP试剂盒检测1 × 10-6mol/LCu2+在作用24 h时,对细胞分化无影响,其他时间均可促进细胞分化；1×10-4mol/L的Cu2+抑制细胞分化,1×10-5 mol/LCu2+在作用96 h时,可显著促进MC3T3-E1细胞分化,其他时间对细胞分化无影响.琼脂糖凝胶电泳图片可见1×10(-4～-6)mol/LCu2+作用于MC3T3-E1细胞48 h时,OPG和MEPEmRNA均有表达.实时荧光定量PCR结果表明,在CU2+浓度为1×10-6mol/L作用48 h时OPG与MEPEmRNA明显增加.结论 作用48 h时,1×10-6 mol/L Cu2+可以促进MC3T3-E1细胞增殖和分化,其机制与OPG、MEPEmRNA相关.
关键词： Cu2+ MC3T3-E1细胞 增殖与分化 OPG MEPE -
去铁酮对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1生物学活性的影响
目的 研究铁螯合剂去铁酮(deferiprone,DFP)体外对成骨细胞增生、分化以及细胞铁代谢的影响.方法 体外培养小鼠前成骨样细胞MC3T3-E1,在10 mmoL/L β-甘油磷酸和50 μg/mL抗坏血酸的诱导下,分化为成骨细胞,同时用不同浓度(25、50、100 μmol/L) DFP干预,用CCK-8法检测细胞的增生,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性试剂盒检测细胞ALP活性,实时定量PCR检测细胞膜转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)mRNA的表达.结果 MC3T3-E1细胞增生结果显示,DMSO溶剂组、对照组(0 μmol/L)和DFP 25、50、100 μmol/L组A值分别为1.36±1.10、1.41±0.09、0.78±0.06、0.68±0.03、0.46±0.01;ALP活性检测结果显示,对照组(0 μmol/L)和DFP 25、50、100 μmol/L组ALP活性值分别为0.83±0.05、0.75±0.04、0.64±0.03、0.51±0.03;TfR mRNA表达检测结果显示,对照组(0 μmol/L)和DFP 25、50、100 μmol/L组表达比分别为1、1.16±0.05、1.32±0.06、2.30±0.11.MC3T3-E1细胞的增生、ALP活性随DFP干预浓度的增加呈剂量依赖性下降 (P<0.05),TfR mRNA的表达随DFP干预浓度的增加呈剂量依赖性上升 (P<0.05).结论 DFP可能通过螯合成骨细胞内的铁离子抑制其增生、分化.
关键词： 去铁酮 MC3T3-E1细胞 铁代谢 骨质疏松 -
VEGF通过MAPK途径上调MC3T3-E1及C2C12细胞中Cbfal基因的表达
目的 研究生长因子VEGF对Cbfal的调节作用及其与MAPK信号传导通路的关系.方法 采用瞬时转染技术和RT-PCR方法.结果 在MC3T3-E1细胞中,VEGF(1×10-8～1×10-6g·L-1)作用24小时能够增加Cbfal基因启动子活性,相对荧光素酶活性分别为对照组的1.29(P<0.05),1.28(P<0.01)和1.40(P<0.05).而加入PD98059(10μmol/L)后不但抑制了Cbfal基因启动子活性的基础表达,而且完全阻断了VEGF所诱导的Cbfal基因启动子活性的增加(P<0.05).C2C12细胞中不同浓度的VEGF处理组,其相对荧光素酶活性与对照组相比未见显著性差异.MC3T3-E1细胞中,VEGF处理前后,MC3T3-E1细胞中Cbfal基因mRNA的表达水平未见显著变化.C2C12细胞中,VEGF处理后,第2天和第3天Cbfal基因mRNA的表达由处理前的32.63±4.41,分别增加至46.56±2.70(P<0.01)和50.35 ±5.62(P<0.05).PD98059阻断了C2C12细胞中VEGF对Cbfal基因mRNA表达的上调作用.结论 VEGF部分通过MAPK信号传导通路增加MC3T3-E1和C2C12细胞中小鼠Cbfal基因启动子活性及mRNA的表达.
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硫辛酸对体外培养的MC3 T3－E1成骨细胞骨形成的影响
目的：研究硫辛酸对体外培养的H2 O2处理后的小鼠前成骨细胞MC3T3－E1骨形成的影响，并初步探讨硫辛酸促成骨细胞骨形成的作用机制。方法在体外培养的MC3T3－E1培养基中分别加入不同浓度（0．1、0．2和0．4 mmol／L）的硫辛酸作用20 h，接着加入1 mmol／L H2 O2作用4 h，用MTT法检测药物对成骨细胞活力的影响；用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase， ALP），细胞丙二醛（malondialdehyde， MDA），超氧化物歧化酶（superoxide dismutase， SOD），乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase， LDH）试剂盒检测成骨细胞内ALP、 SOD、 LDH活性和MDA含量；用Von Kossa染色法检测矿化结节数目；用real time－PCR方法检测成骨细胞内Ⅰ型胶原（ collagen－Ⅰ， COL－Ⅰ）、骨钙素（ osteocalcin， OCN）、转录因子Osterix、骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein－2， BMP－2）、 NADPH氧化酶4（NADPH oxidase4， Nox4）、护骨素（osteoprotegerin， OPG）、细胞核因子κB受体活化因子配基（ receptor activator nuclear factor－kappa B ligand， RANKL） mRNA表达，用流式细胞仪检测细胞内活性氧（ reactive oxygen species， ROS）水平。结果硫辛酸可增加ALP活力和矿化结节数目，促进骨形成相关指标COL－Ⅰ、 Osterix、 BMP－2和OCN mRNA表达（ P＜0．05）；硫辛酸提高H2 O2损伤后MC3T3－E1细胞活力，上调细胞内SOD活性并降低细胞中MDA含量和上清中LDH活性；硫辛酸上调MC3T3－E1细胞OPG／RANKL比值及下调ROS和Nox4 mRNA表达水平（P＜0．05）。结论硫辛酸在一定浓度范围内（0．1～0．4 mmol／L）促进H2 O2处理后MC3T3－E1细胞的骨形成过程，这种促进作用是通过下调Nox4和ROS水平，降低氧化应激发挥抗氧化作用上调OPG／RANKL实现的。
关键词： 硫辛酸 MC3T3-E1细胞 抗氧化 骨质疏松 -
不同浓度rhBMP-2对MC3T3-E1细胞增殖、ALP活性及成骨分化的影响
目的 研究不同浓度rhBMP-2对MC3T3-E1细胞增殖、ALP活性及成骨分化的影响规律.方法 MC3T3-E1细胞接种到培养板24 h后,试验组分别加入1.25、2.5、5、10μg/ml的rhBMP-2进行药物干预,对照组加入全培.试验组应用CCK-8法检测细胞增殖活性,PNPP法检测细胞ALP活性,RT-PCR法检测成骨标志蛋白mRNA的表达情况.结果 rhBMP-2浓度为2.5 μg/ml时开始促进细胞的增殖(P＜0.05),rhBMP-2浓度为5μg/ml时促进作用达到峰值(P＜0.05).rhBMP-2浓度为2.5 μg/ml时ALP活性显著提高(P ＜0.05);rhBMP-2浓度为5μg/ml和10 μg/ml时,ALP活性较浓度为2.5 μg/ml时继续升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).ALP、COL1-α以及转录因子RUNX-2的mRNA含量均在加入浓度5μg/ml rhBMP-2后明显升高(P＜0.05),继续加大rhBMP-2浓度,mRNA含量没有明显增加.结论 在研究范围内,rhBMP-2对MC3T3-E1的影响呈浓度依赖性.
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miR-137靶向作用RUNX2调控MC3T3-E1细胞成骨分化
目的 探讨miR-137对RUNX2的靶向作用及其对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.方法 通过软件预测miR-137与成骨标志基因RUNX2的结合位点.检测MC3T3-E1细胞诱导成骨分化过程中miR-137的表达变化.转染miR-137 mimics或miR-137 inhibitor后,再诱导MC3T3-E1细胞成骨分化,检测成骨分化标志物(RUNX2、ALP、OPN、OCN及OSX)表达变化.结果 经软件预测,miR-137与靶基因RUNX2有结合位点.MC3T3-E1细胞成骨分化过程中,miR-137表达下调.转染miR-137mimics的MC3T3-E1细胞成骨标志基因表达受到抑制,而转染miR-137 inhibitor组成骨标志基因呈不同程度表达上调.结论 miR-137通过靶向作用RUNX2基因调控MC3T3-E1细胞成骨分化.
关键词： miR-137 Runx2 MC3T3-E1细胞 成骨分化 -
白桦脂醇拮抗地塞米松诱导成骨细胞内脂质积聚影响细胞凋亡的实验研究
目的 观察白桦脂醇和地塞米松共同作用于小鼠MC3T3-E1细胞后,内源性脂质蓄积与细胞凋亡中的关系.方法 以MC3T3-E1细胞为研究对象,采用白桦脂醇和地塞米松共同作用于MC3T3-E1细胞,测定细胞内甘油三酯含量;NileRed荧光染色观察脂质蓄积情况;流式细胞技术测定成骨细胞凋亡率;ELISA法检测Caspase-3酶活性;采用Spearman等级相关进行脂质含量与成骨细胞凋亡相关性分析.结果 白桦脂醇和地塞米松共同作用于小鼠MC3T3-E1细胞后,0.5μmol/L地塞米松(B组)与1.0 μmol/L地塞米松组(C组)较空白组(A组),细胞凋亡率、Caspase-3酶活性均明显增高(P＜0.05),细胞内甘油三酯含量明显增加.2.0 μg/ml白桦脂醇作用细胞后,地塞米松所致的细胞凋亡率上升与Caspase-3酶活性升高受到明显抑制,同时细胞内的甘油三酯蓄积降低.Spearman等级相关分析表明地塞米松诱导后的成骨细胞内脂质含量与细胞凋亡率呈正相关,r =0.412,P＜0.05.结论 白桦脂醇可显著减轻地塞米松诱导的成骨细胞内脂质蓄积,降低细胞凋亡率;提示地塞米松所致细胞凋亡至少部分与细胞内脂质蓄积有关.
关键词： 地塞米松 白桦脂醇 MC3T3-E1细胞 脂质蓄积 细胞凋亡 -
铁调素对MC3T3-E1小鼠成骨细胞骨保护素和骨钙素基因表达的影响
目的 研究铁调素对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞骨保护素(OPG)和骨钙素(BGP)基因表达的影响.方法 小鼠MC3T3-E1细胞体外培养后,以不同浓度(100 nmol/ml,200 nmol/ml,300 nmol/ml)的铁调素作用72h,用RT-PCR方法检测OPG、BGP mRNA的表达水平.结果 RT-PCR检测显示 在不同浓度铁调素干预后,各组均有OPG mRNA和BGP mRNA表达;不同浓度组的OPG mRNA和BGP mRNA表达光密度比值不同,组间密度比值比较存在显著性差异(P<0.05).结论 铁调素可上调MC3T3-E1细胞OPG及BGP mRNA表达,铁调素浓度增加转录水平逐渐增加,结果显示有浓度依赖性.
关键词： 铁调素 骨钙素 骨保护素 MC3T3-E1细胞 RT-PCR -
ERK5信号通路介导流体剪切力对 MC3 T3-E1 成骨细胞MMPs、TIMPs表达的影响
目的 观察流体剪切力( fluid shear stress, FSS)作用下, MC3T3-E1 成骨细胞中细胞基质金属蛋白酶( matrix metalloproteinases,MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)的表达情况,并探讨 ERK5 信号通路在其中的作用.方法 对MC3T3-E1 成骨细胞进行不同的处理,分为正常组、XMD8-92 组、FSS组和FSS+XMD8-92组,对FSS组施加12 dyn /cm2流体剪切力,采用蛋白免疫印迹法分别检测P-ERK5、ERK5、 MMPs和TIMPs 蛋白水平的变化.结果 生理强度(12 dyn/cm2)的流体剪切力作用于MC3T3-E1成骨细胞45 min后能显著上调MMPs的表达,下调TIMPs的表达,但此效应可被 ERK5 高选择性抑制剂 XMD8-92 阻断.结论 ERK5 信号通路调控流体剪切力对成骨细胞MMPs、TIMPs蛋白的表达.
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辐射对成骨细胞系MC3T3-E1细胞增殖和功能基因表达的影响
目的 为了深入了解辐射对成骨细胞的影响,探讨成骨细胞系MC3T3-E1细胞受到辐射后的功能变化.方法 将MC3T3-E1细胞体外培养,诱导成骨前体细胞和成骨细胞,经137Csγ射线照射后,用MTT法分析细胞的存活率,用实时定量PCR方法分析ALP、RunX2和M-CSF基因的mRNA表达.结果 MTT实验表明,随照射剂量增加,正常MC3T3-E1细胞生长率明显下降,而经过诱导分化的MC3T3-E1细胞生长率变化越来越不明显.实时定量PCR实验结果表明,经过137Csγ射线照射后,MC3T3-E1细胞的ALP,RunX2和M-CSF基因的mRNA表达出现明显的降低;经过诱导分化为成骨前体细胞的,ALP,RunX2和M-CSF基因的mRNA表达与相应的正常组相比没有明显的规律变化;经过诱导进一步分化成为成骨细胞的,ALP和RunX2表达下降,M-CSF表达呈现升高趋势.结论 辐射抑制早期成骨细胞的增殖、发育和分化.随着成骨细胞的分化,辐射对成骨细胞的增殖和生长发育影响减小,但是对成骨细胞发挥调节破骨细胞功能的作用并没有减少.
关键词： MC3T3-E1细胞 辐射 ALP Runx2 M-CSF -
珍珠粉对 MC3T3-E1细胞增殖、分化、矿化及骨相关基因表达的影响
目的：研究珍珠粉对MC3T3-E1细胞成骨增殖、分化、间质矿化及凋亡的影响，并初步探讨其作用机制。方法在体外培养的MC3T3-E1细胞中分别加入珍珠粉和低钙珍珠粉，采用MTT法及碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）试剂盒检测其对MC3T3-E1细胞增殖及分化的影响；Von Kossa染色法观察矿化结节的形成；RT-PCR检测细胞中转录因子（ Runt-related transcription factor II，Runx2）、骨钙素（Osteocalcin，OC）、骨保护因子（Osteoprotegerin， OPG）及核因子-κB受体活化因子配体（Receptor activator of NK-κB ligand， RANKL）mRNA的表达；流式细胞术检测血清饥饿诱导的细胞凋亡。结果珍珠粉及低钙珍珠粉在一定浓度范围内，能促进MC3T3-E1细胞成熟期的ALP合成分泌和矿化结节的形成，并对Runx2及OC基因表达具有明显促进作用，可降低RANKL/OPG的比率，明显改善血清饥饿诱导的成骨细胞凋亡。结论珍珠粉及低钙珍珠粉对MC3T3-E1细胞分化成熟过程有显著的促进作用，前者作用显著强于后者，说明珍珠粉中钙成分对MC3T3-E1细胞分化成熟起到主要作用。
关键词： 珍珠粉 MC3T3-E1细胞 成骨活性 -
模拟微重力条件下奥金肽对MC3T3-E1前成骨细胞增殖的影响
目的：研究模拟微重力（simulated microgravity，SMG）条件下奥金肽（osgentide， OST）对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖功能的影响。方法在正常细胞培养环境下，利用MTT法检测6种OST化合物对MC3T3-E1细胞增殖的影响，从中筛选出有效作用浓度的化合物，进一步利用 MTT 实验及流式细胞术分别检测 SMG 条件下1 nmol／L OST5对MC3T3-E1细胞的增殖效应及细胞周期的分布。结果在正常细胞培养环境下，1 nmol／L OST5对MC3T3-E1细胞的增殖具有显著促进作用（P＜0．01）。 MTT实验结果表明，与正常细胞培养环境相比，MC3T3-E1细胞在SMG条件下其增殖受到显著抑制。在SMG条件下，用1 nmol／L OST5处理MC3T3-E1细胞（ OST-SMG）3 d，流式细胞术检测结果表明，SMG促使更多的MC3T3-E1细胞进入G1期。1 nmol／L OST5处理MC3T3-E1细胞后S期比例比SMG条件下显著提高（P＜0．05），表明OST5能够促进DNA合成。结论在SMG条件下，OST5能够促进成骨细胞的增殖，为研究OST5对模拟微重力相关的骨丢失防治提供了理论依据。
关键词： 模拟微重力 奥金肽 MC3T3-E1细胞 增殖
